*Sumrio P4:Observao de bactrias do biofilme oralPreparao de
esfregaoTcnicas de colorao:Coloraes simples (azul de
metileno)Coloraes diferenciais (Colorao de Gram)
*Tcnicas de colorao Permitem revelar a forma, a dimenso e os
componentes das clulas bacterianas, bem como, os aspetos bioqumicos
da sua estrutura.
Permitem observar clulas bacterianas em microscopia de campo
claro.
Como o ndice de refrao do protoplasma bacteriano difere muito
pouco do meio circundante, difcil o exame direto de preparaes no
coradas, a no ser que se utilizem tcnicas especiais de
iluminao.
*Tcnicas de colorao Preparao do esfregao
Fixao do esfregao
Colorao
Observao ao microscpio
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Preparao e fixao do esfregaoPreparado sobre uma gota de gua
abrangendo uma superfcie de 1 cm2As lminas usadas devem ser lavadas
com uma mistura de lcool-ter (1:1)Fixao pelo calor em movimentos
circulares.Evitar aquecer demasiado a preparao para no destruir as
clulas
*
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Em caso de incndio.
CobertorExtintorNO APAGAR O FOGO COM GUAManter a calma!! os
movimentos rpidos alimentam a combustoTapar o frasco e a
lamparina
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*Azul de metileno
Mtodo de colorao simples utilizao de um nico corante.Corante
bsico ou catinico - fixado pelas estruturas mais negativas da clula
como os cidos nucleicos e a parede celular das bactrias
*
*Colorao com azul de metilenoCorar com azul de metileno durante
1 minutoLavar com guaSecar com cuidado e observar ao
microscpiohttp://www.bigroom.org/wordpress/?m=200704
*
*Colorao de GramGram +Gram -
Colorao diferencialDistingue bactrias Gram + de bactrias
Gram-Indispensvel na identificao bacteriana
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Bactrias Gram+ e Gram-
Composio diferente da parede celularGram+: Parede homognea e
espessa, formada essencialmente por peptidoglucano, baixa
percentagem de lipoprotenas.Gram-: Parede fina, camada de
peptidoglucano fina, camada externa complexa, formada por
lipoprotenas e polissacardeos
*
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Colorao de GramVioleta de cristal1 minutoLugol (iodo)1
minutolcool
30-60 segundosSafranina
30-60 segundosdH2OdH2O
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*Trabalho a realizar:Isolamento de colnias (biofilme
oral):Repicagem (riscado em placa)
Preparao de esfregao a partir de meio lquido e slido
