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5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
I. INTRODUCCIN
El calamar gigante o pota (Dosidicus gigas), es una especie pelgica ocenica que
realiza migraciones hacia la costa relacionadas con procesos de alimentacin y
reproduccin. Tiene una amplia distribucin en el Pacico !riental, desde "#$ico hasta
%hile, y las reas de mayor concentracin se ubican rente a las costas de Per& y "#$ico.
'a Pota, es un recurso hidrobiolgico de gran abundancia en nuestro Pas y de bao
precio en el mercado por lo que dierentes inestigadores ienen trabaando en darle un
alor agregado para poder generar mayores utilidades, adems de ser una e$celente uente
de protena animal que podra ayudar a meorar los nieles de desnutricin de la poblacin
en pobreza total y pobreza e$trema.
'os dierentes gobiernos del Estado Peruano e instituciones de ayuda internacional,
han enido desarrollando programas de asistencia alimentara en el marco de la lucha
contra la pobreza y la desnutricin. Estos programas tienen como una de sus principales
actiidades el reparto de sustitutos lcteos (papillas lcteas) a sus beneiciarios, las mismas
que tienen a la leche en polo como principal uente de protena animal, lo cual hace que
estos productos tengan un eleado precio. *dems, considerando que estos programas an
dirigidos a la poblacin que se encuentra en situacin de pobreza y de pobreza e$trema,
seg&n estadsticas del +E+ (-/) al a0o --, el 12./ porciento de la poblacin peruana
era pobre, del cual el -/.3 por ciento se encuentra en pobreza e$trema (en la sierra el 43.3
por ciento de la poblacin es pobre y 2/ por ciento se encuentra en pobreza e$trema) y que
nuestro pas no cuenta con los suicientes recursos econmicos para llear la ayuda a toda
esta poblacin (lo que obliga, en cierta medida, a minimizar los costos de esta clase de
programas) se debe buscar uentes de protena animal de bao costo para este tipo de
productos, de iguales o meores caractersticas nutricionales que la leche en polo.
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
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Es por ello que la 5acultad de Pesquera de la 6niersidad acional *graria 'a
"olina (6*'"), iene desarrollando estudios de un concentrado de protena de pota con
la inalidad de sustituir parcialmente las uentes de protena tradicional como son la leche
en polo y las protenas del hueo. 7e han obtenido concentrado de protena de pota cuyos
alores de protena alcanzan el 84 por ciento ('azo, -4).
o e$isten antecedentes de estudios de to$icidad del concentrado de protena de
pota por ser un producto nueo, es por ello que antes de utilizar esta nuea uente proteica
se decidi estudiar alg&n posible eecto to$icolgico del producto en su consumo por los
seres humanos como una medida de seguridad alimentara.
1.1 OBJETIVO PRINCIPAL
9eterminar la to$icidad a dosis repetidas (3 das) del concentrado de protena de
pota (Dosidicus gigas) elaborado en la 6*'" en ratas Sprague Dawley.
1.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS
- 9eterminar la patologa clnica (anlisis bioqumico y hematolgico), con la
inalidad de determinar si e$isten cambios signiicatios con respecto al grupo
control.
- Ealuar los resultados histopatolgicos con la inalidad de determinar si e$istencambios signiicatios con respecto al grupo control.
- 9eterminar el eecto de la administracin del concentrado de protena de pota sobre
el peso io en ratas.
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II.REVISIN BIBLIOGRAFICA
2.1 ASPECTOS GENERALES DE LA POTA
2.1.1 Clasificaci !a"#$ica
%arrillo (:334), se0ala que la pota o calamar gigante presenta la siguiente
clasiicacin ta$onmica;
Phyllum ; "ollusca
%lase ; %ephalopoda
7ubclase ; %oloidea
!rden ; Teuthoidea
7uborden ; !egopsidae
5amilia ; !mmastrephidae
7ubamilia ; !mmanstrepinae
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En el %uadro : se puede obserar los alores de la composicin qumica pro$imal
de la carne de pota, seg&n dierentes autores.
C'a+*# 1, C#$%#sici &'($ica %*#"i$al +l $a!# + la %#!a
COPONENTES/sc'l#1
0/sc'l#2
0Fil! c# %il
0Fil! si %il
0
3'$+a+ 8:.: 8./4 81./ 82.P*#!(a c*'+a :4. :?.21 :-.: :-.?G*asa c*'+a :.: .48 :.2 :.4Ci4a :.22 :.: :.2Ca*5#6i+*a!#s . .1 .: ./Sals $i*als :.?
F'!,1 IARPE - ITP 71889:; 2 B*a
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+"*DPE A +TP (:334) airman que la carne de la pota posee los cidos grasos de
mayor importancia nutricional, el 9ocosahe$anoico (9C*) y Eicosapentanoico (EP*),
ambos omega A /.
En el %uadro / se muestran los cidos grasos presentes en la grasa de pota. %omo se puede
obserar, contiene altos porcentaes de cidos grasos omega A /.
C'a+*# , C#!i+# + >ci+#s ?*as#s l $a!# + la %#!a
ACIDO GRASO 0%:2; "irstico :.2
%:1; Palmitoleico .1%:4; Palmtico :3.3%:4;: Palmitoleico Traz.%:?; "argrico Traz.%:8; Esterico /.1%:8;: !leico 2.%:8;- 'inoleico Traz.%:8;/ 'inol#nico Traz.%-; *raqudico 4.2%-;: Eicosaenoico Traz.
%-;/ Eicosatrienoico .-%-;2 *raquidnico Traz.C2=,@ Eic#sa%!a#ic# 19.=%--;/ 9ocosatrienoico .-%--;2 9ocosatetraenoico ./%--;1 9ocosapentaenoico .-C22,9 D#c#sa6"a#ic# 9.8=
F'!, IARPE - ITP 71889:.
En cuanto a los minerales, determinaron que el mayor contenido de #stos est dado por
el potasio, seguido del sodio, magnesio y calcio (%uadro 2).
C'a+*# , C#!i+# + $ac*#l$!#s l $a!# + la %#!a
ACROELEENTOS7odio (mg:g) :38.-Potasio (mg:g) /-:.3%alcio (mg:g) 3.:"agnesio (mg:) 21.4
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F'!, IARPE - ITP 71889:.
2.2 CONCENTRADO PROTEICO DE PESCADO
2.2.1 Dfiici
7uzuFi (:38?) deine a los concentrados proteicos de pescado de la siguiente
manera; harina de pescado, que a a ser utilizada como alimento, se obtiene con m#todos
higi#nicos a partir de grandes cantidades de especies heterog#neas. Esto da como
resultados un producto nutritio e higi#nico para consumo humano, que se llama
Gconcentrado de protena de pescadoH, no e$trado con solentes (%PP tipo >). !tro tipo esel concentrado de protena sometido a procesos de e$traccin con solentes. +ndica que es
as como se obtiene dos tipos de concentrado proteico de pescado; G%PP tipo *H, el cual es
ms puro que el G%PP tipo >H. 'os dos son altamente nutritios pero mientras el tipo >
carece de palatabilidad, el tipo * es demasiado caro para suplementar la deiciencia
proteica de las regiones del mundo ms pobres y carece de la aceptacin comercial para ser
usada con otros alimentos en pases aanzados. 'os concentrados proteicos carecen de
capacidad de rehidratacin lo cual crea diicultades a la hora de ser procesados con otros
alimentos. 'a deinicin ms simple de concentrado proteico de pescado es la propuesta
por "adrid et al., (:332) que dice que los concentrados proteicos de pescado son
bsicamente harinas de pescado aptas para el consumo humano.
En el %uadro 1 se muestran las e$igencias t#cnicas para los concentrado proteicos
tipo * (sometidos a la e$traccin de grasas con solentes) y el tipo > (sin e$traccin de
grasas).
C'a+*# @, Es%cificaci#s !cicas %a*a l#s C#c!*a+#s P*#!ic#s + Psca+#
7CPP:
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?
F'!, a+*i+ et al. 7188:.
2.2.2 P*#cs# + fa5*icaci
'os principales procedimientos para la elaboracin de los %oncentrados Proteicos
de Pescado (%PP), ueron desarrollados entre :31 y :3?. 'a mayor parte de estos
procedimientos incluye el empleo de un solente orgnico o una mezcla de solentes. 'os
principales procesos de abricacin de %PP se eect&an con isopropanol, etanol,
dicloroetileno y he$ano. Por razones de seguridad se ha limitado el empleo de solentes
muy oltiles (he$ano, #ter de petrleo), que por otro lado estn prohibidos en barcos de
captura. 7e han eectuado estudios con dodecilsulato de sodio (7.9.7), tambi#n llamado
laurilsulato de sodio, en %hile y Escocia (%aiozzi et al., :348 y %onnell, :343
mencionados por 'azo, -4).
Doldn (--) elabor una harina precocida a partir de surimi de also olador
(Prionotus stephanophrys). El producto obtenido ue de alto contenido de protenas y bao
en grasaI sin embargo, seg&n los resultados de la ealuacin sensorial al que ue sometido,
DESCRIPCIN TIPO A TIPO BP*#!(a
3'$+a+
G*asa
Ci4a
A*a
Fl/#*
Lisia +is%#i5l 7*s%c!# a la %*#!(a:
Bac!*ias,
- Bac!*ias !#!als?
- Bac!*ias c#lif#*$s !#!als? 7C:
- Bac!*ias c#lif#*$s fcals? 7C:
- E!*#c#c#s?
- Salmonella?
- Bac!*ias +s+#5la+#*as + lci!ia?
- Cl#s!*i+i#s s'lfi!# *+'c!#*s?
Ol#* ) sa5#*
"n. ?1J
"$. :J
"$. .1J
"$. :1J
"$. .1J
"$. -1 ppm
"n. 4.1J
"$. :2
*usencia
*usencia
*usencia
*usencia
*usencia
*usencia
+nodoro, inspido
"n. 4J
"$. :J
7in lmite
"$. -J
"$. .1J
"$. -1 ppm
"n. 4.1J
"$. :1
"$. :-
"$. :
"$. :-
*usencia
"$. :-
"$. :-
*mplio margen
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present ligero olor y sabor residual de pescado, lo cual lo podra catalogar como un
concentrado proteico de pescado de tipo >.
'azo (-4) elabor un concentrado de protena a partir de pota precocida. 9icho
producto elaborado por la 5acultad de Pesquera de la 6niersidad acional *graria 'a
"olina (6*'"), ue el que se ha ealuado en la inestigacin. En el %uadro 4 se
muestran los resultados de la ealuacin sensorial realizada al concentrado de protena de
pota. Estas caractersticas se mantienen inalterables hasta los 3 das de almacenamiento, a
temperatura ambiente.
C'a+*# 9, Rs'l!a+#s +l a>lisis ss#*ial +l c#c!*a+# + %*#!(a + %#!a.
