Tincin de GramBacterias gram positivas deBacillus
anthracis(bacilos morados) que producen una enfermedad
llamadaCarbunco, encontrados en una muestra delquido
cerebroespinal. Si hubiera una especie de bacteria gram negativa,
aparecera de color rosa. El resto son losleucocitosque atacan la
infeccin.
Una tincin gram en la que se observa un mezclado
deStaphylococcus aureus(cocogram positivo) yEscherichia
coli(bacilogram negativo).Latincin de Gramocoloracin de Grames un
tipo detincin diferencialempleado enbacteriologapara la
visualizacin debacterias, sobre todo en muestras clnicas. Debe su
nombre al bacterilogodansChristian Gram(1853-1938), que desarroll
la tcnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la
morfologa celular bacteriana, como para poder realizar una primera
aproximacin a la diferenciacin bacteriana, considerndosebacterias
gram positivasa las que se visualizan de color morado, ybacterias
gram negativasa las que se visualizan de color rosa, rojo o
grosella.ndice[ocultar] 1Metodologa 1.1Explicacin 2Teoras 3Pasos
para realizar la tincin 4Bacterias resistentes a la tincin gram
5Utilidades 6Fundamentos de diferenciacin de gram positivo y gram
negativo 7Factores que alteran la tincin de Gram
8BibliografaMetodologa[editar] Recoger muestras. Hacer el extendido
con un palillo de madera. Dejar secar a temperatura ambiente o
fijarlas utilizando un mechero. Fijar la muestra con metanol
durante un minuto o al calor (flameado tres veces aproximadamente).
Agregar azul violeta (cristal violetao violeta de genciana) y
esperar un minuto. Enjuagar con agua no directamente sobre la
muestra Agregarlugoly esperar un minuto aproximadamente.
Agregaralcoholacetonay esperar entre 5 y 30 segundos segn la
concentracin del reactivo (parte crtica de la coloracin). (las gram
- se decoloran, las gram + no) Enjuagar con agua. Tincin de
contraste agregandosafraninaofucsinabsica y esperar un minuto. Este
tinte dejar de color rosado-rojizo las bacterias gram negativas.
luego lavar levemente con aguaPara observar al microscopio ptico es
conveniente hacerlo a 100x con aceite de
inmersin.Explicacin[editar]Elcristal violeta(colorante catinico)
penetra en todas las clulas bacterianas (tanto gram positivas como
gram negativas) a travs de la pared bacteriana. Ellugoles un
compuesto formado por I2(yodo) en equilibrio con KI (yoduro de
potasio) y Sl (Siulterio), los cuales estn presente para
solubilizar el yodo, y actan de mordiente, haciendo que el cristal
violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la clula
bacteriana. El I2entra en las clulas y forma un complejo insoluble
en solucin acuosa con el cristal violeta..La mezcla de
alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloracin,
ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los
organismos gram positivos no se decoloran, mientras que los gram
negativos s lo hacen.Para poner de manifiesto las clulas gram
negativas se utiliza una coloracin de contraste. Habitualmente es
un colorante de color rojo, como lasafraninao lafucsina. Despus de
la coloracin de contraste las clulas gram negativas son rojas,
mientras que las gram positivas permanecen violetas.La safranina
puede o no utilizarse, no es crucial para la tcnica. Sirve para
hacer una tincin de contraste que pone de manifiesto las bacterias
gram negativas. Al trmino del protocolo, las gram positivas se vern
azul-violceas y las gram negativas, se vern rosas (si no se hizo la
tincin de contraste) o rojas (si se us, por ejemplo,
safranina).Esta importante coloracin diferencial fue descubierta
por Hans Christian Gram en 1884. En este mtodo de tincin, la
extensin bacteriana se cubre con solucin de uno de los colorantes
de violeta de metilo, que se deja actuar durante un lapso
determinado. Se escurre luego el exceso de violeta de metilo y se
aade luego una solucin de yodo, que se deja durante el mismo tiempo
que la anterior; despus se lava elportaobjetoscon alcohol hasta que
ste no arrastre ms colorante. Sigue a tal tratamiento una coloracin
de contraste, como safranina, fucsina fenicada diluida, pardo
Bismarck, pironin B o hasta inclusive verde de malaquita.Algunos
microorganismos retienen el colorante violeta, an despus de
tratarlos con un decolorante, y el color no se modifica al aadir
ste; otros pierden con facilidad el primer tinte, y toman el
segundo. Los que fijan el violeta, se califican de grampositivos, y
los que pierden la primera coloracin y retienen la segunda, de
gramnegativos. Basndonos pues, en la reaccin gram, podemos
clasificar a los microorganismos en uno de los dos grupos. Los
colorantes dep-rosanilinason los que mejores resultados dan en la
coloracin gram. Los representantes ms usados de este grupo son
violeta de metilo y violeta cristal o de genciana. En realidad,
violeta de metilo es el nombre atribuido al
compuestotetrametil-p-rosanilina.El matiz de color de la
p-rosanilina se intensifica al aumentar el nmero de grupos metilo
en la molcula; por consiguiente, de los tres grupos, el tono ms
oscuro es lahexametil-p-rosanilina(violeta cristal), y el tinte ms
ligero, la tetrametil-p-rosanilina (violeta de metilo). Los nombres
violeta de metilo 3R, 2R, R, B, 2B, 3B, etc., se refieren al nmero
de grupos metilo contenidos. La letra R indica matices rojos, y la
letra B, tonos azules. El violeta de cristal contiene seis grupos
metilo, y se considera como el mejor colorante primario para teir
por el mtodo de Gram.La facultad de las clulas para tomar la
coloracin gram no es propia de toda sustancia viviente, sino que se
limita casi en absoluto a hongos y bacterias. As vemos que las
clulas de plantas y animales superiores no conservan la primera
coloracin; los mohos se tien con cierta irregularidad; los grnulos
de micelios propenden retener el colorante. La reaccin de Gram no
es infalible ni constante; puede variar con el tiempo del cultivo y
el pH del medio, y quiz por otras
causas.Teoras[editar]Unmicroorganismogram positivo debe presentar
una pared celular sana. El mismo microorganismo, si sufre dao de la
pared por una u otra causa, se vuelve gram negativo. Esto indica la
importancia de la pared para la retencin o el escape del colorante.
Una posible teora del mecanismo de tincin es la siguiente:El
colorante bsico entra al microorganismo, donde forma con elyodouna
laca insoluble en agua. Elalcoholo laacetonaempleados para aclarar,
deshidrata las paredes de los microorganismos gram positivos,
tratados con mordiente, y forma una barrera que la laca no puede
atravesar. En las clulas gram negativas, los lpidos de la pared (ms
abundantes que en las clulas grampositivas) se disuelven por este
tratamiento, lo que permite el escape del complejo de cristal
violeta con yodo. Algunos autores objetan esta teora, pero es
indudable la importancia general de la pared celular.Varias son las
teoras emitidas para explicar el mecanismo de la tincin de Gram.
Stearn (1923) bas la suya en una combinacin qumica entre el
colorante y las protenas de las bacterias, Las protenas y
aminocidos son cuerpos anfteros, esto es, tienen la facultad de
reaccionar con cidos y con bases, gracias a sus grupos amino y
carboxilo; en soluciones cidas, reaccionan con los cidos, y en
soluciones alcalinas lo hacen con las bases. De igual manera,
comprobaron que la reaccin de tincin de las bacterias obedece en
gran parte a su contenido protenico; estos microorganismos se
conducen como cuerpos anfteros, al combinarse con colorantes cidos
en soluciones cidas y con los bsicos en medio alcalino. La
combinacin con ambos tipos de colorante no se produce en el punto
isoelctrico. Como los microorganismos contienen ms de una protena,
ese punto no tiene un valor preciso y definido, sino que constituye
ms bien una gama o escala que comprende dos o tres unidades de pH.
Segn Stern y Stearn, los microorganismos grampositivos tienen una
escala isoelctrica de pH inferior a la de los microorganismos
gramnegativos; y, a base de sus datos experimentales, deducen las
siguientes conclusiones: Los microorganismos grampositivos pueden
hacerse gramnegativos al aumentar la acidez. Los microorganismos
gramnegativos pueden hacerse grampositivos al aumentar la
alcalinidad. Los microorganismos de reaccin positiva a los
colorantes cidos pueden hacerse gramnegativos por aumentar la
alcalinidad. Los microorganismos de reaccin positiva a los
colorantes bsicos pueden hacerse gramnegativos por aumentar la
acidez. En la zona isoelctrica caracterstica de cada especie es muy
escasa la tendencia a retener cualquier colorante. Parece estar
bien demostrado que las protenas de las bacterias no son simples,
sino ms bien una dbil combinacin de sustancias protenicas con otras
lipoideas o grasas. La materia grasa extrada de los microorganismos
grampositivos difiere de la obtenida de los microorganismos
gramnegativos, en que la primera contiene una proporcin mucho mayor
de cidos no saturados que muestren gran afinidad por los agentes
oxidantes. Todos los mordientes (como el yodo) empleados en la
coloracin gram son oxidantes; su efecto, en general, consiste en
dar a la sustancia oxidada un carcter ms cido. Esto aumenta la
afinidad de un microorganismo por los colorantes bsicos. El cambio
de respuesta a la coloracin de Gram con el tiempo es propio, sobre
todo, de los microorganismos dbilmente grampositivos cultivados en
los medios que contengan sustancias capaces de fermentar, y cuya
reaccin se vuelve cida en el curso del desarrollo.Gianni (1952)
comprob que los microorganismos grampositivosBacillus
subtilisyBacillus anthracistomaban negativamente el gram cuando los
cultivos databan de dos a tres horas. Luego se desarrollaba la
sustancia grampositiva debajo de la pared celular, para invertir la
reaccin. Otra explicacin de la reaccin de Gram puede ser la posible
existencia de una capa exterior alrededor de un ncleo gramnegativo.
