免疫诊断免疫治疗免疫预防

免疫学诊断 免疫学诊断

一、抗原或抗体的检测一、抗原或抗体的检测

二、淋巴细胞的测定二、淋巴细胞的测定

三、免疫学检测方法的应用三、免疫学检测方法的应用免疫学诊

免疫学诊

断断

（一）抗原抗体反应的原理

免疫学诊

免疫学诊

断断

一、抗原或抗体的检测一、抗原或抗体的检测

11 、抗原抗体反应的 特异性、抗原抗体反应的 特异性（（ 11 ）特异性：基于两 种分子间 ）特异性：基于两 种分子间 的结构互补性和亲和性。的结构互补性和亲和性。（（ 22 ）可逆性）可逆性（（ 33 ）适宜的条件：电解质、）适宜的条件：电解质、 pHpH 、、

温度等温度等

22 、抗原抗体反应的可见性、抗原抗体反应的可见性

抗原抗体按适当比例结合，抗原抗体按适当比例结合，形成肉眼可见的现象。形成肉眼可见的现象。

应 用应 用1 、利用已知抗原检测未知抗体（ 1 ）检测病原微生物的相应抗体以辅助诊断疾病： 伤寒病、流行性乙型脑炎、 AIDS 病等。

（ 2 ）检测自身抗体——诊断自身免疫病： SLE 、类风湿性关节炎等

2 、利用已知抗体检测未知抗原

（ 1 ）鉴定病原菌：诊断疾病

（ 2 ）检测肿瘤相关抗原：检测甲胎蛋白以诊断肝癌

（ 3 ）检测血型抗原、 HLA 抗原：鉴定血型，亲子鉴定

（ 4 ）检测药物半抗原： 确认运动员是否服用兴奋剂

（二） 抗原或抗体的检测方法

凝集反应沉淀反应补体参与的抗原抗体反应免疫标记技术

（一）（一）凝集反应（凝集反应（ agglutinatioagglutinationn ））

颗粒性抗原颗粒性抗原（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等）（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等）与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。

1 1 、直接凝集、直接凝集 (direct agglutination)(direct agglutination)

玻片凝集、试管凝集玻片凝集、试管凝集22 、间接凝集（、间接凝集（ indirect agglutinationindirect agglutination ）） 可溶性抗原包被在乳胶颗粒或红细胞表面，与相应 抗可溶性抗原包被在乳胶颗粒或红细胞表面，与相应 抗 体混合出现的凝集现象。体混合出现的凝集现象。33 、抗球蛋白试验（、抗球蛋白试验（ CoombsCoombs 试验）试验）

抗原与单价抗体（不完全抗体）结合不出现凝集块，再抗原与单价抗体（不完全抗体）结合不出现凝集块，再加入抗球蛋白后即形成凝集块。 加入抗球蛋白后即形成凝集块。 用于检测抗用于检测抗 RhRh 抗体以诊断新生儿溶血性贫血。抗体以诊断新生儿溶血性贫血。

乳胶颗粒乳胶颗粒

红细胞红细胞

类风湿因子检测类风湿因子检测妊娠试验妊娠试验

间接凝集间接凝集直接凝集直接凝集

（二）沉淀反应（（二）沉淀反应（ precipitationprecipitation ）） 可溶性抗原可溶性抗原（免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液（免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液等）与相应抗体结合， 形成不溶性免疫复合物，出现不透等）与相应抗体结合， 形成不溶性免疫复合物，出现不透明的沉淀物。多在半固体琼脂凝胶上进行，形成白色的沉明的沉淀物。多在半固体琼脂凝胶上进行，形成白色的沉淀。可分为单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验、免疫淀。可分为单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验、免疫电泳、免疫比浊法等。电泳、免疫比浊法等。

免疫比浊法：快速简便。免疫比浊法：快速简便。用于血清用于血清 IgGIgG 、、 IgAIgA 、、 II

gMgM 、 补体、 补体 C3C3 、、 C4C4 含含量测定量测定

（三）补体参与的抗原抗体反应（三）补体参与的抗原抗体反应11 、、 50 %50 % 补体溶血试验（补体溶血试验（ CH50CH50 测定） 测定） —— —— 血清总补体量测定血清总补体量测定