CARACTERSTICAS 1 DA 8= DA
C#l#* >lanco lechoso >lanco cremoso
Ol#**gradable y suae,
sin olor a pota
*gradable y suae,
tenue olor a pota
Sa5#**gradable y neutroI
sin sabor a pota
*gradable,
tenue sabor a pota
T"!'*a 7uae al tacto ypulerulenta
7uae al tacto ypulerulenta
F'!, La4# 72==9:.
2. CONCENTRADO DE PROTEINA DE POTA
Es una protena concentrada en polo, de consumo humano directo, con un alor
biolgico del 3J, con una concentracin de 84J de protena y /J de grasas (2J de las
cuales son omega / y 4). 7e obtiene de la raccin muscular de la pota (Dosidicus gigas) y
en su proceso no se utiliza la piel, sceras, cartlagos ni tentculos y se elabora sin el uso
de solentes ni agentes qumicos de ninguna especie (Doldan y 'azo, -1).
El %uadro ? muestra la composicin qumica pro$imal del concentrado de protena de
pota. Estos resultados son similares, en cuanto al contenido de protena, ceniza y humedad, a
lo propuestos por el %omit# %onsultio sobre Protenas para el %oncentrado Proteico de
Pescado del tipo *. 'a mayor dierencia se dio en el contenido de grasas ('azo, -4).
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C'a+*# , C#$%#sici &'($ica %*#"i$al +l c#c!*a+# + %*#!(a + %#!a
COPONENTE 0
Protenas 84.2 reportados por "adrid et al.(:332).
C'a+*# , Rs'l!a+#s +l a>lisis $ic*#5i#l?ic# +l c#c!*a+# + %*#!(a + %#!a
ANLISIS ICROBIOLOGICOS RESULTADOSC#!# + a*#5i#s %laca K : ucgE. coli *usencia
S. aureus *usencia3#?#s 7$#6#s ) lci+#s ?*as#s l c#c!*a+# + %*#!(a + %#!a.
http://es.wikipedia.org/wiki/Cardiopat%C3%ADahttp://es.wikipedia.org/wiki/Dietahttp://es.wikipedia.org/wiki/Cardiopat%C3%ADahttp://es.wikipedia.org/wiki/Dieta5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
:
ACIDO GRASO NOBRE RESULTADOS%:4; Mcido he$adecanoico -4. J%:4;: NA? Mcido he$adecenoico ./ J%:?; Mcido heptadecanoico :. J
%:8; Mcido octadecanoico ?.8 J%:8;: NA3 Mcido octadecenoico :.2 J%:8;: NA? :.2 J%:8;- NA4 Mcido octadecadienoico .2 J%:8;/ NA4 Mcido octadecatrienoico .- J%-; *cido eicosanoico .2 J%-;: NA:: @ -;: NA3 *cido eicosenoico 8./ J%-;- NA4 .- J%-;/ NA/ ./ J%-;2 NA/ *cido eicosatetraenoico :.1J
%-;1 NA/ *cido eicosapentaenoico :-.3J%-:;1 NA/ .- J%--; *cido beh#nico ./ J%--;: NA3 -. J%--;2 NA4 .: J%--;1 NA4 .1 J%--;1 NA/ *cido docosapentaenoico .2 J%--;4 NA/ *cido docosahe$aenoico /:./ J%-2;: NA3 .4 J
F'!, E'*#fis Da$a* AS + Dia$a*ca 7R#l+> ) La4# 2==@:.
En el cuadro : se puede apreciar el contenido de aminocidos hallados en el concentrado
de protena de pota, de los cuales present una distribucin de los ocho aminocidos
esenciales similar a los presentados por la leche en polo y el hueo deshidratado. 'a
cantidad de triptano, aminocido limitante en el concentrado de pota, ue similar al que
presenta la carne de res (5*!, :3?).
C'a+*# 1=, C#!i+# + a$i#>ci+#s +l c#c!*a+# + %*#!(a + %#!a
AINOACIDOS ESENCIALES RESULTADOS'isina ?.3 g: gTriptano .32 g: gTreonina 2.: g: gBalina 2./ g: g"etionina /. g: g+soleucina 2.8 g: g'eucina ?.3 g: g5enilalanina /.8 g: g
Cistidina -.: g: gT#!al . ?1== ?NO ESENCIALES
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::
*rginina 4.? g: g*cido asprtico 3.1 g: g7erina 2./ g: g*cido glutmico :2.1 g: gProlina /.1 g: g
ci+#s
R K EscialsT#!al " 1==
8=.9 ?1== ?
2.0 F'!, E'*#fis Da$a* AS + Dia$a*ca 7R#l+> ) La4# 2==@:.
2. FUNDAENTOS DE TOICOLOGIA
7ilbergeld (-:) deine a la to$icologa como el estudio de los enenos o, en una
deinicin ms precisa, la identiicacin y cuantiicacin de los eectos adersos asociados
a la e$posicin a agentes sicos, sustancias qumicas y otras situaciones. 'a to$icologa
abarca desde estudios de inestigacin bsica sobre el mecanismo de accin de los agentes
t$icos hasta la elaboracin e interpretacin de pruebas normalizadas para determinar laspropiedades t$icas de los agentes. *porta una importante inormacin tanto a la medicina
como a la epidemiologa de cara a comprender la etiologa de las enermedades, as como
sobre la plausibilidad de las asociaciones que se obseran entre #stas y las e$posiciones,
incluidas las e$posiciones proesionales.
7eg&n Depetto (:33?), un t$ico es una sustancia que puede producir alg&n eecto
nocio sobre un ser io, y como la ida, tanto egetal como animal, es una contin&asucesin de equilibrios dinmicos, los t$icos son los agentes qumicos, o sicos, capaces
de alterar algunos de estos equilibrios.
9e acuerdo con esto, cualquier sustancia puede actuar como t$ico, ya que tanto los
productos e$genos como los propios constituyentes del organismo, cuando se encuentran
en #l en e$cesias proporciones, pueden producir trastornos t$icos. 9ichos compuestos
e$genos se denominan $enobiticos.
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9e aqu que se deria que el concepto de to$icidad posea un carcter relatio. o
hay sustancias at$icasI cualquier producto qumico actuar como t$ico, a unas
determinadas condiciones del sueto, de la dosis y del ambiente. Este concepto ue
enunciado por Paracelso (siglo OB+), cuando airmo que Gtodo depende de la dosisH. 6na
sustancia que administrada en peque0as cantidades produzca da0o, ser ms t$ica que
otra sustancia que precisa de mayor dosis para originar el mismo da0o. Por eemplo, el
agua es indispensable para la ida, muchos organismos estn constituidos en ms de sus
dos terceras partes por aguaI sin embargo, un e$ceso de agua ingerida, o una enema rectal
de agua destilada, puede producir la muerte por into$icacin hdrica. El o$geno o la
glucosa son imprescindibles para la mayora de los organismos, pero sabemos que su
e$ceso conduce a graes trastornos y a la muerte. 9e la misma manera, la ida se hace
imposible en una atmsera de o$geno puro, porque se consume rpidamente el cido
gammaaminobutrico, moderador de la transmisin neriosa central, y como consecuencia,
se producen graes alteraciones neriosas, conulsiones y la muerte (Depetto, :33?).
Depetto (:33?) deine a la to$icologa como la ciencia que estudia las sustancias
qumicas y los agentes sicos en cuanto son capaces de producir alteraciones patolgicas a
los seres ios, a la par que estudia los mecanismos de produccin de tales alteraciones y
los medios para contrarrestarlas, as como los procedimientos para detectar, identiicar y
determinar tales agentes y alorar su grado de to$icidad.
'a to$icologa de los alimentos o tambi#n conocida como to$icologa
bromatolgica, es una especialidad de la to$icologa ambiental, cuyo inter#s esta
creciendo rpidamenteI en consecuencia, estn aumentando los programas acad#micos
que abarcan la ense0anza, el adiestramiento y la inestigacin de esta materia
(7hibamoto y >eldanes, :33/).
2..1 Fac!#*s i$%lica+#s la i!#"icaci
7eg&n Balle y 'ucas (-) la accin de un agente t$ico sobre un organismo io
denominado como into$icacin, es un proceso relatiamente compleo, en el cual estn
inolucrados muchos actores. 7in embargo, hay por lo menos cinco actores que estnntimamente ligados al enmeno de la into$icacin;
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:/
a. Ca*>c!* !"ic# +l a?! "#5i!ic#
*unque un agente que produce una into$icacin puede ser qumico o sico, en
to$icologa de alimentos se reiere e$clusiamente a sustancias qumicas. 6n t#rmino muy
usado en el rea armacolgica para deinir cualquier sustancia e$tra0a al organismo en
cuestin, es la de agente $enobitico. o obstante como Paracelso mencion; Gno hay
sustancia que no sea enenosaH, que indica que el eecto ben#ico y da0ino de una
sustancia depende de la dosis. 7in embargo, para cada sustancia qumica hay un
determinado grado de to$icidad.
5. Sis!$a 5i#l?ic#
El sistema biolgico sobre el cual act&a el agente t$ico es de suma importancia, ya
que el eecto ariar notablemente seg&n el organismo. 9icho actor debe ser tomado en
cuenta, ya que es bien conocido que entre las dierentes especies de animales y el hombre
hay una gran ariacin en la sensibilidad hacia los agentes t$icos. El conocimiento del
origen, desarrollo y curso de una into$icacin en un animal particular debe ser establecido
para con bases cienticas, e$trapolarlo al hombre.
c. V(a # *'!a + a5s#*ci
Es bien conocido que un mismo agente t$ico puede producir eectos muy
dierentes, dependiendo de la ruta por la cual el sistema biolgico lo absorba. %omo
eemplo tenemos el caso del disolente he$ano, el cual si una persona adulta inhala sus
apores, en un lapso de : a / minutos puede perder el conocimientoI sin embargo, esta
misma persona puede ser capaz de beber hasta algunas decenas de mililitros sin que se
obsere eecto alguno de to$icidad aguda. 'o anterior se debe a que para que un agente
$enobitico produzca su eecto t$ico debe llegar a los receptores especicos,
atraesando una o arias membranas tisulares (5abre y Truhaut, :3?4).
a que histricamente la principal a de administracin por la cual se absorbe unagente $enobitico ue la oral, en la actualidad se reconocen dos grandes rutas de
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administracin, que son la enteral, se usa el tracto gastrointestinal, (oral, sublingual y
rectal) y la parenteral, se reiere a todas las as en las que se eita el paso por el aparato
digestio como se obsera en la igura :.
F'!, Vall ) L'cas 72===:.
Fi?'*a 1, V(as + a+$iis!*aci + "#5i!ic#s 7a5s#*ci:.
Para que un agente $enobitico pueda maniestar su eecto ben#ico (remedio) oda0ino (eneno), debe atraesar y alcanzar los receptores especicos del rgano o teido,
por lo cual debe ser capaz de atraesar las dierentes barreras biolgicas. *s tenemos que
de todas las anteriores as o rutas de absorcin de un agente $enobitico su elocidad de
absorcin es dierente como se puede obserar en el cuadro ::.