Libenson y Mcllroy, han comunicado que si la reaccin grampositiva
depende de que se forme una combinacin compleja entre los
componentes de la coloracin de Gram y las protenas de la pared
celular, sera de esperar que las bacterias desintegradas por medios
fsicos retuviesen este tinte, ya que ese tratamiento no podra
cambiar el carcter qumico de los materiales de dicha pared. Por el
contrario, los grmenes grampositivos desintegrados pierden su
capacidad de retener el colorante primario y toman negativamente el
gram.La pared celular de los microorganismos grampositivos y
gramnegativos es permeable al violeta cristal. Sin embargo, la de
los primeros no lo es al complejo de yodo y colorante formado en el
interior de la clula. Los resultados experimentales obtenidos con
una difusin celular exenta de protenas, y la escasa solubilidad del
complejo de yodo y violeta cristal en alcohol y acetona, parecen
sustentar la opinin de que la reaccin grampositiva consiste
esencialmente en la formacin, dentro de la clula, de una cantidad
apreciable de complejo de yodo y colorante difcil de eliminar con
el disolvente. La pared celular de los microorganismos
grampositivos, a diferencia de la de los gramnegativos, sera
prcticamente impermeable al violeta cristal. Los microorganismos
aparecern teidos despus de tratarlos con violeta cristal, por ser
absorbido el colorante en la superficie externa de la pared
celular, y el disolvente eliminar sin dificultad el complejo
formado despus del tratamiento con yodo.Ni los grupos sulfhidrilo
ni las protenas bsicas han influido especficamente en el mecanismo
del colorante de Gram. Libenson y Mcllroy han sostenido que la
permeabilidad de la pared celular al violeta cristal, la escasa
solubilidad del complejo de yodo y colorante en alcohol y acetona,
y el libre acceso del disolvente al complejo constituido, son los
principales factores que intervienen en el mecanismo de esa
coloracin.Pasos para realizar la tincin[editar]Los pasos que se han
de seguir para realizar la tincin son los siguientes:1) Se fija la
muestra mediante calor.2) Cristal Violeta (tie todas las bacterias,
gram positivas y gram negativas) durante 1 minuto.3) Se fija con
Lugol, 1 minuto.4) Se decolora con una mezcla de alcohol y cetona
(los gram negativos se decoloran).5) Safranina (colorante de
contraste, que tie a los gram negativos), 1 minuto.Los tiempos para
aplicar cada colorante son orientativos. En la tincin, las gram
positivas se observarn de color azul-violeta, y las gram negativas
de color rosa.Bacterias resistentes a la tincin gram[editar]Las
siguientes bacterias de naturaleza grampositiva se tien como
gramnegativas: Mycobacterias(estn encapsuladas). Mycoplasmas(no
tienen pared). Formas L(prdida ocasional de la pared).
Protoplastosyesferoplastos(eliminacin total y parcial de la pared,
respectivamente).Utilidades[editar]En el anlisis de muestras
clnicas suele ser un estudio fundamental por cumplir varias
funciones: Identificacin preliminar de labacteriacausal de
unainfeccin. Utilidad como control calidad del aislamiento
bacteriano. Losmorfotipos bacterianosidentificados en la tincin de
Gram se deben de corresponder con aislamientos bacterianos
realizados en los cultivos. Si se observan mayor nmero de formas
bacterianas que las aisladas hay que reconsiderar los medios de
cultivos empleados as como la atmsfera de incubacin.A partir de la
tincin de Gram pueden distinguirse varios morfotipos distintos:
Loscocosson de forma esfrica. Pueden aparecer aislados despus de la
divisin celular (micrococos), aparecer por pares (diplococos),
formar cadenas (estreptococos), o agruparse de manera irregular
(estafilococos).Losbacilosposeen forma alargada. En general suelen
agruparse en forma de cadena (estreptobacilos) o en
empalizada.Tambin pueden distinguirse losespirales, que se
clasifican enespirilos(si son de forma rgida) oespiroquetas(si son
blandas y onduladas). Si por el contrario, poseen forma de coma (o
curvados) entonces se los designavibrios.Fundamentos de
diferenciacin de gram positivo y gram negativo[editar]Los
fundamentos de la tcnica se basan en las diferencias entre
lasparedes celularesde las bacterias gram positivas y gram
negativasLa pared celular de las bacterias gram positivas posee una
gruesa capa depeptidoglicano, adems de dos clases decidos
teicoicos: anclado en la cara interna de la pared celular y unido a
la membrana plasmtica, se encuentra elcido lipoteicoico, y ms en la
superficie, elcido teicoicoque est anclado solamente en el
peptidoglicano (tambin conocido comomurena).Por el contrario, la
capa de peptidoglucano de las gram negativas es delgada, y se
encuentra unida a una segunda membrana plasmtica exterior (de
composicin distinta a la interna) por medio de lipoprotenas. Tiene
una capa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior
porlipoprotenas. La membrana exterior est hecha
deprotena,fosfolpidoylipopolisacrido.Por lo tanto, ambos tipos de
bacterias se tien diferencialmente debido a estas diferencias
constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es
el material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana,
y las gram positivas lo poseen en mucha mayor proporcin que las
gram negativas.La diferencia que se observa en la resistencia a la
decoloracin, se debe a que la membrana externa de las gram
negativas es soluble ensolventes orgnicos, como por ejemplo la
mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglucano que posee es
demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal
violeta/yodo que se form previamente, y por lo tanto este complejo
se escapa, perdindose la coloracin azul-violcea. Pero por el
contrario, las gram positivas, al poseer una pared celular ms
resistente y con mayor proporcin de peptidoglicanos, no son
susceptibles a la accin del solvente orgnico, sino que este
actadeshidratandolos poros, cerrndolos, lo que impide que pueda
escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la
coloracin azul-violeta.Factores que alteran la tincin de
Gram[editar] Edad de la bacteria. Errores del operador. Uso de
antibiticosA pesar de la gran utilidad de la tincin de Gram, este
mtodo debe ser valorado con precaucin, ya que la reaccin puede
variar segn la edad de las clulas (cultivos viejos de bacterias
grampositivas pueden perder capas de peptidoglicanos y teirse como
gram negativos) y la tcnica empleada (al decolorar por un tiempo
muy prolongado se puede correr el riesgo que bacterias gram
positivas se tian como gram negativas). Por esta situacin, junto a
la muestra deben teirse controles con bacterias gram positivas (por
ejemploStaphylococcus aureus) y gram negativas (por
ejemplo,Escherichia
coli).https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_GramTincin de
GramLatincin de Gram, tambin conocida como coloracin de Gram, es
una tcnica de laboratorio que se utiliza rutinariamente en los
estudios microbiolgicos de lasbacterias. Fue diseada por Christian
Gram, un cientfico dans, en el ao 1884. El objetivo de Gram era
conseguir una prueba con la que fuera posible diferenciar
diferentes grupos de bacterias para as poder estudiarlas y
clasificarlas. La prueba result todo un xito y pronto se convirti
en una tcnica muy til no solo para el estudio de las bacterias,
sino tambin para poder identificarlas rpidamente en una infeccin
yseleccionar elantibiticoms adecuadopara tratarla.La tcnica se basa
en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier
origen (esputo, orina, pus, etctera) que supuestamente contenga
bacterias no identificadas. Los colorantes tien la pared de las
bacterias de color morado y, tras unos minutos, se realiza un
lavado del colorante. Despus de eso puede que el colorante
permanezca en la pared bacteriana o que se haya ido. En el primer
caso permanecera el color morado, y se tratara de bacteriasGram
positivasy, en el segundo, la pared tendra un color rosado, y
seranGram negativas.Estos dos grupos de bacterias son los pilares
en los que se basa la clasificacin de la ampla mayora de las
bacterias. Cada uno de los grupos responde de forma diferente a
cada tipo de antibiticos, por eso es una tcnica til para
seleccionar el frmaco antimicrobiano inicial ante una infeccin. Hay
que tener en cuenta que en ciertas situaciones (como lasepsis) es
muy importante iniciar un tratamiento antibitico adecuado de forma
precoz, por eso la tincin de Gram se pide de urgencia en muchas
ocasiones.La tincin de Gram tambin tiene ciertas limitaciones.
