第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析

本类药物多数具有芳酸基本结构，即芳基取代羧酸结构。根据芳基和羧酸的取代位置及芳基上的取代基的不同，可分为水杨酸类、邻氨基苯甲酸类、邻氨基苯乙酸、芳基丙酸、吲哚乙酸及苯并噻嗪甲酸等六类。

结构特点：游离羧基和苯环、酯基等。

一、典型药物与结构特点

第一节、典型芳酸类非甾体抗炎药物结构与性质

HN

ONa

Cl

Cl

O

COOH

OH

双氯芬酸钠

NO

CH 3

Cl

MeO

OH

O

吲哚美辛

水杨酸 阿司匹林

布洛芬

NHCOCH3

OH

对乙酰氨基酚

CH3O

HO

二、主要性质 1 、酸性：游离羧基 pka=3～ 6，芳酸酸性强；脂肪酸较弱

2 、水解性：酯基、酰胺基 3 、吸收光谱特性：含共轭体系 4 、基团或元素特性

第二节、鉴别试验（一）与三氯化铁反应

1、水杨酸及其盐

OH

COOH

6 + FeCl3 12HClO-

COO-

2Fe

3

Fe +

反应条件：弱酸性（ pH46）

反应现象：紫堇色

2 、阿司匹林需加热水解后与 FeCl3反应方法：取本品 0.1g 煮沸放冷 加水 10ml 加 FeCl3 1d

OCOCH3

COOH

+ H2O

12HClO-

COO-

2Fe

3

Fe +

OH

COOH

+CH3COOH

OH

COOH

+FeCl3

显紫堇色

3 、酚羟基反应

NHCOCH3

O-

NHCOCH3

OH

3 + FeCl3

3

Fe + 3HCl

药物中若具有酚羟基结构，可与 FeCl3 作用显蓝紫色。

如对乙酰氨基酚：取药物适量加水溶解，滴加三氯化铁试液，即显蓝紫色。

二、缩合反应二苯甲酮结构，在酸性条件下与二硝基苯肼缩合生成橙色偶氮化合物。

O

HO

O

+NO2

NH-NH2

NO2

O2N

HN NO2

O

HO

N

OH

NHCOCH3

Ar-NH2

NaNO2+HClAr-N2

+Cl- OH

OH-

OH

Ar-N=N

三、重氮化 -偶合反应 对氨基水杨酸钠具芳伯氨基结构，在酸性溶液中，与亚

硝酸钠液进行重氮化反应，生成的重氮盐与碱性 β-萘酚偶合产生橙红色沉淀。

五、水解反应：阿司匹林与碳酸钠试液反应

反应现象：水杨酸白色沉淀析出，并产生醋酸的臭气

COOH

OCOCH3

+ Na2co3

COONa

OH

+ CH3COONa + CO2

COONa

OH + H2SO4 OH

COOH

+ Na2SO4

2 CH3COONa + H2SO4 2CH3COOH + Na2SO4

四、氧化反应

甲酚那酸遇硫酸显黄色

六、特征元素的反应 1 、氯元素的反应：硝酸银白色沉淀 2 、硫元素的反应：分解产生硫化氢，遇醋酸铅黑色

沉淀七、光谱法 1 、紫外吸收光谱： max、 min、吸光度法、吸光

度比值法 2 、红外吸收光谱法八、色谱法 1 、薄层色谱法 2 、高效液相色谱法

第三节、特殊杂质及其检查方法

（一） 阿司匹林（ ASA）合成工艺：

OH

COOH

+(CH3CO)2O

H2SO4

70~75OCOCH3

COOH

+CH3COOH

（二）阿司匹林中游离水杨酸与有关物质检查 1 、溶液的澄清度：（ 1 ）杂质来源：①原料②合成工艺中由副反应生成的醋酸苯酯、水杨酸苯酯和乙酰水杨酸苯酯等。

（ 2 ）检查原理：利用药物与杂质在溶解行为上的差异进行检查

（ 3）检查方法： 取供试品 0.5g ，加温热至约 45℃ 的碳酸钠试液10ml

溶解后，溶液应澄清。

2 、游离水杨酸（ SA） ----特殊杂质（ 1）来源：①生产过程乙酰化不完全（未反应 SA ） ②贮存不当水解而产生的 SA

（ 2）检查原理 ( 中国药典 2005方法 ) ： 阿司匹林 +硫酸铁铵 不反应 水杨酸 +硫酸铁铵 紫堇色 与一定量水杨酸对照液生成的色泽比较不得更深。 2010版方法： HPLC法 3 、易炭化物 4 、有关物质： HPLC法