C'a+*# 11, V(as # *'!as + a+$iis!*aci ) s'
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+. Ti$%# + i!*acci +l a?! !"ic#
El eecto de un agente t$ico sobre un sistema biolgico se traduce en una
alteracin del equilibrio isiolgico (homestasis), por lo que una into$icacin es una
enermedad y como tal debe considerarse bao un criterio patocrnico, es decir
estimando su curso o eolucin en uncin del tiempo, as podemos clasiicarla como
into$icacin aguda, crnica o subaguda.
'a into$icacin aguda se deine como la e$posicin hacia un agente $enobitico
que produce una maniestacin casi inmediata (en ocasiones en minutos) con una sola
administracin del t$ico, que puede llear al into$icado a la muerte, o a una
recuperacin total o parcial, de la cual pueden quedar o no secuelas o lesiones
persistentes. En muchos de los casos de una into$icacin aguda se presenta un
enmeno de reersibilidad con e$cepcin de la muerte.
En general la into$icacin subaguda(llamada tambi#n subcrnica), no implica
un menor grado de graedad de la into$icacin aguda, sino que se presenta una
eolucin de la into$icacin con trastornos subclnicos. *unque este tipo de
into$icacin requiere la administracin repetitia del t$ico, al inicio no se presentan
trastornos isiblesI sin embargo, a corto plazo se pueden presentar eidencias de la
into$icacin y algunos to$iclogos consideran que para que se presente #sta, se debe
e$poner el sistema biolgico al t$ico en un lapso que puede ariar de un mes a tres
meses.
'a into$icacin crnica se presenta como consecuencia a la repetida e$posicin
hacia el agente t$ico. Esta absorcin se produce con cantidades relatiamente peque0as
del t$ico, que por s mismo no producen trastornos isibles en un inicio, pero la
acumulacin del agente $enobitico en el organismo (normalmente en un rgano o teido
especico) y con el transcurso del tiempo, se presentan estados patolgicos, y en la
mayora de los casos son de carcter irreersible.
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:4
. E"c*ci +l a?! !"ic#
'a e$crecin de los t$icos se eect&a por medio de la orina, bilis, heces y una alta
proporcin de los compuestos oltiles, por el aire e$pirado. "enores cantidades se
eliminan por la leche, el sudor y la salia, y que aunque cuantitatiamente no sean
releantes, en algunos casos cobra importancia, como es el caso de madres en
lactancia que sean umadoras, bebedoras o drogadictas.
El meor sistema de e$crecin es la a urinariaI ya que en un adulto, las arteriolas
precedentes de la arteria renal aportan un luo de :.- a :./ lmin. (apro$imadamente el
-1J del gasto cardaco) as, la e$crecin urinaria es la ms importante para eliminar del
organismo las sustancias t$icas ingeridas en la dieta. El ri0n e$creta los t$icos por la
misma ruta que e$creta las sustancias endgenas.
'os capilares glomerulares tienen poros relatiamente grandes (2 *ngstroms), que
permiten el paso de sustancias de peso molecular de hasta ?,I por lo tanto, salo
protenas de alto peso molecular, se pueden iltrar en el glom#rulo. 'os &nicos t$icos que
no se iltran, son los que estn unidos a protenas de alto peso molecular. Todos los
compuestos que se encuentran en la orina tubular podrn e$cretarse con ella o reabsorberse
pasiamente a la corriente sangunea. 'as sustancias polares o hidrosolubles generalmente
no se absorben y pasan a la orinaI sin embargo, los compuestos con alto coeiciente de
particin lpidoagua sern reabsorbidos, pasiamente a tra#s de las membranas tubulares.
a que las sustancias con un alto grado de liposolubilidad no pasan al tubo renal o son
reabsorbidas, es necesario que el sistema biolgico para eliminarlas deba transormarlas
introduci#ndoles grupos uncionales a la mol#cula (especialmente hidro$ilos) para que se
aumente su polaridad o conugarlas con sustancias acarreadoras, que incrementen su
hidrosolubilidadI al primer obetio contribuye el eleado niel de enzimas o$idasas en el
teido renal. *dems, en este proceso de e$crecin renal es de suma importancia el pC, y
en este caso ser coneniente que el compuesto ionizable se encuentre en su orma inica
para que se acilite su e$crecin (Codgson y 'ei, :383).
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
:?
* tra#s de la bilis, debido a sus cualidades tensoactias, el hgado elimina
sustancias de eleado peso molecular (S/), ya sean polares o no polares y
ionizadas o no ionizadas. ormalmente, la e$crecin se realiza contra un gradiente de
concentracin. 'a elocidad de ormacin de bilis es mucho menor que la de orinaI una
importante dierencia anatmica entre el hgado y el ri0n, es que el primero dispone de
una doble a de aporte sanguneo constituido por la ena porta y por la de la arteria
heptica. 'a sangre del hgado, contrariamente a la del ri0n, circula a una elocidad
relatiamente lenta, lo que da tiempo para que las sustancias liposolubles penetren en los
hepatocitos y puedan ser secretadas por la bilis. o obstante que la bilis ierte
directamente al intestino delgado, #stos compuestos son e$cretados con las heces o en
ocasiones son biotransormados por las bacterias intestinales de tal orma que se pueden
reabsorber, en el <imo caso se establece un ciclo que se conoce como %iclo
Enteroheptico (7hibamoto y >eldanes, :334).
2.@ PROCESO DE BIOTRANSFORACIN
'os humanos y muchos otros animales estn constantemente e$puestos en su medio
ambiente a una asta ariedad de agentes $enobiticosI los cuales pueden ser de origen
natural o ormados por interencin del hombres. En general los compuestos ms
lipolicos son ms cilmente absorbidos a tra#s de la piel, pulmones o del tracto
gastrointestinal. 'a constante e$posicin a este tipo de sustancias podra resultar en su
acumulacin dentro del organismo, al menos que se presente un sistema eicaz de
eliminacin. %on e$cepcin de la e$halacin, para que un agente $enobitico pueda ser
eliminado del organismo, requiere que sea soluble en ase acuosa, lo anterior unciona para
compuestos no oltiles y en consecuencia sern e$cretados por la orina y las heces, que
son las predominantes rutas de eliminacin. 7in embargo, los compuestos lipolicos que se
encuentran e los luidos de e$crecin tienden a diundir hacia las membranas y en
consecuencia son reabsorbidos, mientras que los compuestos solubles en agua son
e$cretados, lo que deara aparentemente una acumulacin de los agentes $enobiticos
lipolicos dentro del organismo (=laassen et al, :384).
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
:8
2.@.1 Pa#*a$a ?*al
9e acuerdo a la estructura de la membrana celular, esta le coniere una selectiidad
en la absorcin tanto de las sustancias endgenas como $enobiticas. Esta selectiidad
permite que e$istan as de absorcin especica para los nutrimientos hidrosolubles con un
gasto energ#tico (transporte actio), pero por otra parte aunque la mayora de los
organismos ios son casi impermeables a la gran mayora de las sustancias hidrosolubles
no deseables, no pueden preenir la absorcin de la mayora de las sustancias liposolubles.
En la igura - tenemos resumido en un esquema ilustratio, las principales as de
absorcin y eliminacin tanto de compuestos endgenos como e$genos (7hibamoto y
>eldanes, :334).
F'!, Vall ) L'cas 72===:.
Fi?'*a 2, P*ici%al-s
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
:3
2.@.2 A5s#*ci
'os animales superiores han desarrollado un n&mero de sistemas metablicos que
conierten los agentes $enobiticos liposolubles en metabolitos hidrosolubles capaces de
ser e$cretados por las as de eliminacin. * esta actiidad bioqumica se le ha
denominado proceso de >iotransormacin, el cual se ha diidido a su ez en dos grandes
grupos de actiidad enzimtica; reaccin de 5ase + y 5ase ++ (*nders, :381).
a. Racci#s fas I.
'a uncin de este tipo de reacciones, es modiicar la estructura qumica de la
mol#cula, por introduccin de grupos uncionales como son hidro$ilo, amino, carbo$ilo
entre otros. Tambi#n, se puede obtener una mayor polaridad del agente $enobitico por
e$posicin de grupos uncionales como es el proceso de hidrlisis. Posiblemente la
o$idacin es la reaccin ms importante de las reacciones de ase +I en general estas
reacciones estn mediadas por el sistema de o$idacin microsomal que contiene el
citrocromo PA21, tambi#n conocido como Gsistema o$idasa de uncin mi$taH, el cual
requiere del coactor nicotinAadeninAdinucletidoAreducido (*9PC) como donador inicial
de electrones y o$geno molecular como o$idante (Balle y 'ucas, -).
5. Racci#s + fas II.
Este tipo de reacciones metablicas son de biosntesis por lo cual requieren de un
gasto energ#tico (ormacin de enlaces qumicos)I por lo tanto, son reacciones enzimticas
que aparte de requerir de ciertos coactores, necesitan de substratos de alta energa como es
el *TP.
'as reacciones de ase ++ tambi#n se denominan como reacciones de conugacin,
inolucran la adicin a los compuestos $enobiticos de mol#culas endgenas, las cuales
generalmente son polares y de alta disponibilidad por parte del organismo. Estos grupos
endgenos son adicionados a grupos uncionales presentes ya en los compuestos
$enobiticos, o que ueron introducidos o e$puestos en la ase + del proceso de
biotransormacin. El propsito inal es de obtener mol#culas polares y con bao
coeiciente de particin lpidoagua, para que se acilite su e$crecin al disminuir
substancialmente su carcter lipolico (=laassen et al, :384).
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
-
2.9 DESCRIPCIN DE RGANOS FRECUENTEENTE EVALUADOS PARA
OBSERVAR DAMOS POR PRODUCTOS TOICOS
2.9.1 L#s Ri#s
a. G*ali+a+s
'os ri0ones (5igura /) son rganos grandes, roizos, con orma de habichuela que
estn situados en el retroperitoneo a ambos lados de la columna ertebral. 7e e$tienden
desde la duod#cima #rtebra torcica hasta la tercera #rtebra lumbar y el ri0n derecho
est ubicado apenas ms alto que el izquierdo (Doss, -1).
F'!, J'&'i*a ) Ca*i*# 72==@:.
Fi?'*a , C#*! Es&'$>!ic# +l Ri.
