Practica 5 , 6, 7

TITULO: COLIFORMES, COLIFECALES Y E. COLI (NMP)

I. OBJETIVO: Enseñar al alumno las técnicas e interpretaciones de los

microorganismos en los alimentos. Determinar si hay presencia de microorganismos aeróbios o

coliformes fecales en el producto a analizar, para así asegurar la calidad de dicho alimento.

II. INTRODUCCIÓN:La denominación genérica coliformes designa a un grupo de especies bacterianas que tienen ciertas características bioquímicas en común e importancia relevante como indicadores de contaminación del agua y los alimentos.

Bacterias coliformesClasificación científicaReino: BacteriaFilo: ProteobacteriaClase: Gamma

ProteobacteriaOrden: EnterobacterialesFamilia: EnterobacteriaceaeGénerosEscherichiaKlebsiellaEnterobacterCitrobacter

Coliforme significa con forma de coli, refiriéndose a la bacteria principal del grupo, la Escherichia coli, descubierta por el bacteriólogo alemán Theodor von Escherich en 1860. Von Escherich la bautizó como bacterium coli ("bacteria del intestino", del griego κολον, kolon, "intestino"). Con posterioridad, la microbiología sistemática nombraría el género Escherichia en honor a su descubridor.

Las bacterias de este género se encuentran principalmente en el intestino de los humanos y de los animales de sangre caliente, es decir, homeotermos, pero también ampliamente distribuidas en la naturaleza, especialmente en suelos, semillas y vegetales.

Los coliformes se introducen en gran número al medio ambiente por las heces de humanos y animales. Por tal motivo suele deducirse que la mayoría de los coliformes que se encuentran en

el ambiente son de origen fecal. Sin embargo, existen muchos coliformes de vida libre.

El grupo coliforme agrupa a todas las bacterias entéricas que se caracterizan por tener las siguientes propiedades bioquímicas:

1.Ser aerobias o anaerobias facultativas. 2.Ser gram negativas. 3. No ser esporógenas.4. Fermentar la lactosa a 35 °C en 48 horas.

III. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA:

Las Enterobacteriaceae lactosa-positivas o grupo coli-aerogenes constituyen un grupo de bacterias que se definen más por las pruebas usadas para su aislamiento que por criterios taxonómicos.

Se encuentran en el intestino del hombre y de los animales, pero también en otros ambientes como: suelo, plantas, cáscaras de huevo, etc.

Aunque su especificidad como indicadores no es buena, se suelen usar como índice de contaminación fecal por:

Su frecuencia en heces. Su fácil detección en el laboratorio. Sus características semejantes, en algún aspecto, a las de

algunos miembros patógenos de la familia Enterobacteriaceae

Coliformes totales

Al utilizar este término, los microbiólogos nos referimos en forma general a la familia de bacterias de los géneros Escherichia, Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella. La mayoría de estos organismos se encuentran en vida libre es decir en el medio ambiente y materia en descomposición, excepto el género Escherichia que vive solo en organismos como el hombre y animales de sangre caliente.

No todos los coliformes son de origen fecal, por lo que se hizo necesario desarrollar pruebas para diferenciarlos a efectos de emplearlos como indicadores de contaminación. Se distinguen, por lo tanto, los coliformes totales —que comprende la totalidad del grupo— y los coliformes fecales —aquellos de origen intestinal—.

Desde el punto de vista de la salud pública esta diferenciación es importante puesto que permite asegurar con alto grado de

certeza que la contaminación que presenta el agua es de origen fecal.

Coliformes fecales

Los coliformes fecales son microorganismos con una estructura parecida a la de una bacteria común que se llama Escherichia coli y se transmiten por medio de los excrementos. La Escherichia es una bacteria que se encuentra normalmente en el intestino del hombre y en el de otros animales. Hay diversos tipos de Escherichia; algunos no causan daño en condiciones normales y otros pueden incluso ocasionar la muerte.

Se define como coliformes fecales a aquellos que fermentan la lactosa a 44,5 – 45,5 °C, análisis que permite descartar a Enterobacter, puesto que ésta no crece a esa temperatura. Si se aplica este criterio crecerán en el medio de cultivo principalmente E. coli (90%) y algunas bacterias de los géneros Klebsiella y Citrobacter. La prueba de coliformes fecales positiva indica un 90% de probabilidad de que el coliforme aislado sea E. coli.