二、甲芬那酸中 2,3-二甲基苯胺及有关物质的检查

方法： GC法，聚乙二醇为固定相， FID检测器

三、二氟尼柳中有关物质的检查

方法：有关物质 A- 正相 TLC 法；有关物质 B- 反相HPLC法

四：萘普生中 6-甲氧基 -2-萘乙酮等有关物质的检查

方法： HPLC法

五、对乙酰氨基酚中氨基酚和对氯苯乙酰胺的检查

方法： HPLC法

第四节、含量测定 一、酸碱滴定法（一）、直接滴定法：阿司匹林、布洛芬、萘普生等 （ 1）：原理利用游离羧基的酸性，以标准碱滴定液直接滴定。

（ 2）：方法： 滴定液： NaOH(0.1mol/L) 溶剂：中性乙醇 指示液：酚酞

3 ）注意事项：

A 采用中性乙醇做溶剂的目的：

①易于溶解样品 ②防止本品水解

B 滴定过程中不断振摇目的：防止局部碱度过大而促使其水解。

C 采用酚酞作指示剂：药物是弱酸，用强碱滴定时，化学计量点偏碱性，故选用在碱性区域变色的酚酞。

（二）、剩余量滴定法 美洛昔康含有与羰基共轭的烯醇式羟基，具有羧酸性质，显酸性。可用氢氧化钠滴定。但由于溶解度的限制需使用定量过量的氢氧化钠滴定液溶解后，用盐酸滴定液回滴剩余的碱。

需做空白

（三）、水解后剩余滴定法1 、水解后剩余量滴定法 酯结构在碱性溶液中水解，加入定量过量的氢氧化钠滴定液，加热使药物水解，过量氢氧化钠用硫酸滴定液回滴。需作空白。

2 、两步滴定法 （ 1）适用范围：阿司匹林片剂 采用本法原因：①消除片剂中稳定剂干扰（枸橼酸或酒石

酸） ②消除水解产物干扰：阿司匹林片在贮存过程水解产生水杨酸和醋酸

（ 2）测定：第一步：中和 精密称取片粉 酚酞指示剂 迅速滴至粉红色 加中性乙醇溶解 NaOH滴定液 酒石酸等稳定剂、 SA、 ASA均成为相应钠盐

第二步：水解 中和后供试品液 水浴加热 加定量过量 NaOH(0.1mol/l)第三步：测定 用 H2SO4 滴定液 (0.05mol/l)滴定剩余的碱。 滴定结果用空白试验校正 每 1ml H2SO4 滴定液 (0.05mol/l)滴定液相当于

18.02mg的 C9H8O4

（ 3）含量计算：

标示量 : 表示制剂中各成分含量的理论值。

用标示量的百分值来控制制剂含量。

公式通则为：标示量％＝

=

实际测得含量 ×100％

标示量

VFT平均片重 ×100％

称样量标示量

例：取标示量为 0.3g 的阿司匹林片 10片，称出总重为 3.5840g，研细后称取 0.3484g，按药典方法用两步滴定法测定其含量，消耗硫酸滴定液（ 0.05015mol/l） 23.84ml，空白试验消耗该硫酸滴定液 39.88ml，求阿司匹林的含量为标示量的多少？（ 99.41%）

（四）、非水溶液滴定法 吡罗昔康具有吡啶环显碱性，可在冰醋酸中用高氯酸滴定液滴定，结晶紫为指示剂。

二、紫外 - 可见紫外分光光度法（一）直接紫外 - 可见紫外分光光度法部分本类药物制剂采用此法。溶解过滤后对照法测定。（二）、柱分配－紫外分光光度法 适用：片剂、胶囊、栓剂 特点：能分离杂质，同时测定 ASA 、 SA（ 1 ） SA的限量测定 色谱柱用硅藻土填充；固定相：三氯化铁－尿素；洗脱液：氯仿，乙醚。

在 λmax=306nm测定吸收度， A 样（ SA) ＜ A 标（ SA)

（ 2 ） ASA的测定 固定相：碳酸氢钠；洗脱液：氯仿 λmax=280nm测定吸收度， A 样（ ASA+SA) -A 样（ SA)

三、高效液相色谱法 ChP2010收载的典型芳酸类非甾体抗炎药物制剂大多采用离子抑制 - 反相 HPLC法测定，外标法计算含量。

第五节 体内药物分析

一、血浆中阿司匹林与水杨酸的 HPLC法测定

小剂量 ASA血浆中 ASA及 SA的同时测定，液质联用法液质联用仪由以下几部分组成

数据及供电系统

━━━━┳━━━━━╋━━━━━━┓ 进样系统 离子源 质量分析器 检测器

┗━━━━━╋━━━━━━┛ 真空系统

LC/MS 系统构成

+

+

样品与溶剂脱样品与溶剂脱离及电离离及电离 EIEI ESIESI APCIAPCI

LC/MSLC/MS接口接口

离子源离子源

质量分析器质量分析器检测离子检测离子

HPLCHPLC 数据系统数据系统质谱质谱

离子识别离子识别 QuadrapoleQuadrapole Time of FlightTime of Flight Fourier TransformFourier Transform ……

+

++

++ ++

离子检测离子检测

+

+

-+

+

+ +

++

-

+

+

+

三级 ( 重）四极杆质谱仪

LC - MS/MS法定量测定人血浆中阿司匹林及其代谢产物水杨酸

方法的定量下限 (LOQ)为 25 ng/mL, 灵敏度较高 ,

其人血浆中阿司匹林和水杨酸在 25～ 10 000ng/mL范围内 , 其浓度与响应值之间具有良好的相关性 , 全部标准曲线的相关系数 ( r) 均在 0.990～ 1.000之间 ,

方法的日内和日间精密度、准确度符合要求。