5. La Nf*#a
'a nerona es la unidad estructural y uncional undamental del ri0n. %ada ri0n
esta constituido por entre : y 2 millones de neronas. %ada nerona est ormada por una
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
--
>oUman. %omo consecuencia, la cpsula de >oUman adopta orma de copa y adquiere por
tanto doble pared, de manera que el epitelio reiste las asas capilares y delimita la pared
opuesta de la cpsula. Por tanto, el corp&sculo renal est ormado por glom#rulo y de la
cpsula de >oUman. El epitelio que recubre cada capilar es el epitelio glomerular o la capa
isceral de la cpsula de >oUman y el que reiste la pared opuesta se llama epitelio capsular o
la capa parietal de la cpsula de >oUman. En el teido renal en io el conunto de capilares
glomerulares llena la cpsula, pero como consecuencia de la retraccin e$perimentada por el
procesado histolgico del rgano, queda generalmente un espacio entre los capilares y la
cpsula que se denomina espacio capsular o espacio de >oUman. Esta regin del corp&sculo
renal en la que se sit&an las arteriolas aerente y eerente se designa polo ascular. !puesto al
polo ascular se halla el polo urinario, en donde el epitelio capsular se contin&a con el epitelio
c&bico del t&bulo contorneado pro$imal (9ellman y >roUn, :3?4).
En la 5igura 1 se puede apreciar el corp&sculo renal.
F'!, J'&'i*a ) Ca*i*# 72==@:. Fi?'*a @, C#*%/sc'l# *al.
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
-/
+. C#*!s 6is!#l?ic#s + la c#*!4a *al
En los cortes histolgicos la distincin entre los t&bulos contorneados distales y los
pro$imales, ambos presentes en la zona cortical y ormados por epitelio c&bico, se sustenta
en los datos siguientes; sus c#lulas son ms peque0as (mayor n&mero de n&cleo en cada
corte transersal), no poseen borde en cepillo y son menos acidilas (poseen menor
cantidad de mitocondrias). El t&bulo contorneado distal est situado unto al corp&sculo de
"alpighi de la misma nerona y, en ese punto, su pared se modiica (unqueira y %arneiro,
-1).
En las 5iguras 4 y ? se obsera cortes histolgicos de la corteza renal.
F'!, J'&'i*a ) Ca*i*# 72==@:.
Fi?'*a 9, Vis!a %a#*>$ica + la c#*!4a *al &' s!a c#s!i!'i+a %*ici%al$!%#* !/5'l#s c#!#*a+#s %*#"i$als 7P: !/5'l#s c#!#*a+#s +is!als 7D: )?l#$*'l#s 7G:. Tici + %a*a**#sailia ) a4'l + !#l'i+ia. P&'# a'$!#.
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
-2
F'!, J'&'i*a ) Ca*i*# 72==@:.
Fi?'*a , R?i c#*!ical +l *i &' $'s!*a l#s ?l#$*'l#s ) l#s !/5'l#s *als.Tici + 6$a!#"ilia ) #sia. P&'# a'$!#. 7J'&'i*a ) Ca*i*# 2==@:.
2.9.2 El 3(?a+#
a. G*ali+a+s
El hgado es la ms grande de las glndulas y la scera ms oluminosa del
organismo. Pesa alrededor de :.1 g corresponde ms o menos al -,1J del peso corporal
total del adulto. Est ubicado principalmente en la regin del abdomen llamada
hipocondrio derecho aunque tambi#n se e$tiende un poco hacia el hipocondrio izquierdo y
est protegido por la parrilla costal (Doss, -1).
El hgado est diidido anatmicamente por surcos proundos en dos lbulosgrandes (derecho e izquierdo y en otros dos ms peque0os (lbulo cuadrado y lbulo
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
-1
caudado o de 7piegel). Esta diisin anatmica slo tiene importancia topogrica porque
relaciona los lbulos hepticos con otros rganos abdominales. 'a diisin en segmentos
uncionalesquir&rgicos que corresponden a la irrigacin sangunea y el drenae biliar tiene
mayor importancia clnica (Doss, -1).
5. El 6(?a+# +?*a+a f>*$ac#s ) !#"ias
'os hepatocitos participan en la degradacin de rmacos, to$inas y protenas
e$tra0as al organismo ($enobiticos). "uchos rmacos y to$inas no son hidrosolubles,
por lo que no pueden eliminarse de la circulacin con eicacia por los ri0ones. El hgado
conierte estas sustancias en orma ms solubles en agua. Este proceso lo realizan los
hepatocitos en dos ases (Doss, -1);
'a fase I, llamada oxidacin, comprende la hidro$ilacin (adicin de un grupo
AAA!C) y la carbo$ilacin (adicin de un grupo AAA%!!C) en un compuesto e$tra0o. Esta
ase ocurre en el retculo endoplasmtico liso y las mitocondrias de los hepatocitos.
%omprende una serie de reacciones bioqumicas con protenas que colectiamente reciben
el nombre de citocromo P21.
'a fase II, llamada conjugacin, comprende la asociacin (conugacin) de la
sustancia e$tra0a con cido glucornico, glicina o taurina. Este proceso torna el producto
de la ase + todaa ms hidrosoluble de modo que se pueda eliminar con acilidad por los
ri0ones.
c. L#5'lill#s 3%>!ic#s
7eg&n 9ellmann y >roUn (:3?4) la estructura lobulillar puede interpretarse de tres
modos dierentes, dependiendo de las relaciones uncionales que se consideren. Ellobulillo heptico, llamado en ocasiones lobulillo clsico, es una unidad estructural
organizada alrededor de la ena central. 'os contornos de los cortes transersales de este
lobulillo tienen orma he$agonal apro$imadamente, con los sinusoides irradiando desde la
perieria a la ena central en la que desembocan. 'as reas portalesse hallan presentes en
apro$imadamente tres de los seis ngulos del lobulillo heptico. Estas zonas, de orma
triangular, de teido conuntio contienen ramas de la ena porta, arteria heptica, asos
linticos, uno o ms conductillos biliares y nerios. El lobulillo heptico estespecialmente bien delimitado en el cerdo, ya que se halla completamente rodeado por
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
-4
tabiques de teido conuntio. En otras especies los tabiques son menos isibles y el
par#nquima de un lobulillo aparece mezclado con los lobulillos adyacentes, sin una lnea
de delimitacin clara.
El lobulillo portales una unidad uncional centrada alrededor del canalculo biliar
del rea portal. 7e deine como un rea triangular compuesta de par#nquima de tres
lobulillos hepticos adyacentes, que desaguan por el canalculo biliar localizado en la zona
portal. 9e esta orma, el ee del lobulillo portal es el canalculo biliar interlobulillar del
rea portal y la perieria se halla delimitada por tres enas centrales.
*dems de las unidades uncionales tradicionales de la estructura antes descrita, se
ha propuesto una tercera unidad, el cino heptico. Este es apro$imadamente una zona
oal del par#nquima, cuyo ee gira alrededor de la rama terminal de la ena porta y el
comienzo de los conductos biliares. 6na ena central se halla en cada e$tremo del cino y
un rea portal en un lado. 7e hacen ostensibles tres zonas de diersa actiidad metablica
entre el ee y la ena central, que se producen por la disminucin del aporte de nutrientes y
de o$geno conorme la sangre luye hacia la ena central. 9e esta orma, las c#lulas de la
zona : reciben la mayor parte del o$geno y nutrientes, mientras que las de las zonas - y /
reciben progresiamente menos.
7eg&n Doss (-1), los hepatocitos en cada cido heptico se describen dispuestos
en tres zonas elpticas conc#ntricas que rodean el ee menor;
'a zona : es la ms cercana al ee menor y a la irrigacin proeniente de las ramas
penetrantes de la ena porta y de la arteria heptica. Esta zona corresponde a la perieria de
los lobulillos clsicos. 'a zona / es la ms leana al ee menor y la ms cercana a la ena
centrolobulillar (#nula heptica postsinusoidal). Esta zona corresponde al centro del
lobulillo clsico cuyos hepatocitos rodean la ena centrolobulillar. 'a zona - est entre las
zonas : y / pero no tiene lmites ntidos.
'a descripcin en zonas es importante en la descripcin y la interpretacin de los
modelos de degeneracin, regeneracin y eectos t$icos especicos del par#nquima
heptico en relacin con el grado o la calidad de la perusin ascular de los hepatocitos.'as c#lulas de la zona : son las primeras en recibir o$geno, nutrientes y to$inas desde la
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-?
sangre sinusoidal y son las primeras en e$hibir alteraciones morolgicas tras la
obstruccin de la a biliar (estasis biliar). Estas c#lulas tambi#n son las <imas en morir si
hay trastornos de la circulacin y son las primeras en regenerarse. En cambio, las c#lulas
de la zona / son las primeras en surir necrosis isqu#mica (necrosis centrolobulillar) en las
situaciones en las que la perusin y las primeras en acumular lpidos.
En la 5igura 8 se obsera cortes histolgicos de los lbulos hepticos.
F'!, J'&'i*a ) Ca*i*# 72==@:.
Fi?'*a , ic*#f#!#?*af(a +l 6(?a+#. A: Va C!*al 7VC:. B: Es%aci# %#*!a&' c#!i 'a *a$a + la a*!*ia 6%>!ica 'a *a$a + la
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-8
bronquios intrapulmonares se dicotomizan, dando lugar a bronquiolos de dierentes
rdenes, designados con los nombres primarios, secundarios, terciarios o terminales y
bronquiolos respiratorios. Los conductos alveolares se e$tienden posteriormente a los
bronquiolos respiratorios y no son realmente ms que un conducto en los que se abren
numerosos al#olos uno al lado del otro. 'as grandes estructuras sacciormes en las que se
abren los al#olos que las rodean se llaman sacos alveolares. 'os intercambios de gases
tienen lugar a niel de los alvolos. En la 5igura 3 se puede apreciar las ramiicaciones del
aparato respiratorio (9ellman y >roUn, :3?4).
F'!, J'&'i*a ) Ca*i*# 72==@:.
Fi?'*a 8, P*ici%als *a$ificaci#s +l A%a*a!# Rs%i*a!#*i#.
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
-3
2. RELACION DOSIS RESPUESTA
'a relacin dosisefecto es la relacin entre la dosis y el eecto a niel indiidual. 6n
incremento de la dosis puede incrementar la intensidad de un eecto o su graedad. Puede
obtenerse una cura de dosisAeecto a niel de todo el organismo, de la c#lula o de la
mol#cula diana. Cay algunos eectos t$icos, como la muerte o el cncer, que no tienen
grados, sino que son eectos Gde todo o nadaH (Colmberg, -:).
'a relacin dosisrespuesta es la relacin entre la dosis y el porcentae de indiiduos que
presentan un determinado eecto. *l incrementarse la dosis lo normal es que aumente el
n&mero de indiiduos aectados en la poblacin e$puesta. El establecimiento de las
relaciones dosisAeecto y dosisArespuesta es esencial en to$icologa. En los estudios
m#dicos (epidemiolgicos) suele utilizarse como criterio para aceptar una relacin causal
entre un agente y una enermedad el hecho de que el eecto o la respuesta sean
proporcionales a la dosis (Colmberg, -:).
