MARATHON N1000. UOA. SANTIAGO FONO: 5755399. FAX: 5755660
RedMinsal 255399. EMAIL: [email protected] 1 SECCIN PARASITOLOGA
INSTRUCTIVO PARA LA TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS INFECCIN POR
Plasmodium sp. (Malaria) INTRODUCCION La Malaria es una enfermedad
parasitaria causada por diferentes especies de Plasmodium y es
transmitidaporunvector(mosquito)delgneroAnopheles.Elperododeincubacindela
enfermedad es de 10 a 28 das, segn la especie de Plasmodium y los
sntomas se presentan bruscamente con escalofros intensos, fiebre y
sudoracin. Chileno es un pas endmico para Malaria,sin embargo
cuenta con el vector que transmite la enfermedad. Por lo tanto los
mecanismos de vigilancia deben estar atentosa la reaparicinde
nuevoscasos,yaseaporlaintroduccindebidoaviajeros,residentesenpasesendmicoso
por la reactivacin de la transmisin en reas donde el vector se
encuentre presente. Un diagnstico certero y oportuno mediante
antecedentes clnicos-epidemiolgicos y exmenes de laboratorio es
fundamental para la eleccin del un tratamiento eficaz y una buena
evolucin de la enfermedad.
FrentealasospechaclnicadeMalaria,sedebeenviarlasmuestrasalInstitutodeSalud
Pblica(ISP)parasuconfirmacinmediantetcnicasespecficasdelaboratorio.Tantoel
diagnstico de laboratorio como el seguimiento en el tratamiento se
basan en la confirmacin de
lapresenciadelparsitoensangre,eldiagnsticodeespecie,estadiospresentesysucarga
parasitaria. La Seccin Parasitologa del ISP basa el diagnstico y la
confirmacin del caso en el usodeunalgoritmoqueincluye:tcnicas
inmunocromatogrficas, molecularescomo Reaccin
delaPolimerasaenCadena(PCR)ylaobservacinmicroscpicaengotagruesayfrotis.La
observacinmicroscpicaenlagotagruesaeselmtodoGoldEstndareneldiagnsticode
laboratorio, donde utilizando la tincin de Giemsa un microscopista
entrenado puede diferenciar las diferentes especies de Plasmodium,
sus estadios y su carga parasitaria. El uso del frotis se considera
un apoyo a lo observado en gota gruesa Los mtodos
inmunocromatogrficos por su parte poseen una alta especificidad y
rapidez en su ejecucin, con un promedio de 15 minutos y
soncapasesdediferenciasalgunasespeciesdePlasmodium.Elusocomplementariodelatcnica
de PCR permite detectar secuencias especficas de las principales
especies del parsito
yestilparaladeteccindeMalariasmixtasybajasparasitemias.Estasltimasdos
metodologas son recomendadas para pases no endmicos como Chile.
Elxitodeunbuendiagnsticoseencuentraestablecidoprincipalmenteenlacalidady
condiciones dela muestra enviada. Por este motivo, el presente
instructivo tiene el objetivo de indicar lacorrecta
maneradelatomade muestra,confeccindelos frotisygotagruesa,ydel envo
y transporte de la muestra al Instituto de Salud Pblica de Chile.
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255399. EMAIL: [email protected] 2 DEFINICIONES
Gotagruesa:Esunatcnicaderutinayconsisteenunamuestradeunagotadesangre
conformadapornumerosascapasensumayoradeglbulosrojos,losqueson
deshemoglobinizadosdurantelacoloracinconGiemsa.Estaconcentracindeglbulosrojos
facilita la deteccin de los parsitos que pudieran estar presentes
en su interior en densidades bajas.
FrotisoExtendidosanguneo:Esunacapadelgada,nicadeclulassanguneas,fijadascon
metanolycoloreadasconGiemsa,quefacilitanlaobservacindelascaractersticas
morfolgicas de los parsitos presentes en los glbulos rojos.
REQUISITOS DE TIPO Y CANTIDAD DE MUESTRA
ParalaconfirmacindeMalariamedianteobservacinmicroscpica,inmunocromatografay
PCR se solicita el envo de: 2 portaobjetos con un frotis de sangre
desde puncin capilar cada uno. 2 portaobjetos con una gota gruesa
de sangre desde puncin capilar. 2 portaobjetoscon un frotis + una
gota gruesa en sangre desde puncin capilar cada uno. 1 tubo de
sangre venosa en EDTA como anticoagulante (entre 2 y 5 ml)para las
tecncia inmunocromatogrficas y PCR
Serequiereelenvodetodaslasmuestrassolicitadas.Laausenciaomalacalidaddelas
muestras enviadas es causal de rechazo inmediato y solicitud de
nueva muestra. TOMA Y PREPARACION DE LA MUESTRA
Paraelprocesodetomade muestrasedeben
seguirlasmedidascorrespondientesaunnivel
debioseguridadclaseIIdeacuerdoalManualdeBioseguridadybuenasprcticasdel
establecimiento.
Lasmuestrasdebenserobtenidasdepreferenciaantesdequeelpacientehayarecibido
tratamiento antimalrico y para un mayor rendimiento se recomienda
que la muestra sea tomada duranteun pickfebril,
yaquecorrespondealosmomentosde mayorparasitemia. Enel caso que el
tratamiento hay sido iniciado debe destacarse en el formulario de
envo de muestra
LaextraccindelamuestradesangreenEDTAcomoanticoagulantesedeberealizarde
acuerdoalosprocedimientostcnicospropiosdecadalaboratorioeidentificareltuboconlos
datos del paciente. MARATHON N1000. UOA. SANTIAGO FONO: 5755399.
