Embed Size (px)
Citation preview
Исследование фенотипических и функциональных характеристик NK-клеток
Савицкий Валерий, к.б.н. Специалист по проточной цитометрии,
Бекмен Культер , Москва
Приложения
- Фундаментальные исследования
- Клинические тесты
- Клинические исследования –
экспериментальная терапия
(трансплантация стволовых клеток / GvL)
NK
T B T8
T4
Treg
TH1 TH2 TH17
PC
memB CD3-CD56+
CD3+CD8+
FoxP3+ CD25++CD127+/-
IFN IL-2
TNF
IL-4 IL-6
IL-10
IL17
CD38++ CD138+
CD27+IgM+ (-)
CD3+CD4+
CD3+ CD19+
3
Мониторинг иммунитета – субпопуляции лимфоцитов
Врожденный
иммунный ответ
Приобретенный иммунный ответ
Биологические функции NK-клеток
Eric Vivier et al. Science 331, 44 (2011);
• 5-25% (100-600 кл/мкл) лимфоцитов периферической крови
Human CD3-,CD56+
Human CD3-,CD56+
Морфологическая характеристика NK-клеток
Иммунофенотипическая идентификация NK-клеток
Субпопуляции NK-клеток (1)
Зрелые НК
Незрелые НК
Субпопуляции NK-клеток (2)
Функциональные тесты
(классический)
Handbook of Human Immunology Ch 10
Функциональные тесты:
Экспрессия CD107a
Функциональные тесты:
экспрессия CD107a
Sensitivity >> Cytokine Assay
Функциональные тесты:
экспрессия CD107a и экспрессия цитокинов
Изменение соотношения субпопуляций NK-клеток после трансплантации
A. Schulze et al. / Experimental Hematology - (2008)
Name Alternative Name[s] Cellular Ligand
p58.1 KIR2DL1 HLA-Cw2,4,5,6
p58.2 KIR2DL2 HLA-Cw1,3,7,8
p70 KIR3DL1 HLA-Bw4
p140 KIR3DL3 HLA-A3, -A11
p49 KIR2DL4 HLA-G
LIR1 ILT2/LILRB1 HLA-G
LIR2 ILT4/LILRB2 HLA-F
CD94* KLRD1 HLA-E**
NKG2A KLRC1/CD159A HLA-E
NKR-P1B, D CD161B, D Clrb
p40 LAIR1 ?
IRC1 IRp60/CMRF35H ?
p75AIRM1 Siglec-7 Sialylated sugars
*CD94 forms heterodimers with NKG2A, -C and –E
**CD94/CD159A heterodimer is specific for HLA-E
Ингибирующие рецепторы
Name Alternative Name[s] Cellular Ligand
NKp46 Ly94/NCR1 ?
NKp30 IC7/NCR3 ?
NKp44 Ly95/NCR2 ?
2B4 CD244 CD48
NTB-A KALI ?
NKp80 KLRF1 ?
CD16 Fc RIII IgG
CD2 LFA-2 CD58, LFA-3
DNAM-1 CD226 PVR/CD155, Nectin-2/CD112
NKG2D D12S2489E/CD159D MICA, MICB, MULT1 ULBP1-4
NKR-P1A CD161A [IC-21]*
NKR-P1C CD161C ?
NKR-P1F CD161F Clrg
P40 LAIR1 ?
IRC1 IRp60/CMRF35H ?
p75AIRM1 Siglec-7 Sialylated sugars
*Rat NKR-P1A binds an undefined determinant on IC-21 tumor cells
Активирующие рецепторы
NK-клетки. Экспериментальная терапия
Аллогенная трансплантация / Эффект трансплантат против лейкоза:
- Mismatch KIR NK клеток донора
- сниженная частота рецидивов
- увеличение продолжительности жизни
- снижение РТПХ
Клеточная терапия с
использованием NK-клеток
Eric Vivier et al. Science 331, 44 (2011);
Динамическая регуляция эффекторной функции NK-клеток
Eric Vivier et al. Science 331, 44 (2011);
Цитотоксическая активность НК клетокопределяется балансом связывания активирующих и ингибирующих
рецепторов/лигандов
Концепция аллореактивности NK-клеток
(лейкоз)
У пациентов с ОМЛ НК клетки утрачивают
способность распознавать и уничтожать
аутологичные бласты
Альтернатива – донорские НК клетки, лучше
распознающие бласты. Механизм - mis-matching
ингибиторных рецепторов и их MHC лигандов
(эффект трансплантат против лейкоза)
Влияние аллореактивности трансплантированных НК
клеток на вероятность выживаемости пациентов с ОМЛ
.
Ruggeri L et al. Blood. 2007;110:433-40.
Пример панели для иммунофенотипирования NK-клеток (Navios,10параметров – 1 пробирка)
Стратегия гейтирования
Коэкспрессия экспрессия KIR NK-клетками
Экспрессия ингибирующих и активирующих рецепторов субпопуляциями НК клеток
Before
After
Иммунофенотипическая оценка результатов
обработки клеток. Контроль сепарации
Иммунофенотипическая оценка результатов
обработки клеток. Контроль активации
The World of NK Cells is known at BC
+NTB-A +CD107a
29
Савицкий Валерий, к.б.н. Специалист по прточной цитометрии , Бекман Культер , Москва