En la realizacin de un e$perimento donde se quiere determinar la relacin
GdosisArespuestaH de un determinado $enobitico sobre un deinido organismo, se
deben considerar como mnimo los siguientes actores; a) 7eleccin del tipo de respuestapara ser monitoreada en t#rminos cuantitatios. b) 9einicin del organismo de prueba
(sistema biolgico). c) Perodo de e$perimentacin o duracin del ensayo. d) 7erie
de dosis a probar; dosis simple (lo que generalmente implica un estudio de to$icidad
aguda)I dosis repetitia a corto plazo (estudio subagudo)I dosis repetitia a largo plazo
(to$icidad crnica). e) Ba de administracin (Balle y 'ucas, -).
'a respuesta de un organismo hacia un agente $enobitico no aria &nicamente conlas dierentes especies animales (ariabilidad interespecie)I sino que #sta, normalmente
tambi#n puede ariar dentro de la misma especie (ariabilidad intraespecie (Balle y 'ucas,
-).
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/
2..1 D#sis l!al $+ia 7DL@=:
'a 9'1 (dosis letal) es la dosis que produce una mortalidad del 1 J en una
poblacin animal. 'a 9'1 sola considerarse en la bibliograa ms antigua como unamedida de la to$icidad aguda de las sustancias qumicas. * mayor 9'1, menor to$icidad
aguda. 9e una sustancia qumica muy t$ica (con una 9'1 baa) se dice que es potente.
o hay una correlacin necesaria entre la to$icidad aguda y la to$icidad crnica
(Colmberg et al., -:).
En el cuadro :- se tiene una clasiicacin del grado de to$icidad de un agente
$enobitico, en el cual se aprecia que sustancias con alores de 9'1 menores de : mg=g
por a oral de son sumamente t$icas, y de las cuales podemos encontrar presentes
en los alimentos.
C'a+*# 12,Ra?# + !#"ici+a+ a?'+a
D#$iaci
ADINISTRACIN9'1
9osis oral &nica(rata)
9'19osis cutnea
&nica
(coneo)
%'1V+nhalacin deapor 2 horas
(rata)
Posible dosisoral letal a unhombre adulto
E$tremadamentet$ico
K : mg=g K 1 mg=g : : gota, : grumo
*ltamentet$ico
:A1 mg=g 1A1 mg=g :A: : cucharita (2ml)
"oderadamentet$ico
1A1 mg=g 1A/1 mg=g :A:, / g
'igeramentet$ico
.1A1 g=g ./1A./ g=g :,A:, -1 g
Prcticamente no
t$ico
1A:1 g=g /A-1 g=g :,A:, : '
Delatiamenteinocuo
S :1 g=g -1 g=g S :, S : '
%oncentracin letal media, e$presada en ppmF'!, Dic6$a ) G*a*+ 71898:.
2..2 Rs%'s!a Ac'$'la!i
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
/:
animales de prueba (por eemplo, ratn), se les administra un compuesto a dierentes series
de concentraciones y en base a una ruta preestablecida. 'as dosis que se administren,
deben ser tales, que no todos los animales mueran, ni que todos sobreian. *dems la
dosis inicial debe ser lo suicientemente baa para que no maniieste ning&n eecto
aderso o que interiera con la determinacin. En grupos subsecuentes la dosis, se
incrementa en base logartmica o e$ponencial. 'a dosis inal, debe causar la muerte en
todos los animales de prueba (Balle y 'ucas, -).
7eg&n 9eshpande (--), los agentes t$icos pueden ser clasiicados en una
ariedad de ormas. Por eemplo, pueden ser clasiicadas en uncin de sus rganos diana
(hgado, ri0ones, pulmones, piel, sistema nerioso, sistema hematopoy#tico, etc.), su
utilizacin (pesticidas, disolentes, aditios alimentarios, etc.), su origen (animal, egetal,
microbiano, to$inas), y sus eectos (cncer, mutaciones, da0o heptico, etc.). Tambi#n
pueden ser agrupados en uncin de su estado sico (gas, polo, lquido), sus requisitos de
etiquetado (e$plosios, inlamables inlamabilidad, o$idante), sus propiedades qumicas
(aminas aromticas, hidrocarburos policclicos, hidrocarburos halogenados, etc.), o su
potencial t$ico, como se muestra en el cuadro :/.
C'a+*# 1, Clasificaci + la T#"ici+a+
CLASIFICACION PROBABLE DOSIS ORAL LETAL
EDIA PARA 3UANOSPrcticamente no t$ico S :1 gFg'igeramente t$ico 1L:1 gFg"oderadamente t$ico .1L1 gFg"uy t$ico 1L1 mgFg
E$tremadamente t$ico 1L1 mgFg7upert$ico K 1 mgFgF'!, Ds6%a+ 72==2:.
2. DOSIS LETAL EDIA Q TODOS ALTERNATIVOS
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
/-
'a 6nin Europea parece decidida a acabar con la actual situacin de
desconocimiento sobre los riesgos reales que las sustancias y preparados qumicos suponen
para la salud humana y el medio ambiente. * partir de :38: se estableci un sistema de
notiicacin de sustancias nueas para garantizar el control de los productos
comercializados. *unque para las Gnueas sustanciasH se e$ige una ealuacin bastante
completa, de las Ge$istentesH o comercializadas antes de :38: e$iste un absoluto
desconocimiento sobre sus caractersticas to$icolgicas (Depetto et al, -2).
Para las ms de /, sustancias producidas en cantidades superiores a : T" ser
necesario conocer urgentemente sus propiedades to$icolgicas y ecoto$icolgicas
antes de -:-. Para ello puede ser necesario utilizar ms de :- millones de animales
ertebrados. 7in embargo, la nuea estrategia pretende omentar los ensayos sin animales.
9e hecho, los ensayos de sustancias producidas entre : y : T" deberan limitarse a
m#todos in !itro. os encontramos por tanto en un momento crucial y una oportunidad
para considerar la utilidad de los procedimientos que sern ms necesarios,
incluyendo los de to$icidad aguda, irritacin, corrosiidad, ecoto$icidad, etc. (Depetto et
al, -2).
E$isten protocolos de los dierentes ensayos to$icolgicos que se realizan in !i!o,
de acuerdo con los criterios de la "rgani#ation for $cono%ic &ooperation and
De!elop%ent(!E%9). En #stos se han introducido dierentes criterios de reduccin del
n&mero de animales y de reinamiento de las t#cnicas, si bien e$isten pocos m#todos de
reemplazo que hayan sido aceptados en el plano legislatio.
'a armonizacin de los protocolos utilizados en todo el mundo ha reducido de
orma signiicatia el uso de animales con estos ines. 9esde :38- la !E%9 ue la primera
organizacin internacional en establecer unos criterios de armonizacin de los ensayos
realizados en animales, siendo aceptados por todos los pases miembros de dicha
organizacin.
'a !%9E ha sustituido el ensayo de la determinacin de la toxicidad aguda por
va oral(9'1 seg&n T< 2:) por sus tres alternatias (2-, 2-/ y 2-1). Estos ensayos
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
//
reducen signiicatiamente el n&mero de animales empleados, y en muchos casos, el dolor
y estr#s asociado a los mismos. 9esde ulio del -:, la comunidad reguladora no usa ms
el ensayo de la 9'1.
E$iste un gran inter#s por conocer si es posible predecir la 9osis 'etal por a oral
en Data a tra#s de m#todos in itro. Para ello, Calle y
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
/2
(%*). 'os procedimientos ms prometedores in itro son el cultio de c#lulas dendrticas
humanas a partir de mononucleares peri#ricos ealuando la liberacin de +'A:W o la
produccin de sus *Dm, unto al empleo de modelos de piel humana reconstituida,
cultios de c#lulas de 'angerhans, cultios de queratinocitos y cocultios de c#lulas T y
c#lulas dendrticas.
El %entro Europeo para la Balidacin de "#todos *lternatios (E%B*") ha
propuesto una estrategia para ealuar la capacidad de sensibilizacin d#rmica (Xorth
y >alls, --) que comenzara por la b&squeda de datos preios sobre el compuesto,
seguida de la ealuacin de las propiedades isicoqumicas del mismo y la estimacin
mediante sistemas predictios computacionales. * continuacin se realizara un estudio
de los parmetros de particin, un ensayo in itro de sensibilizacin, y inalmente, si
no se han podido e$cluir los eectos, el ensayo de ndulo lintico local.
'a 9irectriz 2? de la !%9E de estudio por dosis repetidas de -8 das ue reisada
en :331 para permitir su uso como primera etapa para detectar eectos inmunot$icos
(>arloU et al., --). 7e incluy la pesada del timo y el estudio histopatolgico de las
placas de Peyer, timo, ndulos linticos y m#dula sea. Para una meor ealuacin se
sugiri posteriormente realizar un estudio histopatolgico especializado de las c#lulas y los
rganos linoides y linticos, y en caso de detectar alteraciones, aplicar un ensayo de
eritrocitos de carnero.
El estudio de 3 das, 9irectriz 28 de la !E%9, puede ser ms sensible, no slo
por el periodo de e$posicin, sino tambi#n por el empleo de mayor n&mero de animales.
'a 1-Y *samblea
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
/1
laboratorio correctamente realizados y en animales, cuando sea oportunoH. Por lo tanto,
los procedimientos alternatios pueden proporcionar un considerable ahorro en el n&mero
de animales empleados (Depetto et al, -2).
En la /:Z Deunin %onunta de la !%9E en oiembre de - se decidi que
debe ser eliminado el ensayo actual de la determinacin de la to$icidad agua por a oral
(9'1 seg&n T< 2:). 6na decisin que en buena medida ue debida al intenso trabao y
presin eercida durante largos a0os de negociacin y reuniones de e$pertos por los
miembros de la 6nin Europea y de la !E%9 (*sociacin Espa0ola de To$icologa,
-:).
El -1 de Enero de -: ue aprobada una 9irectia de la %omisin Europea que,
entre otras muchas cosas, decreta la eliminacin del m#todo >.: (equialente a la
determinacin de la 9'1 o T< 2:) del *ne$o B de la 9irectia 4?128 que contiene los
m#todos de test oiciales en la E6 para ealuar las propiedades de las sustancias qumicas
(*sociacin Espa0ola de To$icologa, -:).
2.8 ESTUDIOS DE TOICIDAD DE DOSIS REPETIDAS
'os estudios de to$icidad de dosis repetidas tienen como obetio caracterizar el
peril to$icolgico de la sustancia tras la administracin repetida. 9e ellos es posible
obtener inormacin sobre los eectos t$icos, la identiicacin de los rganos blancos, los
eectos sobre las unciones isiolgicas, hematolgica, patolgica, histopatolgica, y la
determinacin del alor !E'. Estos estudios pueden tener duraciones peque0as (por
eemplo, :2 y -8 das) o inolucrar un perodo ms e$tensio de la administracin de la
droga (por eemplo, 3 das, :8 das). (7ouza, -4)
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
/4
El'"$ ('"$) es el niel sin eecto (aderso) obserado, o la dosis ms alta
que no produce eecto t$ico. Para establecer un !E' se necesitan m<iples dosis, una
poblacin amplia e inormacin complementaria para garantizar que la ausencia de
respuesta no es un mero enmeno estadstico. El '!E' es la mnima dosis eectia
obserada en una cura de dosisArespuesta, (es decir, la dosis mnima) que produce un
eecto. 6nfactor de seguridad es un n&mero conencional, arbitrario, por el que se diide
el !E' o el '!E' obtenidos en e$perimentos con animales para establecer una dosis
permisible proisional en los seres humanos. 7uele utilizarse en la esera de la to$icologa
alimentaria, pero puede emplearse tambi#n en la to$icologa laboral (Colmberg et al.,
-:).