E. coli

El aislamiento de esta bacteria en el agua da alto grado de certeza de contaminación de origen fecal, alrededor del 99%. No es absoluta porque se han aislado cepas de E. coli que no tienen origen fecal, pero es un grado de certeza es más que razonable para certificar contaminación con ese origen.

Sin embargo, el aislamiento de este microorganismo no permite distinguir si la contaminación proviene de excretas humanas o animales, lo cual puede ser importante, puesto que la contaminación que se desea habitualmente controlar es la de origen humano. Esto no significa menospreciar la de origen animal, especialmente dada la existencia de zoonosis, enfermedades que son comunes al hombre y animales, que también se pueden transmitir por el agua.

Las especies clásicas de este grupo son Escherichia coli y Enterobacter aerogenes. La relación de estos microorganismos con otros del grupo entérico – Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas y alcaligenes, todos los cuales son bacilos gramnegativos no esporulados.Como estas especies tienen gran semejanza en su aspecto morfológicos y características de cultivo, es necesario recurrir a pruebas bioquímicas para diferenciarlas. Reacciones que tengan las siguientes cuatro características son muy importantes para lograr este propósito:

1. Capacidad para producir Indol. E. Coli lo produce, y Ent. Aerogenes no.

2. Cantidad de ácido producida en un medio especial de caldo glucosado, adicionado del indicador rojo de metilo. Los dos microorganismos producen ácido de la glucosa. Sin embargo, E. Coli produce pH mas bajo, lo que hace que vire al rojo de metilo mientras que Ent. Aerogenes no cambia el color.

3. Capacidad para producir acetilmetilcarbinol en un medio de peptona glucosado. Este compuesto químico se detecta por medio de la reacción de Voges – Proskauer. E. Coli no produce acetilmetilcarbinol mientras que Ent. Aerogenes sí lo hace.

4. Utilización de citrato de sodio. Ent. Aerogenes es capaz de utilizar el citrato de sodio como su única fuente de carbono, esto es, se desarrollará en un medio de cultivo químicamente definido en el cual el citrato de sodio es el único compuesto de carbono. E. Coli no se desarrolla en estas circunstancias.

Por conveniencia, a estas pruebas se las ha designado en forma colectiva reacciones IMViC (I = Indol, M = rojo de metilo, Vi = reacción Voges – Proskauer y C = citrato).

Es necesario cuidar los siguientes detalles cuando se sometan muestras de agua a análisis bacteriológicos:

1. La muestra se tomará en frasco estéril. 2. La muestra ha de ser representativa de la fuente original. 3. Se evitará la contaminación de la muestra durante y

después de obtenerla. 4. La muestra se analizará lo mas pronto posible. 5. Si no es posible examinar la muestra enseguida, deberá

guardarse en refrigeración entre 0 y 10 ºC.

Los procedimientos bacteriológicos de rutina son:a. Cuenta en placas para determinar el número de bacterias. b. Pruebas que revelen la presencia de bacterias coliformes

Cuenta estándar en placa:

Se efectúan cuentas de colonias después de haber sembrado en la placa cantidades alícuotas de la muestra. La cuenta estándar en placa no se recomienda en el caso del agua porque la que contiene pocas bacterias patógenas obviamente es mas peligrosa que las que contiene muchas saprofitas. Sin embargo, lo cual el agua es de buena calidad tenga cuentas bajas, menos de 100 por mililitro. Pruebas para determinar la presencia de bacterias coliforme:

Varios medios selectivos diferenciales facilitan mucho el proceso para examinar muestras de agua en busca de microorganismos coliformes, el examen supone tres pasos sucesivos:

a. Prueba de presunción

b. Prueba de confirmación c. Prueba de consumación.

IV. METODOLOGÍA:

4.1 Materiales y Reactivos: Requisitos necesarios para la preparación y dilución de las

muestras de alimentos:

Incubadora a 35 – 37 °C. Pipetas bacteriológicas. Asa de inoculación. Caldo laurel sulfato (LST). Caldo brilla. Agar ENDO Y VRBA. Caldo E. Coli. Reactivo para VOGES

PROSKAVER.