Algunas bacterias no tienen pared, como por ejemplo lasChlamidias,
y no se podrn identificar, al igual que los virus. En esos casos la
tincin no colorear ningn germen. Otro aspecto negativo de la prueba
es que no puede identificar el tipo exacto de bacteria responsable
de la infeccin. Para ello es necesario realizar un cultivo
microbiolgico que se acompaa siempre de un antibiograma para
estudiar de forma exacta el antibitico ms
efectivo.http://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/tincion-de-gram-13399LA
TINCIN NDE GRAMLa tincin de Gram es uno de los mtodos de tincin ms
importantes en el laboratorio bacteriolgico y con el que el lector
debe estar perfectamente familiarizado. Su utilidad prctica es
indiscutible y en el trabajo microscpico de rutina del Laboratorio
de Microbiologa las referencias a la morfologa celular bacteriana
(cocos, bacilos, positivos, negativos, etc.) se basan justamente en
la tincin de GRAM
Esta tincin se denominada as por el bacterilogo dans Christian
Gram, quien la desarroll en 1844. Sobre la base de su reaccin a la
tincin de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos,
grampositivas y gramnegativas (simplemente designan dos grupos
morfolgicos distintos de bacterias).Las bacterias gram-positivas y
gram-negativas tien de forma distinta debido a las diferencias
constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La pared
de la clula bacteriana sirve para dar su tamao y forma al organismo
as como para crear una barrera fsica contra el medio ambiente
externo. El material de la pared celular que le darigidez es el
peptidoglicano. La pared de la clula gram-positiva es gruesa y
consiste en varias capas interconectadas de peptidoglicano as como
algo de cido teicoico. La pared de la clula gram-negativa, por otro
lado, contiene una capa mucho ms delgada, (solo una unidad de
espesor) nicamente de peptidoglicano y est rodeada por una membrana
exterior compuesta de fosfolpidos, lipopolisacridos, y
lipoprotenas.Las bacterias Gram + retienen el cristal violeta
despus de la decoloracin y aparecen de color azul intenso. Las
bacterias Gram- no son capaces de retener el cristal violeta despus
de la decoloracin, y son teidas de rojo con el colorante de
contraste safranina dando un color rosa suave.
La tincin de Gram es capaz de predecir el tipo de bacteria que
est causando la infeccin, conocindolo La diagnostica y la trata ms
fcilmente. Los virus no pueden detectarse mediante tincin de Gram
puesto que carecen de la pared que capta el colorante.EL
MICROSCOPIOEste instrumento, sirve para observar objetos muy
pequeos, los cuales no pueden ser observados a simple vista. O sea,
el ojo humano, sin la ayuda de algn aparato, sera incapaz de ver
estos objetos.
El microscopio ms utilizado, es el de tipo ptico. Este,
asimismo, fue el primero en ser desarrollado. Este microscopio,
para su funcionamiento utiliza varias lentes, con las cuales se
consigue ver un objeto amplificado, en cuanto a su tamao real.
Estos microscopios, funcionan por medio de la refraccin.
BIBLIOGRAFIA-TINCIN DE GRAMCitado el 12 de septiembrede
2009http://erikaquiceno.blogspot.mx/2009/09/tincion-de-gram-resumen.htmlTincin
de Ziehl-Neelsen
Visualizacin deMycobacterium tuberculosisusando la tincin de
Ziehl-Neelsen.Latincin de Ziehl-Neelsenes una tcnica detincin
diferencialrpida y econmica, usada para la identificacin de
bacterias cido-alcohol resistentes (BAAR) , comoM. tuberculosiso el
gnero Apicomplexa (coccidios intestinales) entre otros. Fue
descrita por primera vez por dos mdicos alemanes:Franz Ziehl, un
bacterilogo, yFriedrich Neelsen, un patlogo.Fundamento[editar]Las
paredes celulares de ciertas bacterias contienen cidos grasos
(cidos miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les
confieren la propiedad de resistir la decoloracn con alcohol-cido,
despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto se denominan
cido-alcohol resistentes. Las micobacterias como Mycobacterium
tuberculosis y M. marinum se caracterizan por sus propiedades de
cido-alcohol resistencia. La coloracin clsica de Ziehl-Neelsen
requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared
bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y
enfriar con agua, provoca una nueva solidificacin de lo cidos
grasos de modo que el colorante ya no puede salir de las bacterias.
Por otro lado, el calentamiento aumenta la energa cintica de las
molculas del colorante lo cual tambin facilita su entrada a las
bacterias. Las bacterias que resisten la decoloracin son de color
rojo y las que no, se ven de color azul ya que se utiliza azul de
metileno como tincin de
contraste.https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Ziehl-NeelsenEsta
tincin demuestra la capacidad de bacterias teidas deresistir a la
decoloracin por cidos y alcoholes. Esto se correlaciona con su alto
contenido en lpidos de su pared celular y presencia decidos
miclicosque aumentan el carcter hidrfobo.Mezcla
encarbol-fuscinacapaz de teir las clulas encaliente. El carbol
facilita la penetracin de fuscina en la envoltura
celular.Decolorante orgnico, mezcla decidoyalcohol.Azul de metileno
como colorante de contraste.LosBaciloAlcoholcidoResistente (BAAR)
tras la unin de la fucsina, resisten el tratamiento orgnico y se
vern teidas derosado/fuscia. El resto de las bacterias se
decolorarn y se contrastarn con azul de metileno.El observar BAAR
(+) en una muestra de esputo, no significa que esos bacilos sean
necesariamente de M.
tuberculosis.Citarhttp://www.telmeds.org/atlas/bacteriologia/mycobacterias-nocardia-y-actinomyces/muestra-de-esputo-baar-con-tincion-de-ziehl-neelsen/mircoles,
8 de junio de 2011Ziehl-Neelsen
La tincin de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una tcnica de tincin
diferencial rpida y econmica, para la identificacin de
microorganismos patgenos, por ejemplo M. tuberculosis.Fue descrita
por primera vez por dos mdicos alemanes, Franz Ziehl, un
bacterilogo y Friedrich Neelsen, un patlogo.FundamentoLas paredes
celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cidos grasos
(cidos miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les
confieren la propiedad de resistir la decoloracn con alcohol-cido,
despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto se denominan
cido-alcohol resistentes. Las micobacterias como M. tuberculosis y
M. marinum y los parsitos coccdeos como Cryptosporidium se
caracterizan por sus propiedades de cido-alcohol resistencia. La
coloracin clsica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que
el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. Al
suspender el calentamiento y enfriar con agua, provoca una nueva
solidificacin de lo cidos grasos de modo que el colorante ya no
puede salir de las bacterias. Por otro lado, el calentamiento
aumenta la energa cintica de las molculas del colorante lo cual
tambin facilita su entrada a las bacterias. Las bacterias que
resisten la decoloracin son de color rojo y la que no se ven de
color azul, ya que se utiliza azul de metileno como tincin de
contrasteFundamento: los BAAR poseen una pared celular rica en
lpidos y cidos carboxlicos (cido miclico) que tienen la propiedad
de unirse excepcionalmente fuerte al colorante 1rio (fuscina de
Ziehl) cuando se usa el calor como mordiente. Una vez que se forma
este complejo colorante-pared, ni siquiera la accin conjunta del
cido y del alcohol pueden deshacerlo, ya que las paredes retienen
el colorante en forma "resistente".TcnicaSe realiza el frotis. Se
aplica el colorante 1rio sobre la muestra y se deja reposar. Luego
se emplea la llama de un mechero para calentar la muestra hasta la
aparicin de vapores blancos. El calor se emplea como mordiente,
gracias al calor los lpidos de la pared dejan pasar el colorante
para que se combine con los cidos carboxlicos de la pared, as se
forma el complejo colorante-pared. Se deja reposar y se lava con
agua. Las bacterias que no han formado el complejo en su pared (no
BAAR) no retendrn el colorante, el exceso del mismo ser arrastrado
por el agua. Se aplica el colorante 2rio, se deja reposar y se lava
con agua.Coloracin en caliente (Tcnica de Ziehl-Neelsen): emplea el
calor como mordiente para formar el complejo colorante-pared. Es la
tcnica recin descrita. La principal desventaja consiste en que se
puede llevar a cabo una decoloracin en caliente (tiempo
prolongado). Esta consiste en aplicar el decolorante cido-alcohol y
luego calentar la muestra, la capa lipdica se ablanda y el
decolorante puede atravesar la pared celular retirando el
decolorante 1rio y revirtiendo el proceso de formacin del complejo
colorante-pared. Por esto se dice que la coloracin en caliente no
brinda resultados diferenciales.Coloracin en fro (Tcnica de
Kinyoun): utiliza un reactivo especial que adems de fuscina agrega
una[Fenol]. El fenol disuelve los lpidos de las paredes celulares
permitiendo que el colorante 1rio entre el contacto con los cidos
carboxlicos y forme el complejo cido-alcohol resistente. Esta
tcnica permite obtener resultados diferenciales ya que no es
posible la decoloracin en caliente.Publicado
porPedroen19:19http://estudiemedicina.blogspot.mx/2011/06/ziehl-neelsen.htmlTcnicas
de tincin. FundamentosEl tamao de la mayora de las clulas
bacterianas es tal que resultan difciles de ver con el microscopio
ptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la
clula y el medio que la rodea, y el medio ms simple de aumentar el
contraste es la utilizacin de colorantes. Estos pueden emplearse
para distinguir entre tipos diferentes de clulas o para revelar la
presencia de determinados constituyentes celulares, tales como
flagelos, esporas, cpsulas, paredes celulares, centros de actividad
respiratoria, etc.Las clulas generalmente son tratadas para
coagular el protoplasma antes de teirlas, proceso llamado fijacin.
Para bacterias, la fijacin por el calor es lo ms corriente, aunque
tambin puede fijarse con sustancias qumicas como formaldehido,
cidos y alcoholes. Despus de la fijacin, si se aade el colorante,
no se producen ulteriores cambios estruturales en el protoplasma.
