BROJENJE ERITROCITA

Ciljevi

� Opisati građu i funkciju eritrocita sisavaca

� Opisati građu i funkciju eritrocita peradi

� Opisati metode brojanja krvnih stanica:

automatski brojači, brojanje u hemocitometru

� Izračunati broj eritrocita u uzorku krvi

� Opisati retikulocite, način bojanja i brojanja

retikulocita

ERITROCITI

- u sisavaca:

bikonkavnog oblika, bez jezgre, životni vijek oko 120 dana

- u ptica, riba i nižih filogenetskih vrsta:

bikonveksnog oblika sa jezgrom, u ptica životni vijek oko 42 dana

http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/13/Redbloodcells.jpg

http://www.vet.uga.edu/vpp/archives/ivcvm/1999/phillips/index.php

INDIKACIJE

� sistematski pregledi

� prije kirurških zahvata i sl.

� prije kemoterapija ili zračenja

� hematološkim problemima

krvarenja

kronične anemije

policitemije

� smanjen broj eritrocita:

� akutna krvarenja

� kronična krvarenja

� trudnoća

� deficit željeza

� deficit vitamina B12

� difunkcija koštane srži

� kronične upale…

�povećan broj eritrocita:

�život na višim nadmorskim visinama

�utreniranost

�pušenje

�dehidracija

�plućne bolesti (HIPOKSIJA)

�srčane bolesti

�bubrežne bolesti (eritropoetin)

BROJENJE ERITROCITA

Broj krvnih stanica (eritrocita, leukocita, trombocita) može se odrediti pomoću

elektronskog brojača ili

brojenjem u komorici – hemocitometru.

ELEKTRONSKI BROJAČI- metoda impedancije

- optička metoda

Pribor:

- eritrocitni melanger

- komorica za brojenje stanica (hemocitometar):

Neubaerova,

Bürker-Türkova,

Spencerova

BROJENJE ERITROCITA U HEMOCITOMETRU

Materijal: puna krv

Otopine: Hayemova otopina

Eritrocitni melanžer

Razrjeđenje krvi s HAYEMOVOM otopinom:

� 200xkrv se navuče do oznake 0,5a Hayemova otopina do oznake

101

� 100xkrv se navuče do oznake 1a Hayemova otopina do oznake

101

Komorica (hemocitometar)

1 mm

Prikaz ugravirane mrežice u hemocitometru

Prikaz ugravirane mrežice u hemocitometru

Prikaz ugravirane mrežice u hemocitometru

Polja za brojenje LEUKOCITA:

1, 3, 7, 9

Polje za brojenje ERITROCITA:

5

Prikaz ugravirane mrežice u hemocitometru

Polje za brojenje eritrocita 5

Prikaz polja za brojenje eritrocita

1/400mm2

Eritrociti se broje na polju br 5

ili

ili

Prikaz polja za brojenje eritrocita

Pravilo brojenja:

U svakom malom kvadratiću broje se svi eritrociti koji se nalaze:

� unutar kvadratića

� na lijevoj i gornjoj liniji

RAČUN

N - broj izbrojenih eritrocita

400 - broj eritrocita u 1 mm2 (površina malog kvadratića = 1/400 mm2)

* dijeli se s 80, zbog toga što se eritrociti broje u 80 malih kvadratića

100 ili 200 - razrjeđenje krvi u melanžeru

** množi se s 10 da bi se dobio broj eritrocita u 1 mm3 – zbog dubine

komorice 0,1 mm

N80*

x 400 x 10** x razrjeđenje (100 ili 200) = X [mm3]

X [mm3] x 103 = X [cm3]

X [cm3] x 103 = X [dm3] = X [L]

VRSTA ŽIVOTINJE

Broj eritrocita

HEMOGLOBINg/L

HEMATOKRIT

%

MCV fL

MCHpg

MCHC%

N x1012/L

KONJ 7-12 110-140 32-50 37-58 12-20 31-36

GOVEDO 5-10 80-150 26-42 52-58 11-17 30-36

OVCA 10-13 90-150 24-45 28-40 8-12 31-34

KOZA 8-18 80-120 20-38 16-25 5,2-8 32

SVINJA 6-8 100-160 32-50 50-68 17-21 30-34

PAS 6-8 120-180 37-54 59-69 20-24 30-35

MAČKA 6-8 80-150 24-45 39-55 13-17 32-34

KUNIĆ 5,5-6,5 80-150 37-50 - - -

KOKOŠ 2,5-3,2 65-90 22-35115-125

33-47 26-35

RETIKULOCITI

� Nezreli oblici eritrocita,

koji sadrže ostatke RNA, mitohondrija i organela

� Procjena eritropoetske aktivnosti koštane srži

� broja:

nakon dugotrajnog gubitka krvi i hemolize

u ranoj anemiji uzrokovanoj manjkom željeza

ODREĐIVANJE BROJA RETIKULOCITApo Dacie-u i Lewis-u

� U omjeru 1:1 pomiješaju se

1% otopina BRILJANT KREZIL MODRILA

i uzorak krvi

� ostavi se stajati 15-20 min. u termostatu na 37°C

� napravi se razmaz i osuši

� Mikroskopiranje pod imerzijom:

ostaci RNA, mitohondrija i organela obojeni su TAMNOPLAVO

� Broji se (100, 200 ili 1000 eritrocita) i izrazi % retikulocita

KRVNI RAZMAZ RETIKULOCITA

Retikulocit

Retikulocit

U pasa (0-1,5), mačaka (0,2-1,6) i svinja (0-1) u cirkulaciji nalazimo

mali broj retikulocita,

krave (0), ovce (0), koze (0) često uopće nemaju retikulocita,

a u konja ih ne nalazimo.

?

Literatura

� Feldman, B. V., J. G. Zinkl, N. C. Jain (eds.) (2000): Schalm’s Veterinary Hematology, 5th ed. Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, Baltimore, New York, London, Buenos Aires, Hong Kong, Sydney, Tokyo; USA, UK, Argentina, China, Australia, Japan.

� Harvey, J. W. (2001): Atlas of veterinary hematology: blood and bone marrow of domestic animals. W.B. Saunders Company, Philadelphia, Pennsylvania, USA.

� Kaneko, J. J., J. W. Harvey, M. L. Bruss (eds.) (1997): Clinical biochemistry of domestic animals, 5th ed. Academic Press, San Diego, CA, USA.

� Rebar, A. H. (1998): Hemogram Interpretation of Dogs and Cats. Ralston Purina Company, Saint Louis, Missouri, USA.