Baño termostatito 44.5 °C. Reactivos de Kovacs. Agar citrato de Simmons. Caldo glucosado. Caldo triptona. Solución rojo de metilo. Agar Mac Conkey.

4.2 PROCEDIMIENTOS:

4.2.1 Coliformes totales:

a) Método Norteamericano:

1.Preparar las muestras de alimentos de acuerdo al procedimiento sobre preparación de las muestras de alimentos.

2.Pipetear 1ml. de cada uno de las diluciones en tubo de caldo lauril sulfato, utilizando 3 tubos por dilución.

3.Anotar los tubos que muestran la producción de gas. (Prueba presuntiva).

4.De cada tubo que contiene gas transferir una asada en tubo que contiene caldo brilla, o aislar sobre placas con Agar ENDO. Incubar a 35-37°C X 24-48 horas.

5.Confirmar la presencia de bacterias coliformes por: a) Formación de gas en el Caldo BRILLA b) Formación de colonias rojas de halo rojo en agar ENDO. c) Anotar el número de tubos confirmados, referirse a la tabla

del NMP para expresar el resultado. b) Método Europeo:

1.Preparación y dilución de muestras. 2.Pipetear 1ml. de cada una de las diluciones a tubos en Caldo BRILLA, utilizando 3 tubos por dilución, incubar a 35-37°C X

48 hrs. 3.Anotar los tubos que muestran producción de gas (Prueba

Presuntiva).

4.De cada tubo que contiene gas aislar sobre placas con agar VRBA o agar ENDC. incubar a 35-37°C X 24-48 horas.

5.Confirmar la presencia de Bacterias Coliformes por:a) Formación de colonias rojo oscuro con diámetro mayor

de mm. En agar VRBA.b) Formación de colonias rojas rodeadas de halo rojo en

agar VRBA. 6.Anotar el número de tubos confirmados, referirse a la tabla

de NMP para expresar el resultado.

4.2.2 Conformes Fecales:

a) Método norteamericano:

1.Tomar los tubos de caldo lauril sulfato gas positivo, procedentes del método anterior.

2.Inocular una usada de caldo de cada uno de los cultivos seleccionados en tubos de caldo E. Coli.

3.Incubar los tubos de caldo E-Coli a 44,5°C ± 0,1°C por 24-48 horas.

4.Terminado el periodo de incubación, observar la formación de gas, y remitirse a la tabla del NMP.

b) Método Europeo:

1.Seleccionar los tubos de caldo Brila positivos del Método Europeo.

2.Inocular una azada de cada tubo en caldo Brila y en caldo peptona.

3.Incubar los tubos a 44° C + /- 0,1 °C.4.Observar a las 24 a 48 horas de incubación si los tubos caldo

Brilla presentan gas.5.Después de 24 horas de incubación del caldo peptona, se

realiza la prueba de Indol.6.Los tubos positivos de gas en caldo Brilla y que produzcan

Indol en agua peptona pueden considerarse como positivos de coliformes fecales.

4.2.3 E. Coli:

Procedimiento:

Sembrar por estría de cada tubo de caldo positivo de gas del Método 1 (Caldo E. Coli) ó del Método 2 (Caldo BRILLA) de la determinación de Coliformes de origen fecal, en Agar ENDO ó Mac Conkey, Incubar por 24 horas a 35-37°C.

Tomar una colonia típica (rojas con halo rojo, con o sin brillo metálico) de cada placa y resembrarla por estría en Agar Nutritivo o PC x 24 horas 35-37°C.

Seleccionar colonias individuales y sembrar en Agar nutritivo inclinado o PC y en caldo lactosado. Incubar por 24 horas a 35-37°C.

A partir de las cultivos gas positivos en caldo lactosado, hacer la tinción de GRAM, para confirmar la presencia de bacilos Gram. negativos no esporulados.

De los cultivos de Agar nutritivo ó PC inclinado de 24 horas, realizar la prueba IMVIC.

a) Indol (KOVACS, 1928)

Inocular tubos de caldo triptona o de agua de peptona con los cultivos puros e incubar a 35-37°C x 24 horas.