La fijacin se realiza habitualmente en clulas que han sido fijadas
sobre un portaobjetos, tratando despus ste con el agente fijador, y
siguiendo inmediatamente el proceso de tincin. La fijacin produce
habitualmente el encogimiento de las clulas; la tincin, por el
contrario, hace que las clulas aparezcan mayores que lo que son
realmente, de manera que las medidas de las clulas que han sido
fijadas o teidas no pueden realizarse con mucha precisin.La mayora
de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna
afinidad especfica por los materiales celulares. Muchos colorantes
utilizados con frecuencia son molculas cargadas positivamente
(cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes
celulares cargados negativamente, tales como los cidos nucleicos y
los polisacridos cidos. Ejemplos de colorantes catinicos son el
azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros
colorantes son molculas cargadas negativameute (aniones) y se
combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente,
tales como muchas protenas. Esos colorantes incluyen la eosina, la
fucsina cida y el rojo Congo. Otro grupo de colorantes son
sustancias liposolubles; los colorantes de este grupo se combinan
con los materiales lipdicos de la clula, usndose a menudo para
revelar la localizacin de las gotculas o depstos de grasa. Un
ejemplo de colorante liposoluble es el negro Sudn.Algunos
colorantes teirn mejor slo despus de que la clula haya sido tratada
con otra sustancia qumica, que no es un colorante por s mismo. Esta
sustancia se denomina mordiente; un mordiente habitual es el cido
tnco. El mordiente se combina con un constituyente celular y lo
altera de tal modo que ahora s podr atacar el colorante.Si se desea
simplemente incrementar el contraste de las clulas para la
microscopa, son suficientes los procedimientos simples de tincin.
El azul de metileno es un buen colorante simple que acta sobre
todas las clulas bacterianas rpidamente y que no produce un color
tan intenso que oscurezca los detalles celulares. Es especialmente
til para detectar la presencia de bacterias en muestras naturales,
puesto que la mayor parte del material no celular no se tie.La
tincin negativa es el reverso del procedimiento de tincin usual:
las clulas se dejan sin teir, pero se colorea en cambio el medio
que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las clulas.
La sustancia utilizada para la tincin negativa es un material opaco
que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que
simplemente rodea las clulas, tal como la tinta china (que es una
suspensin de particulas de carbono coloidal) o la nigrosina (un
colorante negro insoluble en agua). La tincin negativa es un modo
satisfactorio de aumentar el contraste de las clulas en la
microscopia ptica, pero su mxima utilidad est en revelar la
presencia de cpsulas alrededor de las clulas bacterianas.Los mtodos
de tincin son de gran utilidad, pero deben usarse siempre con
precaucin, ya que pueden conducir a errores. Las molculas de
colorante forman en ocasiones precipitados o agregados que parecen
estructuras celulares autnticas, pero que son formaciones
completamente artificiales inducidas por el mismo colorante. Tales
estructuras se denominan artefactos, y deben tomarse muchas
precauciones para tener la seguridad de que no nos estamos
equivocando al creer que un artefacto es una estructura realmente
existente.Preparacin de un frotisSobre un portaobjetos de vidrio,
limpio y seco, se coloca una gota del material que se va a teir (si
es lquido) o se hace rodar el hisopo con que se tom la muestra. Una
vez que el hisopo ha tocado la superficie del portaobjetos, que no
est estril, ya no puede ser empleado para inocular los medios de
cultivo. Puede usarse una aguja estril para transferir una pequea
cantidad de un cultivo bacteriano a la superficie del portaobjetos.
Este material es suspendido en una gota de agua o solucin salina
previamente colocada sobre el portaobjetos. Cuando se trata de
colonias muy pequeas que pueden perderse en una gota de lquido se
emplea una varilla delgada de madera estril con la cual se toca la
colonia obtenindose as una fraccin apreciable del desarrollo. El
material se frota directamente sobre el portaobjetos, donde puede
visualizarse con facilidad. El material colocado en el portaobjetos
se deja secar al aire o bien se pasa varias veces por la zona azul
de la llama de un mechero de Bunsen hasta que el vidrio est tan
caliente que moleste al tacto pero no queme.
Examen de muestras al microscopioSegn la manipulacin que
efectuemos sobre la muestra a observar y segn los colorantes que
empleemos durante el proceso, podemos hablar de diferentes
modalidades de tincin.Examen microscpico directo de las muestras
clnicasSin TincinNo se utiliza ningn tipo de colorante.Es el
montaje directo hmedo o examen en fresco:las muestras se extienden
directamente sobre la superficie de un portaobjetos para su
observacin. El material que es demasiado espeso para permitir la
diferenciacin de sus elementos puede diluirse con igual volumen de
solucin salina fisiolgica estril. Se deposita suavemente un
cubreobjetos sobre la superficie del material.Este tipo de
preparacin se emplea para detectar trofozotos mviles de parsitos
intestinales comoGiardia,Entamoeba, huevos y quistes de otros
parsitos, larvas y gusanos adultos,Trichomonas, hifas de hongos,
etcEn la imagen:Candidasp en un examen en fresco.Examen microscpico
de las muestras clnicas levemente modificadasTincin SimpleSe
utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras
celulares se tien con la misma tonalidad (Tinta china, Azul
Metileno de Loeffler, Azul de lactofenol).El Hidrxido de potasio al
10% (solucin de KOH) permite ver elementos de hongos ya que el KOH
digiere parcialmente los componentes proteicos, por ejemplo de la
clula husped, pero no acta sobre los polisacridos de las paredes
celulares de los hongos.La tinta china o Nigrosina permite observar
clulas levaduriformes capsuladas (Cryptococcus), sobre todo en LCR.
Los polisacridos capsulares rechazan la tinta china y la cpsula
aparece como un halo claro alrededor de los microorganismos. Azul
de metileno de Loeffler puede agregarse a las preparaciones en
fresco de heces para observar la presencia de leucocitos.En la
imagen:Cryptococcus neoformansen una tincin con tinta china.Examen
microscpico de las muestras clnicas muy modificadasTincin
DiferencialSe utilizan varios colorantes combinados. Las
estructuras celulares se diferencian en funcin de los diferentes
colorantes que fijan de acuerdo con su propia constitucin
qumica.Los ejemplos clsicos sera la tincin de GRAM o la de
Ziehl-NeelsenEn la imagen: BGN y levaduras en una tincin
GRAMmicrofotografa: Daniel Val
Examen de muestras al microscopio: la tincin GRAMLa tincin de
Gram es uno de los mtodos de tincin ms importantes en el
laboratorio bacteriolgico y con el que el estudiante debe estar
perfectamente familiarizado. Su utilidad prctica es indiscutible y
en el trabajo microscpico de rutina del Laboratorio de Microbiologa
las referencias a la morfologa celular bacteriana (cocos, bacilos,
positivos, negativos, etc) se basan justamente en la tincin de
GRAMDescripta en forma breve, la secuencia de la tincin es la
siguiente: el Frotis fijado con calor se tie 1 min con Violeta
Cristal, se lava con agua, se cubre con solucin Yodada durante 1
min y se lava de nuevo con agua, decolorar con mezcla alcohol
etlico/acetona. Escurrir y cubrir con Safranina (color de
contraste) durante 20 seg. Lavar y secar.Esta tincin se denominada
as por el bacterilogo dans Christian Gram, quien la desarroll en
1844. Sobre la base de su reaccin a la tincin de Gram, las
bacterias pueden dividirse en dos grupos, grampositivas y
gramnegativas (en este caso, los trminos positivo y negativo no
tiene nada que ver con carga elctrico, sino simplemente designan
dos grupos morfologicos distintos de bacterias).Las bacterias
gram-positivas y gram-negativas tien de forma distinta debido a
lasdiferencias constitutivas en la estructura de sus paredes
celulares. La pared de la clula bacteriana sirve para dar su tamao
y forma al organismo as como para prevenir la lisis osmtica. El
material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el
peptidoglicano. La pared de la clula gram-positiva es gruesa y
consiste en varias capas interconectandas de peptidoglicano as como
algo de cido teicoico. Generalmente, 80%-90% de la pared de la
clula gram-positiva es peptidoglicano. La pared de la clula
gram-negativa, por otro lado, contiene una capa mucho ms delgada,
nicamente de peptidoglicano y est rodeada por una membrana exterior
compuesta de fosfolpidos, lipopolisacridos, y lipoprotenas. Slo 10%
- 20% de la pared de la clula gram-negativa es
peptidoglicano.Debido a su importancia en taxonoma bacteriana y a
que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las
distintas bacterias, describiremos aqu con algn detalle la tincin
de Gram y las interpretaciones que actualmente se hacen sobre el
porqu de su funcionamiento.Las clulas fijadas al calor sobre un
portaobjetos se tien, primero con una solucin de cristal violeta
(otros colorantes bsicos no son tan efectivos) y son lavadas despus
para quitar el exceso de colorante. En este estado, todas las
clulas, tanto las grampositivas como las gramnegativas, estn teidas
de azul.El portaobjetos se cubre entonces con una solucin de
yodo-yoduro potsico. El ingrediente activo es aqu el I2; el KI
simplemente hace soluble el I2en agua. El I2entra en las clulas y
forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta. De
nuevo tanto las clulas grampositivas como las gramnegativas se
encuentran en la misma situacin.Se lleva a cabo despus la
decoloracin, usando una mezcla de alcohol-acetona, sustancias en
las que es soluble el complejo I2-cristal violeta. Algunos
organismos (grampositivos) no se decoloran, mientras que otros
(gramnegativos) lo hacen. La diferencia esencial entre esos dos
tipos de clulas est por tanto en su resistencia a la decoloracin;
esta resistencia se debe probablemente al hecho de que en el caso
de bacterias gram-negativas, la mezcla de alcohol/acetona es un
solvente lipdico y disuelve la membrana exterior de la pared de la
clula (y tambin puede daar la membrana citoplsmica a la que se une
peptidoglicano). La delgada capa de peptidoglicano es incapaz de
retener el de complejo cristal violeta-yodo y la clula se decolora.