2 、补体结合试验 (complement fixation test) ：检测抗原或抗体。原理：用已知的指示系统检测试验系统是否结合补体进行诊断

试验原理？试验原理？

检测系统：待测样品检测系统：待测样品和已知抗原（或抗和已知抗原（或抗体）体）

指示系统：指示系统： SRBCSRBC 和溶血素和溶血素

溶血—阴性；不溶血—阳性溶血—阴性；不溶血—阳性

补体补体

用用标记物标记抗体或抗原标记物标记抗体或抗原进行抗原抗体反应借以提高免进行抗原抗体反应借以提高免疫学诊断的敏感性疫学诊断的敏感性

荧光素 ：荧光素 ：异硫氰酸荧光素（黄绿异硫氰酸荧光素（黄绿色荧光）、藻红蛋白、 罗丹明色荧光）、藻红蛋白、 罗丹明（红色荧光）（红色荧光）

放射性同位素：放射性同位素： 125125II 、、 131131II

酶：酶：辣根过氧化物辣根过氧化物酶、硷性磷酸酶酶、硷性磷酸酶

免疫荧光检测法（免疫荧光检测法（ IFAIFA ））放射免疫检测法（放射免疫检测法（ RIARIA ）） 酶免疫检测法（酶免疫检测法（ EIAEIA ））

（四）免疫标记技术（四）免疫标记技术

液相（液相（ ELISAELISA ）、固相（免疫组化技术））、固相（免疫组化技术）

直接荧光法直接荧光法间接荧光法间接荧光法

免疫荧光技术免疫荧光技术

间接法

双抗夹心法

竞争法

E: 辣根过氧化酶 HRP

S: 底物 二氨基联苯胺 DAB/邻苯胺

酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（ eenzyme nzyme llinked inked iimm

munomunossorbent orbent aassay, ssay, ELISAELISA 法法））

间接法

DAB

双抗夹心法

DAB

BAS-ELISABAS-ELISA 法法（（ biotin-avidin-systembiotin-avidin-system ，，生物素生物素 -- 抗生物抗生物素系统素系统 -ELISA-ELISA 法）：敏感性更高。用于抗原抗体以及法）：敏感性更高。用于抗原抗体以及 DDNANA 、、 RNARNA 的检测。的检测。

卵白及某些微生物中的蛋白质

灵敏度达灵敏度达 pgpg水平。常用于微量物质测定，如胰岛素、水平。常用于微量物质测定，如胰岛素、生长激素、甲状腺素、孕酮等激素、吗啡、地高辛等药生长激素、甲状腺素、孕酮等激素、吗啡、地高辛等药物以及物以及 IgEIgE 等。等。

放射免疫检测法（放射免疫检测法（ RIARIA ））

竞争法竞争法

能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量，常用于检测能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量，常用于检测多种病毒的抗体或抗原，如抗多种病毒的抗体或抗原，如抗 HIVHIV 抗体的检测。抗体的检测。

免疫印迹法免疫印迹法

二、淋巴细胞的测定二、淋巴细胞的测定（一）淋巴细胞的分离与类型鉴定11 、淋巴细胞的分离：外周血葡聚糖、淋巴细胞的分离：外周血葡聚糖 -- 泛影葡胺密度梯度离心泛影葡胺密度梯度离心法法

白膜层白膜层 单核细胞单核细胞

淋巴细胞淋巴细胞BB

TT

吸附分离吸附分离

过尼龙毛柱分离过尼龙毛柱分离

（ 1 ）间接免疫荧光法：鉴定细胞的群、亚群。用 CD3 、 CD4 、 CD8 单克隆抗体检测患者外周血 T 细胞表面相应抗原CD3

+ ——T 细胞，计算 T 细胞总数。 CD4

+ —— CD4+T 细胞，计算 CD4

+T 细胞数。 CD8

+——CD8+ T 细胞，计算 CD8

+亚群 T 细胞数 计算 CD4

+ / CD8+ 比例

正常人 PMB中 T细胞占 65~75% CD4

+ / CD8

+约为 1.5~2

22 、淋巴细胞的类型鉴定：淋巴细胞表面标记检测、 记数、淋巴细胞的类型鉴定：淋巴细胞表面标记检测、 记数

用 mIgM 、 mIgD 单克隆抗体检测患者外周血 B 细胞表面相应的抗原已检测 B细胞的数量

正常人外周血中 SmIg+ 细胞占 8~12%

（ 2 ）流式细胞术（ flow cytometry ）

（二）淋巴细胞功能测定（二）淋巴细胞功能测定

11 、、 TT 细胞功能测定细胞功能测定

（（ 11 ）） TT 细胞增殖试验（淋转）细胞增殖试验（淋转）：丝裂原、抗：丝裂原、抗 CD3CD3 单克隆抗单克隆抗体体

等能非特异地激活等能非特异地激活 TT 细胞，使之发生转化增殖，计算细胞，使之发生转化增殖，计算淋巴母细胞转化率（正常值淋巴母细胞转化率（正常值 65~80%65~80% ） 。） 。