Añadir a cada tubo 0,2 - 0,3 mi. del reactivo de Kovacs y agitar.

Esperar 10 minutos y observar los resultados. Si aparece un anillo color rojo oscuro o grosella en la superficie de la capa, la prueba es positiva. Si es color naranja es reacción ±, y amarillo, (-).

b) Prueba del Rojo de Metilo

Inocular tos tubos de caldo glucosado, a partir de cultivos puros e incubar a 35-37 °C x 5 días.

Pipetear 5 mL de cada cultivo en tubos vacíos y añadir 5 gotas de solución de rojo de metilo. Agitar.

Anotar como positivo si aparece en color rojo. Negativo si es color amarillo, colores intermedios indican reacción dudosa.

c) PBA VOGES - PROSKAUER

Inocular tubos de caldo glucosa a partir de cultivos puros e incubarlos a 35 - 37 °C x 48 horas.

Pipetear 3ml. de cada cultivo a tubos vacíos y añadir el reactivo para la prueba de Voges Proskauer (5ml de KOH al 10%).

Agitar los tubos y dejar en reposo por 2-4 horas. Observar los resultados.

La aparición de un rojo carmesí nos indica VP (+), un color amarillo VP (-).

d) PBA Citrato de Sodio

Inocular tubos de Citrato de Simmons a partir de cultivos puros, con un alambre recto por picadura y estría. Incubar a 35-37°C x 24-48 horas.

Anotar como reacción positiva, si hay crecimiento visible, y si hay cambio de color verde claro a azul de prusia y negativa cuando no hay crecimiento o cambio de coloración.

E. Coli (Típico), presenta las siguientes reacciones:

Gas en caldo Brila a 44 - 44,5 °C = (+) Prueba de Indol = (+) Prueba del rojo de metilo = (+) Prueba Voges Proskauer = (-) Prueba Citrato = (-)

V. RESULTADOS:

La muestra elegida para trabajar fue agua contaminada.El método utilizado fue el Norteamericano:

COLIFORMES TOTALES:

Prueba de lauril sulfato (Prueba presuntiva) Incubamos a 35 – 37 0C x 24 – 48 horas

Observamos formación de gas en los tubos.

Tubos 10-1 10-2 10-3

A + + +B + + -C + + +

C.T 3 3 2

Confirmación de coliformes totales en caldo brilla y Agar endo. Incubamos a 35 – 37 0C x 24 – 48 horasObservamos en el Agar endo colonias de halo rojo y en el caldo brilla la presencia de gas.

Placa 10-1 10-2 10-3

A - + +

B - + -----C - + +

Agar Endo

C.T 0 3 2

Tubos 10-1 10-2 10-3

A + + +

B + + -----C + + +

C.T 3 3 2

Coliformes totales: >1.100NMP/g.

En esta prueba nos guiamos para nuestra lectura del caldo brilla.

COLIFORMES FECALES:

Inoculamos una usada de Caldo lauril sulfato en caldo E. Coli. Incubamos a 44.5°C ± 0.1°C x 24 – 48 horas.

Observamos formación de gas.

Tubos 10-1 10-2 10-3

A + + +B + - -----C + + +

C.F 3 2 2

Coliformes fecales: 210NMP/g. E. COLI:

Determinamos la presencia de E. Coli por medio de esta prueba, donde se utiliza caldo lactosado.

Incubamos a 35 – 37°C x 24 horas.

Caldo brilla

Tubos 10-1 10-2 10-3

A + + +B + ----- -----C + + +

E.C 3 2 2

Determinación de E. Coli: 210NMP/g.

Para confirmar la presencia de bacilos Gram negativos no esporulados, se realiza la prueba de tinción Gram en caldo lactosado.

Tubos 10-1 10-2 10-3

A + ----- +B + ----- -----C + + +

C.G 3 1 2

Presencia de bacilos Gram negativos: 120NMP/g.