Las clulas grampositivas, a causa de sus paredes celulares ms
espesas (tienen ms peptidoglicano y menos lpido), no son permeables
al disolvente ya que ste deshidrata la pared celular y cierra los
poros, disminuyendo as el espacio entre las molculas y provocando
que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de la
pared celular. Despus de la decoloracin las clulas grampositivas
son todava azules, pero las gramnegativas son incoloras.Para poner
de manifiesto las clulas gramnegativas se utiliza una coloracin de
contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la
safranina o la fucsina bsica. Despus de la coloracin de contraste
las clulas gramnegativas son rojas, mientras que las grampositivas
permanecen azules.Deben destacarse algunos aspectos cruciales de la
tincin de Gram:1) El tratamiento con cristal violeta debe preceder
al tratamiento con yodo. El yodo por s solo tiene poca afinidad con
las clulas.2) La decoloracin debe realizarse con poca agua para
evitar que pierdan la tincin las clulas grampositivas. EI proceso
de decoloracin debe ser corto y es esencial un clculo preciso del
tiempo para obtener resultados satisfactorios.3) Cultivos ms viejo
de 24 horas pueden perder su habilidad de retener el complejo
cristal violeta - yodo.El carcter de grampositivo no es siempre un
fenmeno del todo o nada. Algunos organismos son ms grampositivos
que otros y algunos son gram-variables, es decir, unas veces
grampositivos y otras gramnegativos.Morfologa ultramicroscpica de
las bacterias: estructuras internasPared celularDebajo de las
sustancias extracelulares, como son las cpsulas y cubiertas
mucilaginosas, y en la periferia de una delicada membrana que est
en inmediato contacto con el citoplasma, se encuentra la pared
celular, que es una estructura rgida que da forma a la clula. Las
paredes celulares pueden destruirse o romperse en condiciones
especiales.Constituyentes importantes de la pared celular son los
aminocidos, aminoazcares, azcares y grasas. Estas sustancias
(protenas, Hidratos de carbono, grasas) estn enlazadas formando el
polmero complejo que forma la pared celular.Entre los
constituyentes de la pared celular de las
bacteriasGram-positivasyGram-negativasexisten importantes
diferencias. Por ejemplo, las paredes de las bacterias
gram-positivas contienen menos aminocidos que las gram-negativas;
el contenido graso es mucho ms elevado en las gram-negativas que en
las gram-positivas. Este hecho se ha propuesto como explicacin del
mecanismo de la reaccin al gram (verlas dos imgenes
juntas).Bacteria Gram PositivaBacteria Gram Negativa
Tiene una capa gruesa de peptidoglicano (mureina) y dos clases
de cidos teicoicos. cido Lipoteicoico que est en la superficie,
empotrado en la capa de peptidoglicano y unido a la membrana
citoplsmica. Y cido teicoico de la pared que est en la superficie y
se une slo a la capa de peptidoglicano. El cido Teicoico es el
responsable del determinante antignico del organismo.Tiene una capa
delgada de peptidoglicano (mureina) unida a una membrana exterior
por lipoprotenas. La membrana exterior est hecha de protena,
fosfolpido y lipopolisacrido. En el lipopolisacrido, la porcin de
lpido est embebida en el fosfolpido y el antgeno O polisacrido est
en la superficie. El lpido se llama Lpido A y es txico, pero el
lipopolisacrido entero se llama Endotoxina. La pared de la clula
tiene poros llamado Porines para el transporte de substancias de
peso molecular bajo. Entre la membrana citoplsmica y la pared
celular hay un espacio periplsmico con enzimas hidrolticas, enzimas
inactivadoras de antibiticos y protenas de transporte.
Tambin existen diferencias en la composicin de la pared entre
las clulas de las diversas especies.Membrana Citoplsmica
(citoplasmtica o protoplasmtica)Inmediatamente debajo de la pared
celular, existe una membrana fina, o envoltura, que se denomina
membrana citoplsmica o protoplsmica y est formada por una bicapa de
fosfolpido integral y protenas perifricas empotradas. La membrana
citoplsmica tiene una significacin funcional de suma importancia.
Se trata de una membrana semipermeable, selectiva, que controla el
paso de los elementos nutritivos dentro de la clula y la salida de
los productos de desecho. Tiene enzimas respiratorias y durante la
divisin celular el cromosoma se une a la membrana de la clula en el
sitio llamado Mesosoma.CitoplasmaEl material celular contenido
dentro de la membrana citoplsmica puede dividirse en tres partes,
regin citoplsmica, de apariencia granular, la cual es rica en RNA,
regin nuclear o cromatnica, que es rica en DNA, y la parte lquida
que mantiene disueltos los elementos nutritivos. El RNA, combinado
con protenas, forma partculas o corpsculos macromoleculares, de
unos 200 A de dimetro, que forman una masa densa y compacta en todo
el citoplasma. Estas partculas de RNA-protena se denominan
ribosomas, y son el equivalente en las bacterias de los microsomas,
o partculas que se encuentran en las clulas animales y
vegetales.Estructuras CitoplasmticasNucleoide (cuerpo
cromatnico)Las clulas bacterianas no contienen el ncleo
caracterstico de las clulas de las plantas y animales superiores.
Sin embargo, contienen en el citoplasma "cuerpos" que se consideran
como una estructura nuclear, el ADN de la clula bacteriana se
encuentra confinado en este espacio, es nico y circular, doble
hlice sin protenas. Como no se trata de un ncleo discreto, se ha
sugerido que se d a estas estructuras las denominaciones de cuerpo
cromatnico, nucleoides, equivalentes nucleares, y aun cromosomas
bacterianos. Se demuestra con el mtodo de tincin de Feulgen,
especfico para el DNA, y por microscopia electrnica, porque la
sustancia nuclear es menos densa que el citoplasma
cincundante.RibosomasTienen estrecha relacin con la sntesis de
protenas (30S y 50S para formar un complejo 70S).PlsmidosLazos
extracromosmicos de ADN, algn cdigo para la resistencia a drogas,
toxinas y otros factores.EndosporasAlgunas bacterias pueden
transformarse en pequeos ovoides o esferas, que son formas
celulares muy resistentes, denominadas esporas, o endosporas,
porque se producen intracelularmente. Todos los organismos de los
gnerosBacillusyClostridiumse caracterizan, en parte, por su
propiedad de producir esporas. Tambin tienen esta propiedad otros
gneros de bacterias verdaderas, pero slo en casos aislados. Las
bacterias capaces de esporular pueden crecer y reproducirse en
forma de clulas vegetativas durante muchas generaciones. Sin
embargo, en cierto perodo del desarrollo del cultivo en medio
nutritivo apropiado, se produce, dentro del citoplasma, la sntesis
de nuevo protoplasma destinado a transformarse en espora.Tincin
GRAM: Morfologa BacterianaYa hemos visto quela tincin de GRAMaporta
dos ideas bsicas para la deficinin "taxonmica" de las bacterias: el
color que adquieren tras la tincin y la forma que presentan las
clulas bacterianas.En lo relativo a la coloracin, ya hemos
explicado anteriormente que hablamos de
microorganismosGram-positivoscuando aparecen teidos de color
azul-violeta y deGram negativoscuando se visualizan de color
rojo-rosado.Formas bsicasen que se puede visualizar la morfologa
bacteriana en una tincin GRAM:CocosMicrococos, aparecen aislados y
dispersos tras la divisin celular. Diplococos, aparecen por pares.
Estreptococoss, tienden a unirse formando cadenas. Estafilococos,
aparecen en grupos irregulares, a veces de gran tamao
forma esfrica: se llama CocoDivisin a lo largo del mismo plano,
formando cadenas cortasDivisin a lo largo de 2 planos diferentes:
TtradasDivisin a lo largo de 3 planos
2 cocos juntos: Diplococos4 - 20 en cadenas:
Estreptococosregularmente: Sarcinasirregularmente:
Estafilococos
Bacilosgrandes variaciones morfolgicas: fusiformes,
estreptobacilos, cocobacilos
Forma de vara: se llaman BacilosDos bacilos juntos:
DiplobacilosCadenas de bacilos: EstreptobacilosEmpalizadas, Bacilos
lado con lado o en figuras en X, V o Y
Espirales(Treponemas, Borrelias ...)
Forma espiral rgida se llama: EspiriloSi la espiral es flexible
y ondulada se llama: Espiroqueta
Utilizamos el trmino Pleomorfismo para referirnos a la adopcin
de diferentes formas en una misma especie.