El -? de ulio del -4 el 59* (5ood *nd 9rug *dministration) termina de
elaborar la
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
/?
porcentae considerable de picos y trozos de calamar gigante en el tracto digestio de
especies capturadas (+barra, -4). Dazn por la cual puede alimentarse de especies que
pueden contener algunas to$inas marinas.
*lgunas de las into$icaciones de origen marino son causadas por ingerir pescados y
mariscos que se han alimentado con dinolagelados o algas productoras de to$inas. %on la
tendencia actual de consumo de productos marinos, se podran producir into$icaciones que
pueden ser lees o de mayores consecuencias. Entre los mariscos que se alimentan con
algas estn los meillones, almeas, ostiones y los peces GciguateraH (%olUell, :38/).
Tambi#n pueden presentarse otros problemas y causas como las que se presentan en el
%uadro :2.
C'a+*# 1, I!#"icaci#s + #*i? $a*i#
PROBLEA ALIENTO ICROORGANISOS OBSERVACIONES
Cistamina
%iguatera
Parlisis pormariscos
eurot$icos
9iarrea
Peces Sco%broide(at&n, macarela,
bonito, etc.) otrospeces (sardina,anchoeta)
>arracudaCuachinangoDbalo
"eillones*lmea%aracol, etc.
"ariscosrebeto$ina* y > (poli#ter)
Dinophysis forti-
D. acu%inata
(%hile, pases nrdicos, apn)
*cumulacin de histamina enpescado descompuesto,minutos a horas.
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
/3
enermedad puede ser de -L/ das, aunque puede prolongarse durante semanas o incluso
a0os en los casos graes. 'a muerte sobreiene como consecuencia de un colapso
circulatorio (Cuss, :33?).
2.1=. T#"ia %a*ali4a! + $#l'sc#s 5i
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
2
7e ha dado parte de miles de casos de enermedades gastrointestinales causados por
la into$icacin diarreica por ingestin de moluscos bialos (97P) en Europa, apn y
%hile. 'os dinolagelados causantes de la produccin de las to$inas pertenecen a los
g#nerosDinophysis y urocentru%. Estos dinolagelados estn ampliamente distribuidos,
lo que signiica que esta enermedad tambi#n puede producirse en otros lugares del mundo.
*l menos se han identiicado ? to$inas, incluido el cido oFadoico. 'a aparicin de la
enermedad se produce entre la media hora y unas pocas horas despu#s del consumo del
marisco que se ha estado alimentando de algas t$icas. 'os sntomas son desrdenes
gastrointestinales (diarrea, mitos, dolor abdominal) y las ctimas se recuperan en /L2
das. unca se ha registrado ninguna muerte (Cuss, :33?).
2.1=.@ T#"ia '*#!"ica + $#l'sc#s 5i
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
2:
estructura rgida, soluble en agua y termoestable. %ompite con el cido glutmico por los
receptores de #ste, actindolos y permitiendo la entrada de cloruro, calcio y agua, lo que
llea a la ruptura y muerte celular.
'os sntomas son gastrointestinales y neurolgicos; calambres, diarrea, mitos, nuseas,
dolor abdominal, perdida de la concentracin, p#rdida del equilibrio, entorpecimiento,
debilidad, dolor de cabeza, isin borrosa, conusin, #rtigo, p#rdida de la memoria de
corto tiempo (da0a las c#lulas del hipocampo), coma y muerte. 'a dosis m$ima aceptada
internacionalmente es de - ]gg de marisco (Cuss, :33?).
2.1=. 3is!a$ia
'a into$icacin por histamina es una into$icacin qumica debida a la ingestin de
alimentos que contienen altos nieles de histamina. Cistricamente, esta into$icacin se
denomin into$icacin por escmbridos debido a la recuente asociacin con peces de la
5amilia Sco%bridae, entre los que se incluyen el at&n y la macarela o caballa.
'a into$icacin por histamina es un problema de alcance mundial en los pases
donde los consumidores ingieren pescado que contiene altos nieles de histamina. Es una
enermedad benigna, su perodo de incubacin es muy corto (de pocos minutos a pocas
horas) y la duracin de la enermedad es corta (pocas horas). 'os sntomas ms comunes
son los cutneos, como el rubor acial o bucal, urticaria, o edema localizado, pero tambi#n
puede erse aectado el tracto gastrointestinal (nuseas, mitos, diarrea), o producirse
complicaciones neurolgicas (dolor de cabeza, hormigueo, sensacin de quemazn en la
boca) (Cuss, :33?).
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5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
22
.. E l sac*ifici# + l#s *a!#s
- Ceparina 7dica (inhibe la coagulacin de la sangre)
- ^ter.
- eringas desechables est#riles.
- Tieras quir&rgicas
- %aitas plsticas
- 5ormol al :J.
.. Pa*a l#s sa)#s 5i#&'($ic#s ) 6$a!#l?ic#s
- Tubos capilares para microhematocrito.
- Espectrootmetro semiautomtico "etrolab_ :4.
- *nalizador hematolgico automtico 7ysme$ _:8.
- Deactios para la determinacin bioqumica de la concentracin de alb&mina,
creatinina y transaminasa glutamicopir&ica (Tistur.
- *lcohol etlico.
- Oilol.
- Cemato$ilina.
- Eosina al :J.
. ETODOS DE ANLISIS Q PROCEDIIENTO
..1 P*%a*aci +l C#c!*a+# + P*#!(a + P#!a
7e prepar el concentrado de protena de pota seg&n la metodologa seguida por
'azo (-4). El manto de la pota ue limpiado, cortado, laado en agua, precocido, molido,
laado nueamente, centriugado, deshidratado y, inalmente, sometido a una molienda
ina. El producto obtenido presentaba buenas caractersticas organol#pticas. El olor y sabor
ueron agradables y neutrales, sin olor a pota. Estas caractersticas se mantuieron
inalterables durante los tres meses que duro el e$perimento, sin usar ning&n tipo de
preserante o antio$idante. El diagrama de luo del proceso de elaboracin de concentradode protena de pota se muestra en la 5igura :.
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21
Pota Bsceras, piel.
"anto de pota Destos de piel, arena.
"anto limpio %ubos de / cm. de lado.
Producto, agua, hielo Eliminacin del olor y sabor.
"anto cortado TZ 81Z%. "anto con meor te$tura.
"anto precocido %riba de 1 mm. "anto molido.
"anto molido Eliminacin de lquido residual.
Producto centriugado Producto seco. Casta humedad de 8J.
Producto seco Producto menor a :1 m.
Fi?'*a 1=, Dia?*a$a +l fl'# +l %*#cs# + la5#*aci +l c#c!*a+# +%*#!(a + %#!a
'*B*9! +
%!DT*9!
'*B*9! ++
PDE%!%+9!
'+"P+*9!
"!'+9! +
%ETD+56
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24
9icho 9iagrama de luo ue elaborado en base a lo reportado por Doldn (--) y
'azo (-4) con modiicaciones para el caso especico de la pota. 6na bree descripcin
del mismo es la siguiente;
a. Rc%ci + $a!*ia %*i$a
'a pota entera eiscerada ue recepcionada en caas de plstico con hielo. 7e realiz
el respectio anlisis organol#ptico para determinar el grado de rescura y posteriormente
se procedi a separar el manto, la aleta y la cabeza.
5. Li$%ia+#
El manto preiamente pelado ue abierto para su limpieza, se le retir los restos de
sceras, la pluma y la piel delgada de la parte interna del manto.
c. La
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
2?
6. C!*if'?a+#
%on la inalidad de eliminar el lquido residual del laado y reducir el tiempo de secad#.
i. Ds6i+*a!a+#%on aire caliente a 41 Z% hasta una humedad inal de 8J. 7e utiliz un secadero por
coneccin.
. #li+# II
'a molienda se realiz en un molino de martillos hasta una granulometra promedio de
menos de :1 m.
..2 A>lisis Ss#*ial +l C#c!*a+# + P*#!(a + P#!a
Para el anlisis sensorial del %oncentrado de Protena de Pota, se emple el cuadro :1,
dise0ado por 'azo (-4), el cual elabor dicho cuadro sensorial teniendo en cuenta las
caractersticas de color, olor, sabor y te$tura.
C'a+*# 1@, E
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28
.. C#$%#sici &'($ica %*#"i$al
'a composicin qumica pro$imal de la materia prima (%oncentrado de Protena de
Pota) se realiz seg&n los m#todos recomendado por agaFura (:3?-).
.. T#"ici+a+ a +#sis *%!i+as %#* 8= +(as
7e lle a cabo seg&n lo establecido en las 9irectrices de la
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
1
(>%5), en presencia de un e$ceso de colorante en medio tamponeado a pC /.3. El aumento
de absorbancia a 4-1 nm respecto del >lanco de reactio, es proporcional a la cantidad de
alb&mina presente en la muestra.
5.2 D!*$iaci + C*a!iia 7!#+# C#l#*i$!*ic# Ci!ic# # + %'!# fial:
'a creatinina y otros compuestos de la muestra reaccionan con el cido pcrico en
medio alcalino dando un compleo color roo que se cuantiica mediante lectura
otom#trica.
'a determinacin de creatinina puede llearse a cabo por medio de una t#cnica de
punto inal, o por una t#cnica cin#tica eliminndose en ambas el color que se debe a los
cromgenos no creatinina.
En el primer caso, la adicin de cido al medio, destruye el picrato de creatinina
pero no el color ormado por los dems compuestos. Por lo tanto la dierencia entre la
lectura otom#trica antes y despu#s del agregado de cido, permite cuantiicar la creatinina
en orma especica.
En la t#cnica cin#tica, los cromgenos no creatinina, reaccionan dentro de los
primeros / segundos de iniciada la reaccin, que se comporta como cin#tica de primer
orden para la creatinina. 9e manera que entre los / segundos y los 1 minutos posteriores
al inicio de la reaccin, el incremento de color se debe e$clusiamente a la creatinina.