También se puso en placas el caldo lactosado para así poder observar por medio del microscopio la presencia de bacilos Gram negativos. 101-1 102-1 103-1

103-2 101-3 103-3

Prueba de Indol (Kovacs, 1928):

Aquí se incubaron los cultivos puros en caldo triptona, teniendo como resultado la aparición de un anillo color rojo en la superficie del tubo si la prueba es positiva y un anillo amarillo si la prueba es negativa.

(+) (-)

Tubos 10-1 10-2 10-3

A + + -B + ----- -----C + + -P.I 3 2 0

Prueba de Indol (Kovacs, 1928): 93NMP/g.

Prueba de Rojo de Metilo:

En esta prueba se observa como positivo cuando en el tubo aparece el color rojo y negativo cuando hay presencia de coloración amarilla.

(+) (-)

Prueba de Rojo de Metilo: 43NMP/g.

PBA Voges – Proskauer:

Se utilizó caldo glucosa como cultivos, en esta prueba se observa una coloración roja carmesí si la prueba es positiva y amarilla se es negativa.

(+) (-)

Tubos 10-1 10-2 10-3

Tubos 10-1 10-2 10-3

A + - -B + ----- -----C + + -

R.M 3 1 0

A - + +B - ----- -----C - - +

V.P 0 1 2

No hay lectura en la tabla del NMP.

PBA Citrato de Sodio:

En esta prueba se siembra por picadura, aquí se observa que hay crecimiento cuando los tubos con citrato de Simmons cambian de color verde a azul de prusia y negativo cuando se mantiene el color verde.

(+) (-)

Tubos 10-1 10-2 10-3

A - + +B + ----- -----C - + +

C.S 1 2 2

No hay lectura en la tabla del NMP. CONFIRMACIÓN DE E. COLI SEGÚN LOS DATOS OBTENIDOS:

Después de todas la pruebas realizada verificamos si la muestra estudiada contiene E. Coli, y esta verificación lo hacemos según la tabla que muestran los comportamientos que tiene esta bacteria según cada prueba realizada.

E. Coli (Típico), presenta las siguientes reacciones:

Gas en caldo Brilla a 44 - 44,5 °C = (+) Prueba de Indol = (+) Prueba del rojo de metilo = (+) Prueba Voges Proskauer = (-) Prueba Citrato = (-)

Tubos 10-1 10-2 10-3

1

Gas : + I : + RM : + VP : -

Gas : + I : + RM : - VP : +

Gas : + I : - RM : - VP : +

CS : - CS : + CS : +

2

Gas : + I : + RM : + VP : - CS : +

3

Gas : + I : + RM : + VP : - CS : -

Gas : + I : + RM : + VP : - CS : +

Gas : + I : - RM : -

VP : --- CS : +

total 2 0 0

El contenido total de E. Coli, que contuvo el alimento fue de:90NMP de gérmenes x ml de H2O.

VI. DISCUSIONES:

Tras lo resultados obtenidos, se pudo observar la presencia de E. Coli en la muestra utilizada, indicándonos que la muestra analizada estaba contaminada muy posiblemente por heces, ya que la muestra utilizada fue agua obtenida del envase de un perro.

VII. CONCLUSIONES:

Por medio de la muestra elegida, pudimos observar todo los métodos, etapas que se siguen para determinar la presencia de Colifomes.

La determinación de bacterias coliformes fecales y totales, pueden estar presentes tanto en los alimentos como en los sistemas de agua potable, ya que estos microorganismos se pueden transmitir a través de las heces fecales.

El hallazgo de coliformes en un alimento no necesariamente quiere decir que hubo contaminación fecal, sino que puede ser producida por una mala manipulación del personal.

VIII. RECOMENDACIONES:

Para poder observar los coliformes es importante obtener una muestra que creamos que esta contaminada para así poder llegar al objetivo de esta práctica que es determinar la presencia de estos microorganismos.

IX. BIBLIOGRAFÍA:

C.H. COLLINS, PATRICIA M. LYNE “Métodos Microbiológicos”. Editorial: Acribia S.A. Zaragoza (España).

E. PASCUAL ANDERSON M. 1989. “Microbiología Alimentaría”. Madrid-España.

PELCZAR, REID, CHAN “Microbiología”. Editorial: McGraw-Hill.4ª Edición. México D.F.