Tincin GRAM: Bacterias Gram-PositivasCocos
Gram-positivosRacimos: forma tpica deStaphylococcus sp, comoS.
aureus
Cadenas: forma tpica deStreptococcus sp, comoS.
pneumoniae,Streptococcusgrupo B
Tetradas: forma tpica deMicrococcus sp
Bacilos Gram-positivosGruesos: forma tpica deClostridium sp,
comoC. perfringens,C. septicum
Finos: forma tpica deListeria sp
Ramificados: forma tpica deActinomycetesyNocardia, comoA.
israelii
grficos obtenidos
de:http://www.uphs.upenn.edu/bugdrug/antibiotic_manual/gram.htm
Tincin GRAM: Bacterias Gram-NegativasCocos
Gram-negativosDiplococos: forma usual deNeiseria sp, comoN.
meningitidisTambinMoraxella spyAcinetobacter spaparecen con
morfologa de diplococos.Acinetobacterpuede ser pleomrfico, y a
veces aparece como coco Gram-positivo.
Cocobacilos: forma usual deAcinetobacter sp, que puede ser
Gram-positivo o Gram-negativo, y, a menudo, Gram-variable.
Bacilos Gram-negativosBacilos finos: forma usual de
enterobacteriaceae, comoE. Coli
Cocobacilos: forma usual deHaemophilus sp, comoH. influenzae
Curvados: forma usual deVibrio sp, comoV. cholerae,
yCampylobacter sp, comoC. jejuni
Forma de aguja fina: forma usual deFusobacterium sp
grficos obytenidos
de:http://www.uphs.upenn.edu/bugdrug/antibiotic_manual/gram.htm
Otras tinciones de uso habitualRODAMINA-AURAMINALos cidos
miclicos de las paredes celulares de las micobacterias poseen
afinidad para los fluorocromos auramina y rodamina. Estos
colorantes se fijan a las bacterias, que aparecen de color amarillo
o naranja brillante contra un fondo verdoso. El permanganato de
potasio, empleado como contraste, evita la fluorescencia
inespecfica. Todos los microorganismos cido-alcohol resistentes,
incluyendo los esporozoarios parsitos, se tien con estos
colorantes.Un aspecto importante de la coloracin rodamina-auramiria
es que luego los frotis pueden ser reteidos con la coloracin de
Ziehl-Neelsen o Kinyoun directamente sobre la tincin con el
fluorocromo, si se elimina antes el aceite de inmersin. De esta
forma, los resultados positivos pueden ser confirmados con las
coloraciones tradicionales, que adems permiten la diferenciacin
morfolgica.NARANJA DE ACRIDINAEl fluorocromo naranja de acridina se
une al cido nucleico ya sea en su forma nativa o desnaturalizada.
En algunas preparaciones de naranja de acridina, el color de la
fluorescencia puede variar, dependiendo del pH y de la
concentracin. El naranja de acridina ha sido empleado como
colorante vital, que da una fluorescencia verde si el
microorganismo est vivo y roja si est muerto. De todos modos, como
el colorante se intercala en el cido nucleico, el germen viable se
inactivar poco tiempo despus de la tincin.El uso de naranja de
acridina para detectar la presencia de bacterias en los
hemocultivos ha sido ampliamente aceptado. De hecho, una gran
cantidad de estudios han demostrado que la tincin de hemocultivos
con naranja de acridina es tan sensible como el subcultivo ciego
para la deteccin inicial de hemocultivos positivos.ZIEHL-NEELSEN
(BAAR)Las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias
contienen cidos grasos (cidos miclicos) de cadena larga (50 a 90
tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la
decoloracn con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes
bsicos. Por esto se denominan cido-alcohol resistentes. Las
micobacterias comoM. tuberculosisyM. marinumy los parsitos coccdeos
comoCryptosporidiumse caracterizan por sus propiedades de
cido-alcohol resistencia. La coloracin clsica de Ziehl-Neelsen
requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared
bacteriana que contiene ceras.Se ha desarrollado una coloracin de
cido-alcohol resistencia modificada que diferencia las especies
deNocardia(bacterias ramificadas filamentosas cuyas paredes
celulares contienen cidos-grasos de unos 50 tomos de carbono), de
los actinomiceos (muy semejantes pero no cido-alcohol
resistentes).Nocardia sppson decoloradas por la mezcla cido-alcohol
estndar pero no por un tratamiento ms suave con cido sulfrico 0,5 a
1%. Estos microorganismos se denominan cido-alcohol resistentes
parciales o dbiles.El frotis se tie durante unos 5 min con
Carbolfucsina aplicando calor suave. Lavar con agua. Decolorar con
alcohol etlico 95% con un 3% de ClH concentrado. Lavar y teir
durante 30-60 seg con Azul de Metileno (color de contraste). Lavar
y secarBLANCO DE CALCOFLORLas paredes celulares de los hongos fijan
el colorante blanco de calcoflor aumentando considerablemente su
visibilidad en los tejidos y otras muestras. Segn fue descrito por
Hageage y Harrington, este colorante se emplea en lugar de KOH al
10% para el examen inicial de los materiales clnicos. Tambin se
emplea para aumentar la visualizacin de los elementos morfolgicos
de los cultivos puros de los hongos. En algunos laboratoros ha
suplantado al azul de lactofenol en muchas aplicaciones. Los
organismos fluorescen con luz blanco-azulada o verde manzana, segn
la fuente luminosa que se utilice.
TINCIN DE ESPORAS (WIRTZ-CONKLIN)Algunos gneros bacterianos,
entre los que destacanClostridiumyBacillus, producen en su interior
formas de resistencia denominadas endosporas. Se producen cuando
las condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento de los
nutrientes, temperaturas extremas, radiaciones, compuestos txicos,
etc.) formndose una espora por cada forma vegetativa. Al finalizar
el proceso de esporognesis, la clula vegetativa se lisa y libera la
espora al exterior. Cuando el ambiente es favorable, la espora
germina generando una nueva forma vegetativa. La capacidad de
germinar perdura durante aos. Algunas de las bacterias productoras
de endosporas son patgenas para el hombre, por lo que su estudio y
observacin son de enorme inters.FUNDAMENTOLas endosporas poseen
unas cubiertas exclusivas que las hacen resistentes a los factores
ambientales adversos. Adems, estas cubiertas hacen que las esporas
aparezcan en el microscopio ptico como estructuras refringentes y
de difcil tincin.La tincin especfica de esporas requiere dos
colorantes:1.- Verde malaquita: capaz de teir las esporas en
caliente.2.- Safranina: colorante de contraste que tie las formas
vegetativas.Las endosporas, tras la primera tincin, no perdern el
colorante en el lavado con agua, y s lo harn las formas
vegetativas, que quedarn teidas con el segundo colorante.
REALIZACINSe emplearn cultivos en fase estacionaria para dar
lugar a que las bacterias produzcan las esporas. Esta tincin es
delicada en su realizacin y para poder obtener unos resultados
satisfactorios hay que seguir cuidadosamente las
instrucciones.1.Preparar los frotis bacterianos indicados.2.Teir
con verde malaquita. Con unas pinzas de madera colocar la muestra
encima de la llama del mechero de forma que el colorante humee
durante 5 min.Nota: evitar que la muestra hierva. Aadir ms
colorante si ste se evapora; es importante que la muestra no se
seque.3.Lavar con abundante agua el exceso de colorante.4.Teir con
safranina 1 min.5.Lavar con abundante agua el exceso de
colorante.6.Secar la preparacin.7.Observar la preparacin al
microscopio. Anotar la disposicin y la morfologa de las tres
especies del gneroBacillus.INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOSLa
posicin y la morfologa de la endospora en el interior de la
bacteria constituyen un carcter taxonmico til para diferenciar
especies dentro de un mismo gnero.
Las tres bacterias empleadas en esta prctica difieren en la
disposicin y morfologa de las endosporas.B. sphaericusposee una
endospora esfrica con localizacin terminal y deformante de la clula
vegetativa, por lo que suele ser denominada "en palillo de
tambor".B. thuringiensistiene localizada la endospora elipsoidal en
el centro de la clula vegetativa, lo que provoca un abombamiento
caracterstico denominado "en huso".B. subtilisforma una espora
cilndrica subterminal no deformante.
