第十节 免疫血清学技术

概念： 抗原与抗体在体内或体外均发生特异性结合反应，因为抗体主要来自血清，在体外进行的抗原抗体反应称为血清学反应或免疫血清学技术。

一、 概述 按抗原抗体反应性质不同分为：

凝聚性反应：凝集试验、沉淀反应

标记抗体技术：荧光抗体、酶标抗体、生物素标记抗体、

同位素标记抗体、其他标记抗体技术

有补体参与的反应：补体结合反应、免疫粘附血凝试验

中和反应：病毒中和试验、毒素中和试验

免疫转印（ Western Blot ）

1 、 血清学反应的一般特点

特异性与交叉性： 特异性：血清学反应具有高度的特异性，如抗猪瘟病毒抗体只能与

猪瘟病毒结合，不能与伪狂犬病病毒结合。

交叉性：两种抗原之间含有共同抗原的时侯，有时也发生交叉反应，

如伤寒沙门氏菌与霍乱沙门氏菌常发生交叉反应。

抗原抗体结合机理：以非共价键结合

结合力（亲和力）：抗原决定族和抗体结合点之间形成的非共价键的数

量、性质、距离。

结合的可逆性

Ab + Ag Ab-Ag 复合物

最适比与带现象：参与反应的抗原抗体的比例

反应的二阶段性： 第一、抗原抗体发生特异性反应，

第二、抗原抗体反应的可见阶段：凝集、沉淀、补体结合。

影响反应的因素 电解质、温度、酸碱度

二、 凝聚性试验

1. 凝集反应 : 细菌红细胞等颗粒状抗原与相应抗血清在电解质存在下 ,

产生可见的颗粒凝集现象。

直接凝集试验： 玻片法：鸡白痢玻片凝集 试管法：布氏杆菌试管凝集

间接凝集试验： 间接血凝试验：猪瘟间接血凝试验 乳胶凝集试验：猪伪狂犬病乳胶凝集试验 协同凝集试验： SPA + Ab SPA-Ab + Ag SPA-Ab-Ag

2. 沉淀试验： 可溶性抗原（毒素、病毒、细菌裂解液）与相应抗体结合 , 在电解质存在情况下，产生可见的沉淀物。

（ 1 ）环状沉淀反应： 小口径试管中进行，先加已知血清 0.1 ml ，然后轻轻加入等量抗原，

使形成二个界面，数分钟后，二个界面间形成乳白色的沉淀环。 如：炭疽环状沉淀反应 : Ascoli 反应

（ 2 ）琼脂扩散试验： 琼脂是一种含有硫酸基的多糖体，高温时溶于水，冷却后凝固，形成凝胶，呈多孔结构，充满水分，允许各种抗原抗体分子自由扩散。二者于比例适当处相遇，发生沉淀，形成可见的沉淀带。

包括： 单向单扩散、单向双扩散、双向单扩散、双向双扩散 如：马立克氏病 法氏囊病的诊断

（ 3 ）免疫电泳技术 琼脂双扩散与电泳技术结合而成。

包括：免疫电泳 对流免疫电泳 火箭电泳

Ab AbAg Ag

+

_

对流免疫电泳

三、 抗体标记技术

Ab + Ag Ab-Ag ( 含量低时不可见 )

　 荧光素 　　 酶　　 放射性同位素 生物素 - 亲和素

标记抗体或抗原，进行抗原抗体反应的一类技术

抗体标记技术包括：

　 荧光素标记抗体技术 　　 酶标记抗体技术　　 生物素 - 亲和素标记抗体技术 放射性同位素标记技术

其他标记技术：胶体金标记技术

标记核酸探针技术

……ATGCCTTGAC……

……TACGGAACTG……

TACGGAACTG — 放射性同位素

四、 补体结合反应

补体结合试验（ Complement fixation ）：

是应用蛋白质、多糖、类脂质、病毒等可溶性抗原与相应抗体结合后，其抗原抗体复合物可结合补体，但肉眼看不见，再加入致敏红血球，即可根据是否溶血判断抗原抗体的存在。

有 5 个要素： 抗原（待检） 抗体 补体 红细胞 溶血素（抗红细胞抗体）

Ag Ab+ CAg Ab +C

Ag Ab

补体结合反应的基本原理

Ag? Ab

C

E H

Ag+ AbC

E H

+ 不溶血

Ag- Ab

C

E H

Ag- Ab

CE H

溶血

五、 中和试验

抗原和相应抗血清按适当比例混合作用后可被中和而失去毒力，接种实验动物、组织细胞、鸡胚而不出现致病作用。

1. 终点法中和试验（ End-point neutralizing test ） :

固定病毒稀释血清法：将已知病毒量固定（ 200 TCID50 ），把血清作倍比稀释，测定血清中抗体的中和效价。

固定血清稀释病毒法：将病毒原液作 10倍递进稀释，分装两列试管，第一列加等量阴性血清（对照组），第二列加待检血清（中和组），混和后置 37 1h ℃ ，分别接种动物（鸡胚、细胞培养），记录死亡数，用Reed 法 Muench 计算半数致死量（ LD50 ）。

2. 空班减少试验 ( Plague reduction test) ：

应用空斑技术使空斑数减少 50% 的血清量作为中和滴度。

将已知空斑单位（ PFU ）的病毒稀释成每一接种剂量含100 PFU ，加等量递进稀释的血清， 37 1h ℃ 。接种细胞后，覆盖琼脂，培养数天后，计算空斑数，计算血清的中和滴度。

血清学反应的应用

1. 抗原抗体的快速检测

2. 生物活性物质的超微定量

3. 抗原抗体在细胞和亚细胞水平定位

4. 微生物的鉴定与分析

5. 血型鉴定

6. 妊娠诊断，检测激素水平

7. 内分泌的研究

8. 遗传育种方面的应用