FAX: 5755660 RedMinsal 255399. EMAIL: [email protected] 3 Puncin
capilar
Paralapreparacindelosfrotisygotasgruesasserecomiendasangredirectamentedesde
puncincapilarynodesdesangreconanticoagulante.Eldetalledelprocesosepresentaa
continuacin: 1.Limpiar el lugar de trabajo con alcohol 70%
2.Limpiar6portaobjetosdepreferenciaconbordeesmeriladoconayudadealgodny
alcohol70%.Secarlosportaobjetosconunpaolimpioevitandolapresenciade
pelusas.3.Desinfectarconalcohol 70%lazonaparalaobtencindela
muestraydejarsecar. De preferencia utilizar el dedo anual de la
mano menos hbil. Se puede puncionar lbulo de la oreja o taln en
caso de recin nacido o lactante.
4.Puncionarconlancetaestrillazonalateral(menossensible)delpulpejodeldedoy
presionar para la salida de sangre. Eliminar la primera gota
obtenida con gasa estril. Preparacin del frotis
Desdeeldedopuncionado,presionarycolocarsuavementeunagotapequeadesangre,no
ms grande que la cabeza de un palo de fsforos (7-8 ul), justo en el
centro del portaobjetos.
Extenderlagotaconayudadeotroportaobjetoocubreobjetoenunngulode45desdeel
centro al borde externo de la lmina de manera que quede un
extendido fino; de un tamao no mayor a 3 cm y con una clara
distincin entre cabeza, cuerpo y cola (Ver figura 1). Figura 1
Elnombredelpacientedebesecolocadoconlpizdeminaenelextremosuperiordel
frotis Deben enviarse dos portaobjetos xxxx MARATHON N1000. UOA.
SANTIAGO FONO: 5755399. FAX: 5755660 RedMinsal 255399. EMAIL:
[email protected] 4 Preparacin de la gota gruesa
Desdeeldedopuncionado,presionarycolocarsuavementeunagotapequeadesangre,no
ms grande que la cabeza de un palo de fsforos (7-8 ul),a 2,5 cm del
borde de la lmina que posee el esmerilado.
Realizarmovimientoscircularesdesdeadentrohaciafuerayviceversaconelngulodeotro
portaobjeto hasta generar un crculo uniforme de 1 cm de dimetro
(ver figura 2). El objetivo de estepaso es distribuir homogneamente
la gota en la circunferencia,no se debe desfibrinar la muestra.
Figura 2 Deben enviarse dos portaobjetos Preparacin de frotis +
gota gruesa
Desdeeldedopuncionado,presionarycolocarsuavemente2gotaspequeasdesangretal
cual se preparara un frotis y una gota gruesa en un mismo
portaobjetos con bordeesmerilado. (Ver figura 3). Figura 3 Deben
enviarse dos portaobjetos Rotulado, secado y fijacin de los frotis
y gota gruesa
Rotularconlpizgrafitoenlazonaesmeriladaconelnombredelpacienteylafechade
obtencin de la muestra.
Dejarsecarelfrotisenposicinhorizontaldurante30minutosprotegidadelosinsectos,del
polvo, de la luz solar directa y del calor extremo. Fijar solo los
frotis sumergindolos en metanol por 3 segundos. Para el caso de la
lmina que
poseegotagruesayfrotisalmismotiempo,sumergirsololazonadelfrotisenmetanolpor3
segundo procurando no fijar la zona que posee la gota gruesa. Las
gotas gruesas no se fijan ya que impiden la deshemoglobinizacinde
los glbulos rojos durante la tincin.
NOTAEnelcasodelosportaobjetossinbordeesmeriladoescribirsobreelbordedelfrotiso
etiquetarxxxx xxxx MARATHON N1000. UOA. SANTIAGO FONO: 5755399.
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LAS MUESTRAS Las muestras nodebensobrepasar
las48horasdesdesuobtencinhastaelenvoal ISP. En caso de
imposibilidad de envo dentro del plazo estipulado guardar la
muestra a 4C hasta el momento de su envo.
Lasmuestrasdebenserenviadasenunrecipienteapropiadoparasutransporteal
laboratorio con la finalidad de evitar cualquier derrame o rotura.
La muestra de sangre en EDTA y los portaobjetos debe ser
transportados encadena de
froa4C.Noolvidarfijarlosfrotisenmetanolparamantenersumorfologasin
alteraciones.
LasmuestrasdebenserenviadasjuntoalformulariodisponibleenlapginaWeb
institucionalhttp://www.ispch.cl/sites/default/files/documento/2010/04/RG-213.56-007.pdfa
la direccin Av. Marathon #1000, uoa, Santiago.
Elhorarioderecepcindelasmuestrasescontinuadoperolorecomendadoparaque
sea entregado en el mismo da al laboratorio es de lunes a viernes
de 8:30 a 15:00 hrs. INFORMACIN Y CONSULTAS
Paraconsultascomunicarsealtelfono02-5755399,RedMinsal255399oporcorreo
electrnico a [email protected]. IMPORTANTE Imprima la hoja N 4 ya
que sirve como plantilla para la realizacin de la gota gruesa y la
forma combinada