Bibliografa:http://www.danival.org/notasmicro/tincion/_madre_tincion.htmlhttp://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htmIntroduccinEn
su mayor parte los microorganismos son demasiado pequeos para
observarse a simple vista:protozoos,
algas,hongos,bacteriasyvirus.Estos microorganismos difieren en
caractersticas tales como forma de nutricin,estructura, tamao,
composicin entre otros aspectos; es por ello que se emplea el
estudio microscpico el facilita notablemente la observacin;
principalmente en las bacterias se facilita al tratarlas con
colorantes o tintes los cuales facilitan tambin la observacin de
ciertasestructurascelulares y como en este caso particular las
endosporas.En esteinformese distinguirn las endosporas presentes en
unamuestrabacteriolgica y para lo cual se desarrollar el mtodo de
tincin con verde de malaquita y safranina; asimismo se da a conocer
un anlisis de los resultados obtenidos en la prctica.OBJETIVO
Realizar la tincin y observacin de endosporas en una bacteriaMarco
tericoUna endospora es una sustancia inactiva, resistente, no
reproductiva producida por una pequea cantidad de bacterias dela
familiadeFirmicute. La funcin primaria de las endosporas es
sobrevivir en tiempos de tensin ambiental. Por lo tanto son
resistentes a la radiacin ultravioleta y gamma, a la desecacin, a
lisozima, a latemperatura, al hambre y a los desinfectantes
qumicos. Las endosporas se encuentran comnmente en elsueloyel
aguadonde sobreviven por periodos detiempolargos.Estructura.En
contraste con las esporas eucariontes, que son producidos por
muchos eucariontes para propsitos reproductivos, las bacterias solo
producen una endospora internamente en ambientes desfavorables. La
espora es a menudo cubierta por una cubierta fina conocida
comoexosporium, que cubre lacapa de espora. La capa de la espora es
impermeable a muchas molculas txicas y puede tambin contener
lasenzimasimplicadas en la germinacin. Lacortezase encuentra debajo
de la capa de la espora y consiste en peptidoglucano. Lapared de la
basese encuentra debajo de la corteza y rodea al protoplasto
obasede la endospora. La base tiene estructuras normales de la
clula tales como:ADNy ribosomas, pero tiene
unmetabolismoinactivo.Hasta el 15% de la endospora consiste en
calcio en la base, que se piensa se utiliza para estabilizar el
ADN. El cido Dipicolinico podra ser responsable de
laresistenciatrmica de la espora y el calcio puede ayudar a la
resistencia alcalory a los agentes que oxidan. Sin embargo los
agentes mutagenos se encuentran aliados, sugiriendo que existen
otros mecanismos que contribuyen a la resistencia
trmica.Localizacin.La posicin de la endospora diferencia entre
especies bacterianas y es til en la identificacin. Los tipos
principales dentro de la clula son: terminales, subterminales y
endosporas centralmente puestos. Las endosporas terminales se
encuentran en los polos de la clula, las endosporas centralmente
puestos estn normalmente en el centro. Las endosporas subterminales
se encuentran en los extremos, lo suficientemente lejos de los
polos pero no lo bastante cercanos al centro para ser considerados
central.Las endosporas son difciles de observar almicroscopiodebido
a la impermeabilidad de su pared que evita la entrada de las
tinciones ordinarias. Mientras el resto de la bacteria puede
teirse, la endospora permanece descolorida.Debido a esto surgi la
tcnica conocida como Tincin de Moeller, que permite que se muestre
la endospora encolorrojo, mientras que el resto de la clula
permanece en color azul. Otra tcnica de tincin para el estudio de
la endospora, es la Tincin de Schaffer-Fulton con la que vemos la
endospora verde y la bacteria roja.Formacin y destruccin.Cuando una
bacteria percibe condiciones ambientales desfavorables, comienza
elprocesode esporulacin, el cual llega a durar cerca de 10 horas.
Se repliega elADNy una pared de la membrana conocida como tabique
se comienza a formar. La membrana de plasma dela clularodea esta
pared formando una doble membrana alrededor del ADN y
laestructurase convierte ahora en lo que se conoce como forespora.
El calcio se incorpora a la forespora.La corteza se forma despus
entre las dos capas y la bacteria agrega una capa ms a la
forespora. La esporulacin es completa ahora, y la endospora es
lanzada cuando se degrada laclulavegetativa.La endospora es
resistente a la mayora de agentes que mataran normalmente a
lasclulasvegetativas. Losproductosde limpieza de la casa
generalmente no producen ningn efecto, ni la mayora dealcoholes,
compuestos de amonio o de los detergentes, sin embargo el oxido de
etileno es eficaz contra las endosporas.Importancia.Como
unmodelosimplificado para la diferenciacin celular, los detalles de
la endospora se han estudiado extensivamente, especialmente
elBacilo subtilis. Estos estudios han contribuido al estudio de los
genes, transcripcin y unidades del factor sigma de la polimerasa
del ARN.Bacterias productoras de esporasLos ejemplos debacteriasque
poseen este mecanismo incluyen los gneros: Bacilo Clostridium
Desulfotomaculum Sporolactobacillus Sporosarcina
ThermoactinomycesMateriales y mtodos Microscopio Portaobjetos Asa
bacteriolgica Pinzas Frasco lavador Mechero de Bunsen Toalla de
papel Aceite de inmersin Verde de malaquita Safranina Agua
destilada Solucin salina Cultivo bacterianoDesarrollo
prcticoSeguido de la explicacin por parte del auxiliar
delaboratoriose procedi a colocar con la punta del asa
bacteriolgica una gota de solucin salina, luego se esterilizo el
asa en el mechero, se enfri y se tomo lamuestrade un cultivo
bacteriolgico utilizado con muestra y se realizo el frotis. La
placa se flameo hasta que se evaporara todael aguay se coloreo con
verde de malaquita. Se flameo durante 5 minutos, adicionando
colorante cada vez que se secaba la muestra. Se lavo conaguahasta
retirar el exceso de colorante y se realizo la tincin con safranina
durante un minuto. Posteriormente se lav con agua y se sec con
papel absorbente.La muestra se rotul y observ almicroscopioptico
con elobjetivode inmersin. Finalmente se esquematizaron y anotaron
los resultados obtenidos.ResultadosLuego del montaje al microscopio
ptico, se observaron bacilos Gram positivos esporulados; asimismo
se apreciaron esporas solitarias de forma circular y bacilos que no
presentaban formacin de esporas. Lasimgenesde lo visto se muestran
en la figura 1.
Figura 1.Bacilos observados con la tincin de Verde de Malaquita.
a) Bacilos endosporados, b) bacilos sin formacin aparente de
endospora, c) Esporas solitarias. Microscopio ptico. 1000
aumentos.Discusin y conclusionesFinalmente podemos mencionar que a
pesar que la bacteria es una estructura muy pequea, por medio de la
tincin con verde de malaquita, el cual requiri delcalorpara la
penetracin; se pudo observar la estructura interna de la clula
bacteriana, particularmente las endosporas. En este experimento se
utiliz una tincin simple debido a que la misma permite que se
coloree toda la clula excepto la espora que se observa de un tamao
bien aceptablePreguntas complementarias1. Qu es un frotis y para
que se utiliza?Se denomina frotis a la extensin que se realiza
sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de
separar lo ms posible los microorganismos, ya que si aparecen
agrupados en la preparacin es muy difcil obtener unaimagenclara y
ntida. Este frotis debe ser posteriormente fijado alvidriodel
portaobjetos parapoderaplicar losmtodoshabituales de tincin que
permiten laobservacinal microscopio de las bacterias sin que la
muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijacin de una
extensin bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y
adheridas al vidrio alterando lo menos posible lamorfologay
bacteriana y las posibles agrupaciones de clulas que pudiera
haber.2. Qu es una tincin? Cuntos tipos existen? Escribe la tcnica
de preparacin de cada una de ellas.La tincin es la aplicacin de un
colorante sobre una muestra, lo que permite poner en manifiesto
diferencias entre las clulas o en partes una clula, o de
unmicroorganismo. Entre losprocedimientospara la observacin de
clulas o microorganismos existen 2 fundamentalmente que son: Tincin
simple:Permite observar la forma, tamao y agrupamiento de las
bacterias usando un nico colorante (normalmente bsico). Se utiliza
un solo colorante, por lo que todas lasestructurascelulares se tien
con la misma tonalidad (Tintachina, Azul Metileno de Loeffler, Azul
de lactofenol). El Hidrxido de potasio al 10% (solucin de KOH)
permite ver elementos dehongosya que el KOH digiere parcialmente
los componentes proteicos, por ejemplo de la clula husped, pero no
acta sobre los polisacridos de las paredes celulares de los hongos.
Tincin diferencial:Las tinciones diferenciales son aquellas
tinciones que se usan para diferenciar de manera ms explcita los
microorganismos. Estas tinciones utilizan los colorantes
diferenciales, que se componen de ms de una sustancia tintrea. En
algunastcnicasde coloracin, las tinciones diferenciales ms
importantes que se emplean en bacteriologa son las de Gram y la
tincin cido-resistente. Ambas tinciones se utilizan para
obtenerinformacinacerca de la composicin de las capas de la pared
celular de las clulas bacterianas.3. Qu es un colorante? Cmo esta
constituido? Cmo es que cambia con los diferentes componentes
celulares?Un colorante es una sustancia que es capaz de teir las
fibras vegetales yanimales. Los colorantes se han usado desde los
tiempos ms remotos, emplendose para ello diversas materias
procedentes de vegetales (crcuma, ndigo natural, etc.) y de
animales (cochinilla, moluscos, etc.) as como distintosminerales.
Los colorantes ms usados son sales, las cuales estn constituidas
por un ion cargado positivamente y un ion cargado negativamente.