RHEINHE MER. GERHARD “Microbiología de las aguas”.Editorial: Acribia, Zaragoza - España

www.basktek.com.mx/atributos.html. www.biocen.cu/producto/indicemc/lmcp6.htm. www.monografias.com/trabajos14/problemadelagua/

problemadelagua.shtm www.semarnat.gob.mx/playas/nuevo/analisis_tecnico02.

X. CUESTIONARIO:

1. Describa brevemente las características de taxonomía, físicas, químicas, bioquímicas y de cultivo, de los microorganismos que conforman el grupo Coliformes.

Características taxonómicas: Escherichia. Klebsiella. Enterobacter. Citrobacter. Características físicas:Bacilos cortos.Gran (-).Se define en los métodos de examen de agua y de leche.No forman esporas. Se desarrollan a una T° de entre 43.5 – 45.5 °C.Se desarrollan a un pH entre 4.0 – 4.5.Son Aerobios y Anaerobios facultativos.

Características químicas: Capacidad para crecer en presencia de sale biliares. Pueden identificarse por la producción o no de acidez

mediante indicadores como el Rojo de Metilo, Fenolftaleina, etc.

También se lo identifica por medio de las reacciones químicas que producen por medio de pruebas de Indol, prueba de rojo de metilo, prueba de VP y prueba de citrato de sodio.

Características bioquímicas: Ser aerobias o anaerobias facultativas. Ser gram negativas. No ser esporógenas. Fermentar la lactosa a 35 °C en 48 horas.

Características de cultivo:Caldo lauril Sulfato.Caldo Brilla.

Agar Endo.Caldo E. Coli.Agar Mac Conkey.Agar nutritivo.Caldo Glucosado.Caldo Peptonado.Caldo Triptona.Agar Citrato de Simmons.

2. ¿Defina lo que es un microorganismos indicador de la contaminación fecal, y cuál es su significado en los alimentos?

Un microorganismo indicador es aquel que su presencia en los alimentos indican una posible contaminación por microorganismos patógenos.Su significado en los alimentos es ayuda a asegurar la calidad microbiológica del alimento y la calidad y limpieza con que este alimente ha sido tratado.

3. Describa la función que desempeñan cada uno de los componentes de los medios de cultivo descritos en la presente práctica.

Caldo glucosa:Sirve para el cultivo y multiplicación de diversas especies de bacterias. Este medio de cultivo no contiene más carbohidratos fermentables que glucosa, y por tanto, también son adecuadas para la demostración del consumo de glucosa cuando se señala previamente el indicador de pH.

Este medio se utiliza para la detección y recuento total de Unidades Formadoras de Colonias de organismos termófilos formadores de esporas y mesófilos en muestras, mediante la técnica de filtración por membrana.

Agar Mac Conkey:Es el medio primario selectivo y diferencial que se emplea mas a menudo; contiene violeta cristal para inhibir el crecimiento de cocos grampositivos y rojo neutro como indicador de pH, que le otorga propiedades diferenciales. Los bacilos gram negativos desarrollan fácilmente ; los fermentadores de lactosa producen metabolismo ácidos que disminuyen el pH de medio próximo a la colonia. En esa zona el rojo neutro vira al rojo. Los no fermentadores de lactosa permanecen incoloros y translúcidos.

Caldo lactosado:Medio para el ensayo presuntivo de bacterias coliformes en aguas, alimentos y productos lácteos.

Agar nutritivo:

Medio para fines generales que promueve el crecimiento de la mayoría de los microorganismos poco exigentes.

Agar Endo – C:Debido a su contenido de sulfito sodio y fucsina, queda reprimido considerablemente el crecimiento de bacterias gram (+). Los Coliformes degradadores de lactosa , producen aldehídos y ácidos. En el caso de E. Coli esta reacción esta tan intensa que llega a cristalizarse la fucsina confiriendo a las colonias un brillo metálico.

Base destinada a la preparación del medio para la diferenciación e identificación de bacterias coliformes basadas en la fermentación de la lactosa.

Caldo EC:Medio para la detección y diferenciación de bacterias coliformes en aguas, alimentos y otros materiales.

Agar Citrato según Simmons:La degradación del citrato produce una alcalinidad del medio que se conoce por viraje de color azul oscuro del indicador del PH del bromotimol.