① ①形态学观察法形态学观察法

② ②33H-TdRH-TdR渗入法：用液体闪烁仪测定样品的渗入法：用液体闪烁仪测定样品的 ββ 射线放射活射线放射活性性

③ ③MTTMTT 法法（（ 22 ）淋巴细胞介导的细胞毒试验（）淋巴细胞介导的细胞毒试验（ LMCLMC ））

—— —— 检测检测 CTLCTL 、、 NKNK 、 、 LAKLAK 、、 TILTIL 细胞杀伤靶细胞的功细胞杀伤靶细胞的功能能

（ 2 ）抗体形成细胞测定—— 溶血空斑试验 （ hemolytic forming cell assay ， HFC ）计算 HFU/ml

22 、、 BB 细胞功能测定细胞功能测定（ 1 ） B 细胞增殖试验： LPSLPS 、、 SPASPA刺激，检查抗体形成刺激，检查抗体形成细胞细胞

的数目的数目

可用于鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病可用于鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功能。状态的细胞免疫功能。 IL-2 、 IL-2R 、 rIFN 、 TNF 等检测。

①①免疫学方法：免疫学方法： ELISAELISA 、、 RIARIA 等。等。

② ②细胞生物学方法细胞生物学方法

③ ③分子生物学方法，如聚合酶链反应（分子生物学方法，如聚合酶链反应（ PCRPCR ）法等）法等

33 、细胞因子检测、细胞因子检测

44 、体内免疫细胞功能测定：皮肤试验、体内免疫细胞功能测定：皮肤试验（（ 11 ）迟发型超敏反应：）迟发型超敏反应：旧结核菌素试验（ 旧结核菌素试验（ OTOT 试验 ） 试验 ）

皮试（皮试（ ++ ）——有一定的细胞免疫能力）——有一定的细胞免疫能力

皮试（—）——细胞免疫功能缺损皮试（—）——细胞免疫功能缺损

（（ 22 ）速发型超敏反应：青霉素皮试、 异种血清皮试）速发型超敏反应：青霉素皮试、 异种血清皮试

免疫治疗免疫治疗 (immunotherapy) 针对机体低下或亢进的免疫状态，人为地针对机体低下或亢进的免疫状态，人为地增强或抑制增强或抑制机体的免疫功能 以达到治疗疾病机体的免疫功能 以达到治疗疾病的治疗方法称之。的治疗方法称之。

免疫调节（免疫调节（ immunomodulationimmunomodulation ）） 利用物理、化学和生物学的手段来调节机体的免利用物理、化学和生物学的手段来调节机体的免

疫功能，使原有的免疫功能增强或减弱。疫功能，使原有的免疫功能增强或减弱。

免疫重建免疫重建 (immunoreconstitution(immunoreconstitution))

将免疫功能正常个体的造血干细胞或淋巴细胞移植将免疫功能正常个体的造血干细胞或淋巴细胞移植给患有免疫功能缺陷的个体，使后者的免疫功能全部给患有免疫功能缺陷的个体，使后者的免疫功能全部或部分得到恢复。或部分得到恢复。

一、免疫增强疗法和免疫抑制疗法一、免疫增强疗法和免疫抑制疗法

三、主动免疫治疗（三、主动免疫治疗（ active immunotherapactive immunotherap

yy ）和被动免疫治疗（）和被动免疫治疗（ passive immunotherappassive immunotherap

yy ））

二、特异性免疫治疗和非特异性免疫治疗二、特异性免疫治疗和非特异性免疫治疗

（一）免疫增强剂（一）免疫增强剂化学制剂：化学制剂： 11 、左旋咪唑 、左旋咪唑

22 、西咪替丁 、西咪替丁

微生物制剂：微生物制剂： 11 、卡介苗（、卡介苗（ BCGBCG ） ） 22 、短小棒状杆菌 、短小棒状杆菌 33 、微生物提取物 、微生物提取物

中药制剂：中药制剂： 黄芪、人参、 黄芪、人参、

枸杞子等枸杞子等

免疫增强剂与免疫抑制剂免疫增强剂与免疫抑制剂

免疫因子：免疫因子： 11 、转移因子、转移因子 22 、免疫核糖核酸、免疫核糖核酸 33 、胸腺肽、胸腺肽

适应症适应症：免疫功能低下的患者 ：免疫功能低下的患者 （（ 11 ）恶性肿瘤）恶性肿瘤 （（ 22 ）免疫缺陷病 ）免疫缺陷病 （（ 33 ）传染病）传染病

副作用副作用：较轻：较轻

二、 免疫抑制剂

化学制剂化学制剂11 、烷化剂：环磷酰胺、烷化剂：环磷酰胺22 、抗代谢药：激素：糖皮质激素、抗代谢药：激素：糖皮质激素真菌代谢产物真菌代谢产物11 、 环孢素、 环孢素 AA ：对：对 TT ，尤其是，尤其是 THTH 有较好的选择性抑制作用有较好的选择性抑制作用22 、、 FK-506FK-506 ：其作用强于环孢素：其作用强于环孢素 A10-100A10-100 倍，且与环孢素倍，且与环孢素 AA