5.. D!*$iaci + la Ac!i
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1:
c. A>lisis Aa!#$#%a!#l?ic#
*l da siguiente de la <ima administracin se procedi a sacriicar por elongacin
cerical para eectuar la e$traccin de los siguientes rganos; ri0n, hgado y pulmn, los
cuales ueron e$aminados macroscpicamente y iados en solucin de ormol al : J para
el posterior estudio histopatolgico. Tambi#n se determin el peso relatio de rganos
(ri0n, hgado y pulmn). 'a metodologa a seguir ue la recomendada por %astillo et al
(-4).
+. A>lisis 6is!#%a!#l?ic#
'as muestras e$tradas de las necropsias se conseraron en ormol al :J, se
incluyeron en paraina y se cortaron en un micrtomo con un grosor de 2 a 1 mm. 7e us la
t#cnica tradicional de coloracin con hemato$ilinaAeosina para la realizacin de los
estudios de histopatologa. 'a metodologa seguida ue la recomendada por %astillo et al
(-4).
.@ ETODOLOGA EPERIENTAL
En la 5igura :: se muestra el dise0o e$perimental que se sigui en la presente
inestigacin.
.9 ANLISIS ESTADSTICO
'os resultados se e$presarn con la media desiacin estndar. Para determinar
dierencias signiicatias entre los grupos se emple el anlisis de arianza (*B*) para
un criterio de clasiicacin de una a (!ne Xay) y se aplic la prueba de comparacin de
medias de TuFey (para ealuar la signiicancia de todas las dierencias entre tratamientos)
y 9unnet (para comparar a cada uno de los tratamientos contra el control),, considerndose
un niel de signiicancia de cinco por ciento (1J). 7e utiliz el programa estadstico
"initab ersin :1.
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
MATERIAPRIMA
PRUEBA PILOTO EVALUACION PATOLOGICA LABORATORIO CLINICO
Grupos Dosis
(10 ratas*/grupo) (mg/kg)
I 500II 1000
III 2000
IV Control
Factores a controlar1. Anlisis sensorial !alua"i#n $e 1. %&ser!a"i#n $e la a"ti!i$a$ 1.- Dian!stico Anato"o # Patol!ico 1. An$lisis Bio%&'"icos2. Composi"i#n 'umi"a. la oi"i$a$ + "omportamiento (!alua"i#n ,a"ros"#pi"a me$iante ne"ropsia) Creatinina- Al&mina + ransaminasa
agu$a oral 2. Control $el peso $iario glutami"opir!i"a (G).
(. - Dian!stico )isto*atol!ico (. E+$"enes )e"atol!icos(Colora"i#n "on ematoilinaeosina para la emoglo&ina- emato"rito- 3e"uento $e
* 3atas "epa 4prague Dale+ !alua"i#n "ortes istol#gi"os $e los #rganos) 6eu"o"itos (lin7o"itos- mono"itos-
eosino7ilos- &as#7ilos- neutr#7ilos).
TO,ICIDAD A DOI REPETIDA /0DA2
Fi&ra 113 Meto4olo'a E+*eri"ental
Con"entra$o$e rotena
$e ota
Anlisis Anatomoatol#gi"a
Anlisisistopatol#gi"o
Anlisis8io'umi"o
menesematol#gi"os
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IV. RESULTADOS Q DISCUSIN
.1 DE LA ATERIA PRIA
.1.1 E
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
12
'os resultados obtenidos son similares a los reportados por 'azo (-4) y a lo
propuesto por "adrid (er cuadro 1) para el %oncentrado Proteico de Pescado del tipo *
pero con la dierencia que no usamos solentes, por lo tanto es un producto con ms
aceptacin en el mercado.
Fi?'*a 12, C#c!*a+# + P*#!(a + P#!a.
.2 TOICIDAD A DOSIS REPETIDAS POR 8= DAS
'a administracin del %oncentrado de Protena de Pota no demostr alteraciones en
el comportamiento, ni en el e$amen sico de los animales tratados durante el perodo dee$perimentacin, adems de no producir mortalidad en ning&n grupo e$perimental. El
consumo de alimento y agua por los animales de ambos se$os se mantuo similar tanto
para el grupo control, como para los tratados con dierentes dosis del producto.
'a administracin durante los 3 das de la dosis lmite de - mg=g no prooc
muertes de los animales o sntomas indicatios de to$icidad. Este resultado enmarca al
concentrado de protena de pota (Dosidicus gigas) en la categora /sin clasificarH (- K9'1) de acuerdo a las %lases de To$icidad de la %omunidad Europea ya que no se
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
11
obser mortalidad ni signos t$icos atribuibles a la administracin de la sustancia de
prueba a la dosis de - mgFg que ue la dosis ms alta empleada (
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
14
adoptado en la
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
1?
concentracin con alores limites hasta de 41 mgFg para ratones y 4 mgFg para
ratas7*ne$o :).
.2.1 E
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
18
En el cuadro :3 se muestra como ue la ariacin semanal del peso corporal de las
ratas de todos los grupos. *l analizar el comportamiento semanal del incremento del pesocorporal y el consumo acumulatio de alimentos se obser un incremento similar en
todos los grupos de tratamiento respecto al control. En el *ne$o 1 se puede obserar
gricamente las comparaciones del grupo +, ++ y ++ ersus el grupo +B (%ontrol).
C'a+*# 18, Va*iaci S$aal +l %s# c#*%#*al + las *a!as 7?: !*a!a+as c# lC#c!*a+# + P*#!(a + P#!a 7$+ia a*i!$!ica +s+a* K1=:
D(as +'*a! l !*a!a$i!#
G*'%# Peso +nicial ? :2 -: -8 /1 2- 23 14+ -41.-/. -??.2/4.? -83.422.3 -88.21/. -33.42?.2 /:./23.3 /8.?1/./ /:2.1/.4 /-:.-18.++ -43.?-8.1 -?:.3/-.1 -?2.-2:.: -?8.?2/.: -88.-28./ -88.11:.- -3/./12.- -31.18./ /.418.1+++ -1:.1//.4
V-18.?/4.2
V-41.?2.3 -4?.221.?
V-?2.?28.1
V-??.124.- -8.-28.8 -?:.224.3
V-8-.422.:V
%ontrol -88.4/8.8 /-.224.2 /:4.-12.2 /-?.313.: ///.342.2 //8.3?.? /2/.?43. /1-.4?-.- /1?.?1.4
VpK,1I VVpK,: y pS .1 en los dems
En las pruebas estadsticas para la ariacin semanal del peso corporal de las ratasde todos los grupos (*ne$o 8) se encontraron dierencias signiicatias (pK.1) y de
acuerdo a la prueba de comparacin 9unnet se eriica dichas dierencias entre el grupo
control y el grupo +++ (- mg=g) desde el inicio, semana :, /, 2, ? y 8. Ello se debe a
que las ratas del grupo : ueron las que inicialmente tuieron menos peso en promedio al
inicio de la inestigacin y el grupo control por el contrario el grupo de mayor peso
promedio al inicio. Ello se debi a que por precaucin las ratas de menor peso seg&n los
clculos de dosiicacin del producto (ane$o :2) iban a necesitar menos olumen dedosiicacin y para eitar problemas con la administracin del concentrado de protena de
pota se procedi a agrupar a las ratas de mayor peso en el grupo control ya que ellas no
iban a recibir el producto.
Para esta comparacin solo se tomo como datos los alores de las primeras 8
semanas (14 das), debido a que en la semana 3 se presento un cuadro gripal ocasionado
por cambios climticos. Por ello se decidi trabaar slo con esos datos..
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
13
.2.2 Bi#&'($ica Cl(ica
'a media aritm#tica desiacin estndar de los datos de >ioqumica (*lb&mina,
%reatinina y *ctiidad Transaminasa asales(al inicio) 2
/.4 ./?-.? L 2.- (Dango)
:.- .:4.8 L :.? (Dango)
4.? .:4/ L :2 (Dango)
VpK,1I VVpK,: y pS .1 en los dems
En el anlisis estadstico (*B*) se obser que para los ndices bioqumicos
ealuados (*lb&mina, %reatinina y T
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
4
rpidamente ante estr#s, trauma o septis. Esto puede deberse a una acelerada redistribucin
desde el espacio intraascular, una disminucin en su sntesis yo un aumento en su
catabolismo ('eit, -8).
7eg&n 5ernndez (-?) en los <imos a0os, la isiologa renal en relacin con las
protenas, y especialmente el comportamiento en relacin con la alb&mina, est
adquiriendo un gran inter#s en la inestigacin renal bsica, a la ez que gana una
creciente importancia en la nerologa clnica, as como en la medicina cardioascular. Por
eemplo, la e$crecin de la alb&mina con la orina inal, que conocemos como albu%inuria,
est siendo reconocida, cada ez ms, como un importante actor de riesgo de
enermedades renales y cardioasculares. *unque es eidente una clara correlacin
epidemiolgica, no e$iste a&n una e$plicacin racional para estas relacionesI recientemente
se ha sugerido que el da0o de los podocitos inducidos por la presin arterial
intraglomerular y mediada por los receptores de los mineralcorticoides podra ser la
e$plicacin de esta cone$in entre la albuminuria y el riesgo de las enermedades
cardioasculares.
9omnguez et al (-:) trabaando con ratas Uistar trabaando con dos grupos de
ratas
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
4:
Fi?'*a 1, Val#*s %*#$+i# + la al5/$ia al iici# ) al fial + la i
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
4-
Fi?'*a 1, Val#*s %*#$+i# + la C*a!iia al iici# ) al fial + la i
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
4/
los rangos de alores reportados por otros autores. omura et al. (:3?1) reportan en ratas
hembras Xistar alores de T
erlanga et al.
(:338), por su parte, reportan T
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
42
Fi?'*a 1@, Val#*s %*#$+i# + la TGP al iici# ) al fial + la i
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5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
44
normales de Cemoglobina el rango entre :- L :8 gdl y el %anadian %ouncil on *nimal
%are (:382) alores normales entre ::.1 L :4 gdl.
7e puede airmar entonces que a pesar que e$iste una dierencia altamente
signiicatia entre el grupo + y el control, los alores de hemoglobina se encuentran dentro
de los alores normales para esta especie.
Fi?'*a 19, Val#*s %*#$+i# + la 3$#?l#5ia al iici# ) al fial + la i
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
4?
El +nstituto acional de !ncologa y Dadiobiologa de la Cabana, %uba (P#rez et al,
-:), manea alores normales de hematocrito para la cepa de la rata Sprague Dawley de
2 L 1:J y la 6niersidad de [aragoza (-1) alores de /1 L 21J y si se obsera el cuadro
-: y la igura :? se er que los alores se encuentran en dicho rango. Podemos airmar
entonces que a pesar que hay una dierencia altamente signiicatia entre el grupo + y el
control, los alores de hematocrito hallados se encuentran dentro de los alores normales
para esta especie.