Por ejemplo, azul de metileno es actualmente la sal cloruro azul de
metileno.Elgrupoauxocromo es el que facilita la unin del colorante
a otras sustancias con carga elctrica.4. Qu factores intervienen
para que los colorantes se combinen con los componentes
celulares?Muchos colorantes utilizados con frecuencia son molculas
cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con
los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como
loscidosnucleicos y los polisacridos cidos. Ejemplos de colorantes
catinicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la
safranina. Otros colorantes son molculas cargadas negativamente
(aniones) y se combinan con los constituyentes celulares cargados
positivamente, tales como muchasprotenas. Esos colorantes incluyen
la eosina, la fucsina cida y el rojo Congo. Otro grupo de
colorantes son sustancias liposolubles; los colorantes de este
grupo se combinan con losmaterialeslipdicos de la clula, usndose a
menudo para revelar la localizacin de las gotculas o depsitos de
grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro Sudn.5. Qu
es un mordiente? Menciona tres ejemplosEl mordiente es una
sustancia empleada en tintorera que sirve para fijar loscoloresen
los productos textiles, lafuncindel mordiente es favorecer la
fijacin del colorante en las fibras. Este trmino es usado
principalmente en laindustriatextil para designar a aquellas sales
metlicas (dealuminio,hierro, plomo...), cidos (el cido tnico, usado
para fijar colores bsicos), sustancias orgnicas (casena, gluten,
albmina,...), etctera, que sirven para fijar los colores de
estampados en los textiles.6. Escribe el fundamento de las
siguientes tinciones: Gram, Zielh Neelsen, endosporas (Verde
malaquita) Tincin de Gram:es unsistemade dos tinciones simples
sucesivas, separadas por una fase de decoloracin selectiva. Permite
diferenciar las bacterias que retienen el
primercolor(Gram-positivas) de las que no lo retienen
(Gram-negativas). Esta diferencia encomportamientorefleja
diferencias estructurales y fisiolgicas entre ambosgruposde
bacterias. Tincin de esporas: ciertos tipos de bacterias producen
esporas deresistenciacuya pared celular es caracterstica. La tincin
de esporas permite detectar este tipo de clulas lo que
tieneutilidaden la identificacin del microorganismo en estudio.
Tincin de Ziehl-Neelsen(cido-alcoholresistencia): es un tipo
especial de tincin que permite la identificacin de microorganismos
de los gruposMycobacteriumyNocardiade gran relevancia clnica
8.Elabora una tabla en la quesealestodas las diferencias que
existen entre bacterias Gram positivas y bacterias Gram
negativas.
8. Escribe correctamente el nombre de 3 microorganismos acido
alcohol resistentes, 3 microorganismos esporulados, 3
microorganismos capsulados, 3 bacterias Gram positivas y 3
bacterias Gram negativas. Seala la importancia de cada una de
ellas. Microorganismos acido alcohol resistentes:Mycobacterium
tuberculosis(causatuberculosis),Mycobacterium leprae(causa la
lepra),Mycobacterium avium(causafiebre, perdida de peso y fatiga).
Microorganismos esporulados:.(enteritis necrtica o la gangrena
gaseosa.),Clostridium botulinum(produce botox),Bacillus
cereus(Produce dos tipos de toxiinfecciones alimentarias: la forma
diarreica y la forma emtica.) Microorganismos
capsulados:Haemophilus influenzae, (causa la
influenza),Streptococcus pneumoniae(causaneumona),Cryptococcus
neoformans(micosis sistemtica) Bacterias Gram
positivas:Bacillusanthracis (produce la enfermedad del
carbunco),Clostridium botulinum (produce botox), Clostridium
tetani(produce tetanos) bacterias Gram negativas:Neisseria
gonorrhoeae, (produce la gonorrea),Serratia marcescens(causa de
infecciones nosocomiales y urinarias.),Rhizobium
leguminosarum(ayuda a lasplantasa fijar nitrogeno).
Leer
ms:http://www.monografias.com/trabajos69/tincion-esporas-bacterianas/tincion-esporas-bacterianas.shtml#ixzz3yTUCHaHoFundamentos
La envuelta de la endospora es mas compleja e impermeable que la
envuelta de las clulas vegetativas en las que se forma. Slo se
puede teir el contenido de la espora alterando su envuelta. La
impermeabilidad de las cubiertas dificulta que las endosporas se
decoloren una vez teidas. El verde de malaquita es un colorante
dbilmente bsico (tiene una carga positiva dbil) y por tanto, se une
dbilmente a la bacteria. Penetra en las clulas vegetativa . Cuando
se calienta la preparacin tambin penetra las endosporas. Durante el
lavado con agua, el verde de malaquita se elimina de las clulas
vegetativas, pero no de la endospora. El colorante de contraste (la
safranina) solo puede teir a las clulas vegetativas (decoloradas
por el agua).INTRODUCCION
La cpsula bacteriana es una capa de material viscoso o mucoide.
El tamao de estas cpsulas est influenciado por el medio en el que
crece la bacteria. En algunos casos el grosor de la cpsula es slo
una fraccin del dimetro de la clula, en otros casos la cpsula es
mucho mayor que la clula. Las cpsulas bacterianas son importantes
tanto para la bacteria como para otros organismos. A las bacterias
les proporcionan una cubierta protectora y adems sirven de
reservorio de alimento almacenado. Tienen Propiedad Antifagocitaria
: Dificulta o impide la fagocitosis, lo cualpotenciasu virulencia
ya que favorece la multiplicacin y facilita la invasin. Brinda
Proteccin frente a Fagos.: Dificulta la fijacin de bacterifagos e
impide el pasaje su pasaje que puedan afectar a la bacteria Las
cpsulas de ciertas bacterias productoras de enfermedades aumentan
la capacidad infectiva de las bacterias. Si la bacteria pierde
totalmente su cpsula, puede perder su virulencia y por lo tanto su
capacidad de producir enfermedad Algunos ejemplos de bacterias
productoras de cpsulas son: neumococos, Klebsiella., aunque tambin
puede estar presente en bacterias gram positivas y Gram. negativas
Sin embargo las cpsulas tiene diversas propiedades como: Induce
laproduccinde anticuerpos protectores (esto es til en laproduccinde
algunasvacunas) y Permite la diferenciacin de tipos serolgicos
dentro de la misma especie ya sea por aglutinacin con
suerosPROCEDIMIENTO
TINCION DE CPSULAA)METODO DE DUGUID1.- Poner con el asa una gota
pequea de tinta china en el centro de un portaobjetos
limpio.2.-Poner una gota de agua del mismo tamao junto a la gota de
tinta china3.- Tomar con el Asa bacteriolgica un pequeo fragmento
del cultivo de bacterias4.- Hacer una suspensin ( sin extenderla)
en la gota de agua5.- Mezclarla con la tinta china6.- Colocar un
cubreobjetos sobre la suspensin, evitando que queden burbujas7.-
Observar la preparacin al microscopio con el objetivo seco fuerte y
de inmersin.
La cpsula se observa como una zona brillante alrededor de la
bacteria en un campo oscuro.
B) METODO DEL ROJO CONGO1.- Poner una gota pequea de rojo congo
en el centro de un portaobjetos limpio2.-Tomar con el asa
bacteriolgica un pequeo fragmento de crecimiento de colonia
bacteriana3.- Suspender la muestra en la gota de rojo congo y hacer
un frotis4.- cubrir el frotis ( SIN FIJARLO A LA FLAMA DEL MECHERO)
con una gotas del mordente de cpsula y dejarlo actuar durante un
minuto.5.-Lavar el frotis con agua destilada y dejarlo secar al
aire6.- Observar la preparacin al microscopio con el objetivo de
inmersin
La cpsula se observa como una zona brillante alrededor de la
bacteria de color rojo en un campo de azul oscuro.
CUESTIONARIO
1.- Qu importancia mdica tiene la cpsula bacteriana?La
importancia medica que tiene la capsula bacteriana es que mediante
ellase pueden ver las diferentes bacterias cuales nos pueden
afectar con enfermedades e infecciones, como tambien pueden
descubrir bacterias que nos ayuden a nuestra salud
2.-Qu caractersticas presenta la cpsula en las
bacterias?Lacpsulaes una capa rgida organizada en matriz
impermeable que excluye colorantes como la tinta china. En cambio,
la capa de material extracelular que se deforma con facilidad, es
incapaz de excluir partculas y no tiene un lmite definido, se
denomina capa mucosa oglucocalix. Ambas se pueden detectar con
mtodos como latincin negativa o la tincin de Burri.La cpsula le
sirve a las bacterias de cubierta protectora resistiendo
lafagocitosis. Tambin se utiliza como depsito de alimentos y como
lugar de eliminacin de sustancias de desecho. Protege de la
desecacin, ya que contiene una gran cantidad de agua disponible en
condiciones adversas. Adems, evita el ataque de losbacterifagosy
permite la adhesin de la bacteria a las clulas animales del
hospedador.
3.- Qu importancia tiene la presencia de la cpsula en las
bacterias?Lacpsula bacterianaes la capa con borde definido formada
por una serie de polmeros orgnicos que en las bacterias se deposita
en el exterior de supared celular. Generalmente
contieneglicoprotenasy un gran nmero depolisacridosdiferentes,
incluyendopolialcoholesyaminoazcares.
4.- Qu sucede con las bacterias cuando estas llegan a perder la
cpsula?Al perder la capsula la bacteria sigue presentando sus
caractersticas patgenas pero pierden virulencia.Las bacterias al
estar capsulada dificultan la fagocitosis adems poseen un anfgeno
llamadoanfgeno k, ya que la capsula les confiere antigeneidad o
especificidad antignica; por lo que a mayor tamao de la capsula la
bacteria posee mayor virulencia.
5.- Investiga de qu est compuesta la capa de material mucosa que
forma la cpsulaLa capa mucilaginosa usualmente compuesta de
glicoprotenas y proteoglicanos que est presente sobre la superficie
exterior de los peces tambin se considera un glicoclix. El trmino
fue aplicado inicialmente a la matriz depolisacridosecretada por
las clulas epiteliales y que forman una capa superficial. Los
glicoclix son compuestos, casi siempre con cadenas de
carbohidratos, que recubren la superficie celular.