有明显的协同作用。 有明显的协同作用。 中药及其有效成分中药及其有效成分雷公藤多甙雷公藤多甙

免疫抑制药物的适应症和副作用

适应症：适应症：免疫功能过高引起机体损害的患者免疫功能过高引起机体损害的患者 11 、抗移植排斥、抗移植排斥 22 、超敏反应性疾病：激素、超敏反应性疾病：激素 33 、自身免疫病：激素、雷公藤多甙、自身免疫病：激素、雷公藤多甙 44 、感染性炎症：激素、感染性炎症：激素

副作用：副作用：明显明显 ， ，主要是骨髓抑制、肝肾毒性等 主要是骨髓抑制、肝肾毒性等 其抑制作用是非特异性的，长期应用可导致：继其抑制作用是非特异性的，长期应用可导致：继 发性免疫缺陷 、 严重感染、 肿瘤 发性免疫缺陷 、 严重感染、 肿瘤

抗体为基础的免疫治疗抗体为基础的免疫治疗一、免疫血清一、免疫血清抗毒素血清、胎盘（丙种）球蛋白、抗菌免疫血清、抗抗毒素血清、胎盘（丙种）球蛋白、抗菌免疫血清、抗病毒免疫血清、抗淋巴细胞丙种球蛋白等病毒免疫血清、抗淋巴细胞丙种球蛋白等

二、单克隆抗体（二、单克隆抗体（ mAbmAb ）：）：用于靶向治疗等。用于靶向治疗等。

三、基因工程抗体：降低抗体的免疫原性三、基因工程抗体：降低抗体的免疫原性嵌合抗体、、人源化抗体、单链抗体、双价抗体、双特嵌合抗体、、人源化抗体、单链抗体、双价抗体、双特异性抗体等异性抗体等

抗原为基础的免疫治疗抗原为基础的免疫治疗细胞因子及其拮抗剂为基础的免疫治疗细胞因子及其拮抗剂为基础的免疫治疗

LAKLAK （（ lymphokine activated killer cellslymphokine activated killer cells ）细胞—）细胞———淋巴因淋巴因子活化的杀伤细胞子活化的杀伤细胞。是将外周血淋巴细胞在体外经过。是将外周血淋巴细胞在体外经过 IL-2IL-2培培养后诱导产生的一种新型的杀伤细胞，具有更强的杀瘤特性。养后诱导产生的一种新型的杀伤细胞，具有更强的杀瘤特性。其杀伤肿瘤细胞不需抗原致敏且无其杀伤肿瘤细胞不需抗原致敏且无 MHCMHC限制性。主要为限制性。主要为 NN

KK 细胞细胞

TIL(tumorinfiltrating lymphocytes)TIL(tumorinfiltrating lymphocytes) 细胞细胞————肿瘤侵润淋巴肿瘤侵润淋巴细胞细胞。是从实体瘤组织中分离得到的，经体外。是从实体瘤组织中分离得到的，经体外 IL-2IL-2培养后培养后获得比获得比 LAKLAK 细胞更强的杀伤活性。细胞更强的杀伤活性。

细胞为基础的免疫治疗细胞为基础的免疫治疗

疫苗 ——应用微生物制备的具有免疫原性的物质。包括包括灭活疫苗（死疫苗）和减毒活疫苗。如 麻疹疫苗，脊灭活疫苗（死疫苗）和减毒活疫苗。如 麻疹疫苗，脊髓灰质炎疫苗，乙肝疫苗等。髓灰质炎疫苗，乙肝疫苗等。

类毒素——将细菌毒素用甲醛减毒后制备的具有免疫 原性的物质。如喉类毒素，破伤风类毒素。

（二）人工被动免疫（ artificial passive immunization ）——是给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞因子等制剂，以治疗或紧急预防感染的措施。如抗毒素、人免疫球蛋白制剂、细胞因子制剂、单抗制剂等。

（一）人工主动免疫（ artificial active immunization ）——用疫苗、类毒素接种机体，使之产生特异性的免疫，从而预防感染的措施。

一、人工免疫一、人工免疫

（三）计划免疫

免疫预防免疫预防

二、新型疫苗的发展二、新型疫苗的发展三、疫苗的应用三、疫苗的应用

11 、抗感染、抗感染

22 、抗肿瘤、抗肿瘤

33 、计划生育、计划生育

44 、防止免疫病理损伤、防止免疫病理损伤

复 习 题复 习 题一、名词解释 凝集反应、沉淀反应、 ELISA 、人工主动免疫、 人工被动免疫、类毒素、 LAK 细胞、 TIL 细胞

二、问答题 1 、简述抗原抗体反应的特点。 2 、何谓免疫标记技术？简述三大免疫标记技术 的原理和应用。 3 、试比较人工主动免疫与人工被动免疫。