Fi?'*a 1, Val#*s %*#$+i# + 3$a!#c*i!# al iici# ) al fial + la i
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
48
signiicatias (pS.1) y de acuerdo a la prueba de comparacin TuFey se eriica que no
hay dierencias signiicatias entre los grupos (*ne$o :). 7in embargo, se obser un
aumento de los leucocitos (glbulos blancos) en todos los grupos, estas son las encargadas
de la deensa contra la ineccin, bien como productoras de anticuerpos (linocitos), bien
participando en la destruccin de microorganismos (neutrilos, eosinilos, basilos y
monocitos).
El %anadian %ouncil on *nimal %are (:382) presenta alores normales de
leucocitos para ratas entre los 2 a : c#lulasmm/.
Fi?'*a 1, Val#*s %*#$+i# + l#s L'c#ci!#s al iici# ) al fial + la i
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5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
?
Fi?'*a 18, Va*iaci#s +if*cials %*#$+i# + l#s L'c#ci!#s ?*a'l#ci!#s )
a?*a'l#ci!#s.
5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
?:
c.1 Lif#ci!#s
En los resultados para linocitos (5igura - y ane$o - y /) se encontraron que el
promedio de los alores al inicio ueron para el
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5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)
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7eg&n el cuadro -/ el hgado en el ?-J de todos los casos es normal. Presentando
cierto cuadro congestio en el grupo +, y ++ e indicios de hepatomegalia (aumento del
tama0o del hgado) en el grupo ++ y +++ y +B y una rata del grupo +++ presentaba un hgadohipotrico.
En relacin a los pulmones se obsero que slo en el caso del grupo control se
encontraron animales con los pulmones normales en un 1J (/ muestras). En general los
pulmones presentaban ibrosis y hemorragia pulmonar en todos los grupos, incluido el
grupo control.
C'a+*# 2, Ca*ac!*(s!icas $ac*#sc%icas + l#s *?a#s + l#s ?*'%#s c# !*a!a$i!#
) l ?*'%# c#!*#l
*?a# Ca*ac!*(s!icas ac*#sc#%icas G*'%# I7 K 9:G*'%# II
7 K :G*'%# III
7 K :G*'%# IV
7 K 9:
70: 70: 70: 70:3(?a+# Aormal.
A%ongestio hemorrgico
ACepatomegala ligera
ACepatomegala marcada
ACipotrico
1 (8/J)
: (:?J)
AAA
AAA
AAA
1 (?-J)
: (:2J)
: (:2J)
AAA
AAA
1 (?-J)
AAA
AAA
: (:2J)
: (:2J)
1 (8/J)
AAA
AAA
: (:?J)
AAARi#s A ormales.
ACipotricos
A 7ignos hemorrgicos
4 (:J)
AAA
AAA
4 (84J)
: (:2J)
AAA
4 (84J)
AAA
: (:2J)
4 (:J)
AAA
AAAP'l$#s Aormales.
A5ibrosis pulmonar con presencia de
necrosis
A5ibrosis y hemorragia pulmonar
AAA
- (/2J)
AAA
2 (44J)
AAA
- (-8J)
AAA
1 (?-J)
AAA
AAA
AAA
? (:J)
/ (1J)
AAA
AAA
/ (1J)
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8?
5. Ti+# 3%>!ic#
7eg&n el "#dico %iruano *ntomo Patlogo 9aniel %arrera Palao (%"P Z
--43?), maniiesta que el estudio del hgado de todos los grupos (incluido el control) no
muestran ning&n tipo de alteracin histolgica estructural en relacin a to$icidad por la
ingesta alimentaria. En el cuadro -1 podemos apreciar los cambios histopatolgicos del
hgado de todos los grupos tratados y del control (grupo +B).
C'a+*# 2@, Ca$5i#s 6is!#%a!#l?ic#s +l 6(?a+# s?/ +#sis + c#c!*a+# +
%*#!(a + %#!a
Es!*'c!'*as Ca*ac!*(s!icas ac*#sc%icas G*'%# I7 K 9:G*'%# II
7 K :G*'%# III
7 K :G*'%# IV
7 K 9:70: 70: 70: 70:
Es!*'c!'*a T*a5c'la*
6%>!ica
A Preserada.
A 9a0ada.
:J
AAA
:J
AAA
:J
AAA
:J
AAAVas#s C!*# l#5'lilla* A %ongestios ligeramente
A o congestios
:J
AAA
:J
AAA
:J
AAA
:J
AAASi's#i+s 6%>!ic#s A %ongestios ligeramente
A o congestios
:J
AAA
:J
AAA
:J
AAA
:J
AAAEs%aci#s %#*!a A ormales.
A %on alteraciones
:J
AAA
:J
AAA
:J
AAA
:J
AAACaal(c'l#s 5ilia*s A ormales.
A %on alteraciones
:J
AAA
:J
AAA
:J
AAA
:J
AAA
En las 5iguras //*, //> y //% se obsera el teido heptico de aspecto normal derata del grupo + (9osis 1 mg=g) a dierentes aumentos. tese los l#5'lill#s 6%>!ic#s
7LB:que son descritos clsicamente como he$agonales, es decir, un polgono de seis lados,
es muy raro encontrar alguno que se ea con esta orma e$acta, lo que tenemos que hacer
es buscar en espacios abiertos la
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V. CONCLUSIONES
- 'a administracin del concentrado de protenas de pota (Dosidicus gigas) elaborado
en la 6*'" no caus alteracin histolgica estructural en el hgado ni en los
ri0ones.
- 'a 9'1 del concentrado de protena de pota elaborado en la 6*'" se encontr
por encima de - mgFg de peso corporal, caliicndose seg&n el 7istema
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:8
ANEO 1. INFORE DE LA PRUEBA PILOTO REALIZADA EN
RATAS Q RATONES
INTRODUCCION
El ensayo de to$icidad aguda que se realiz esta sueto a la dosis m$ima que
pueda soportar el animal y tambi#n la orma de administracin. E$istieron inconenientes
respecto a la preparacin de la solucin en base a concentrado de protena de pota a
administrar debido a su poca capacidad de solubilizacin en agua y suero isiolgico por lo
que se pudo e$perimentar, en tal sentido se procedi a preparar dosis ascendentes a las
concentraciones de :J y -J y se administro aleatoriamente a los animales de
e$perimentacin. En el presente ensayo no se encontr mortalidad debido al producto.
'a To$icidad aguda por lo general se deine como el cambio aderso que ocurren
inmediatamente o poco tiempo despu#s de una &nica o bree perodo de e$posicin a una
sustancia o sustancias o eectos adersos que ocurren dentro de un corto tiempo de
administracin de una dosis &nica de una sustancia o habida cuenta de dosis m<iples
dentro de las -2 horas.
O5!i
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::1
ANEO . RESULTADOS BIOUICOS Q 3EATOLGICOS FINALES 78= DAS TRATAIENTO:
Al5&"ina Creatinina TGP )5 )to Le&cocitos A5astona4os e"enta4os Monocitos E#sifil#s Basfil#s Lin6ocitosN7 Rata :inal :inal :inal :inal :inal :inal :inal :inal :inal :inal :inal :inal
1 ;.2 1.; 9.0 1.0 1.0 0.0 2;.0
2 ;.> 1.; 12.0 19.2 9;.0 >?00.0 1.0 29.0 0.0 0.0 0.0 >5.0
; ;.0 1.5 12.0 19.2 9;.0 ?>50.0 2.0 2;.0 1.0 0.0 0.0 >9.0
9 ;.5 1.2 11.0 1;.2 90.0 ? 1.2 1;.0 1;.2 90.0 ?>00.0 1.0 ;2.0 1.0 0.0 0.0 ==.0= 9.0 1.; ?.5 19.5 99.0 >900.0 5.0 22.0 >.0 0.0 0.0 ==.0
rome$io 8.9 1.8 10./ 18./ :(.0 ;00;.8 1.; 8:.; 1.< 0.( 0.0 =1.9
D. estn$ar 0.: 0.1 1.; 0.= 1.< /90.0 1.= 1/.; (.< 0.: 0.0 1/.:
1 ;.= 1.5 1>.0 15.? 9?.0 >.0 2.0 ;.0 0.0 ?1.0
2 ;.< 1.2 =.0 15.? 9?.0 >;.0
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5 9.5 1.9 1;.0 19.5 99.0 ?>00.0 0.0 2;.0 2.0 0.0 0.0 >>.0
= 9.0 1.; 12.0 1=.2 9.0 >500.0 1.0 1>.0 2.0 0.0 0.0 ?0.0
9 ;.< 1.; 10.0 19.2 9;.0 >=50.0 0.0 22.0 0.0 0.0 0.0 >?.0
5 ;.9 1.; 1;.0 1=.2 900.0 2.0 1>.0 0.0 0.0 0.0 ?1.0
5 9.0 1.5 12.0 15.? 9?.0 ?;00.0 ;.0 21.0 =.0 0.0 0.0 >0.0
= 9.0 1.; 10.0 19.2 9;.0 =550.0 0.0 ;;.0 2.0 0.0 0.0 =5.0
rome$io 8.; 1.( 10.8 19.= :?
(000">?
CONCENT
RADOPROTEICODEPOTA
BIOUIICOS
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::4
ANEO . INCREENTO DE PESO CORPORAL
N[ Ra!a Trat :\ da 6ltimo da XAXo (J): T: /.4 /?./ -/.-J
- T: -34.- /32. //.J
/ T: -?4.1 //3.: --.4J2 T: /-.8 /88.4 -8./J
1 T: -12.3 /--.2 -4.1J
4 T: -?2.1 /4/.2 /-.2J
? T: -:2.- -28.? :4.:J
8 T: -//.3 -4/.? :-.?J
PD!"E9+! 298.2 9. 2.809es estndar 2.@ @.8 .20
: T- /?.2 /4?.- :3.1J
- T- -32. /?/.: -4.3J/ T- -3.- /11.? --.4J
2 T- -8/.2 /43./ /./J
1 T- -1-.- -?4.2 3.4J
4 T- -23.3 -48.8 ?.4J
? T- --/.- -2:.2 8.-J
8 T- -/?. -?4.- :4.1J
PD!"E9+! 29.2 19.= 1F.09es estndar =.@ @@.1 F.0
: T/ -81.? //2./ :?.J
- T/ -4:. /1-./ /1.J/ T/ -33.? //4.: :-.:J
2 T/ -/.? -2/.4 1.4J
1 T/ -3. -/3.- :2.2J
4 T/ -22./ -8/.4 :4.:J
? T/ --2.4 -18.: :2.3J
8 T/ -:4.: -22.1 :/.:J
PD!"E9+! 29. 2F9.@ 19.09es estndar .= . F.0
: T2 /-.3 /?.4 --.2J
- T2 -32.8 /2?.3 :8.J
/ T2 /2-.8 2/1. -4.3J
2 T2 /1. /44.4 -.-J
1 T2 /:1.2 222. 2.8J
4 T2 /:4./ 221. 2.?J
? T2 -/3.3 -?:.: :/.J
8 T2 -2?./ -?8.4 :-.?J
PD!"E9+! 28@.9 98.8 2@.109es estndar @.1 98. 1
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