Agar Plate Count:Medio de cultivo exentos de sustancias inhibidoras e indicadores, para la determinación preponderante del número total de gérmenes en leche, productos lácteos y agua. Debido a su contenido equilibrado en sustancias nutritivas, el Agar peptona de caseína, glucosa, extracto de levadura hace posible la obtención del espectro de gérmenes total.

Caldo brilla:La bilis y el verde brillante inhiben notablemente el crecimiento de la flora acompañante indeseable, inclusive CLOSTRIDIUM degradadores de la lactosa. La fermentación de la lactosa con producción de gas, como índice de la presencia de coliformes, se investiga mediante tubitos de fermentación de DURHAN.

Caldo lauril sulfato:Debido a la elevadísima calidad nutritiva, condicionada por la triptosa, así como el tampón de fosfato incluido en su formula, se garantiza un establecimiento precoz de la fase logarítmica de una aplicación y una formación mas intensa de gas inclusive las coliformes que fermentan lentamente la lactosa.

Caldo MR – VP:Algunas bacterias fermentan la glucosa bajo fermentación exclusiva de ácidos, por lo que el valor del PH del medio

disminuye por debajo de 4.4 otros transforman el ácido fermentado a su fase de nuevo haría, por lo que el valor del ph del medio disminuye intensamente. Esta diferencia en el campo fermentativo puede hacerse visible mediante el rojo de metilo, el cual presenta un color amarillo por encima del ph 5.1 y solo toma color rojo por debajo del pH 4.4 .

4. ¿Dónde se requieren más diluciones en una muestra fresca o en una muestre procesada, y por que?

Más diluciones se requieren el las muestras frescas ya que estas se encuentran con su flora microbiana total, en cambio en los alimentos procesados estos ya han pasado por diversos tratamientos como térmicos, siendo su flora microbiana atacada.

5. Exponga todo acerca de la influencia de los Coliformes, Colifecales y E. Coli en la salud del hombre.

Las coliformes (Klebsiella, Enterobacter, Serratia), son microorganismos patógenos que en la actualidad son los causantes principalmente de infecciones del sistema respiratorio y urinario.

También en el caso de Arizona, Edwardsiella, Citrobacter; producen en su patogenicidad para el hombre gastroenteritis o septicemia.

Muchas enfermedades infecciosas del hombre como la fiebre tifoidea, la disentería y el cólera son causadas por bacterias patógenas que se transmiten por medio de aguas contaminadas, donde por medio de esta también se puede producir hepatitis A, rotavirus, etc.

6. Explique el fundamento de la actividad de E. Coli en cada uno de los medios de cultivo utilizados en la bioquímica IMViC, y el porqué de las reacciones coloreadas al adicionar los respectivos reactivos?

Prueba del Indol:E. coli produce Indol en caldo que contiene triptófano. Dentro del reactivo de Kovacs hay tres componentes que son: Paradimetil – amino – benzaldehido (5 g) Alcohol amílico (75 ml) ácido clorhídrico puro (25 ml)

En el reactivo de Kovacs hay un aldehído que es un alcohol que cuando se mezcla con el Indol escatol produce una coloración rojo fucsia.

Prueba del Rojo de Metilo:Esta prueba indica el final del cultivo en caldo con 0.5% de glucosa después de una incubación de 4 días a 37°C. E. Coli da un pH inferior de 4.5 y es, por tanto, rojo de metilo positiva.

Prueba de Voges-Proskauer:Depende de la producción de acetilmetilcarbinol a partir de glucosa. En presencia de un álcali este compuesto es oxidado a diacetilo y da un álcali este compuesto es oxidado y da una coloración rosada (especialmente Enterobacter).

Prueba del Citrato Simmons:Utilización del citrato como única fuente de carbono (características de microorganismos de vida libre).

Este citrato tiene un compuesto que es el citrato de sodio. El E. Coli degrada por medio de una encima desligando en otra componente (ácido acético SO2) volviéndose bicarbonato, carbonatos cambiando el pH del medio de cultivo y el indicador de pH es el azul de bromotimol al elevarse el pH cambia el color verde al azul.