BAB 1. PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
1.2 Tujuan
BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Pengertian Susu
2.2 Ciri Morfologis Dan Fisiologis Bakteri Yang Ada Dalam Yakult
Dan Yoghurt
2.3 Media MRSA Beserta Komposisinya
2.4 Karakteristik dan Komposisi Masing-Masing Bahan
BAB 3. METODOLOGI PRAKTIKUM
3.1 Alat dan Bahan3.1.1 Alat1. Beaker glass (BG) (500 ml, 250
ml, 100 ml, 50 ml)2. Gelas ukur3. Tabung reaksi4. Tabung reaksi
ulir5. Rak tabung rekasi6. Cawan petri7. Gelas objek8.
Spatula/batang pengaduk9. Jarum ose10. Pipet tetes11. Bulb pipet12.
Bunsen13. Korek api14. Hotplate15. Botol semprot16. Baskom 17.
Alumunium foil18. Mikroskop 19. Inkubator20. Vortex21. kamera3.1.2
Bahan1. Media MRSB + Agar = MRSA2. Media MRSB3. Akuades 4.
Yoghurt5. Yakult6. Alkohol 70% dan 96%7. Larutan kristal violet8.
Larutan mordan9. Larutan safranin10. Minyak imersi11. Larutan
H2O212. Mikroba yang telah diisolasi13. Biakan14. Susu segar15.
Starter16. Label 17. Kapas steril18. tisu
3.2 Skema Kerja3.2.1 Pembuatan Media MRSAMRSBMenimbang sesuai
kebutuhanMemasukkan dalam beaker glass Menambahkan akuades 60
mlMengaduk hingga homogenMenambahkan agar (sehingga menjadi
MRSA)Memanaskan tidak sampai mendidihMengaduk hingga homogen
Menuang dalam wadah(cawan petri dan tabung reaksi)
5 ml (4x)Media agar miring
10 ml (4x)Media cawanAutoklaf 121OC selama 15 menit
3.2.2 IsolasiMRSAMenuang ke dalam cawan petriMendiamkan hingga
memadatMenambahkan sampel 1 g/mlInkubasi 37OC selama 48
jamPengamatan
3.2.3 InokulasiMRSAMenuang ke dalam cawan petriMendiamkan hingga
memadatmembuat 4 ruang dengan spidol untuk penggoresan
kuadranMenambahkan 1 ose biakan dengan penggoresan kuadranInkubasi
37OC, selama 48 jam
3.2.4 Pewarnaan Gram (Identifikasi Mikroba)
3.2.5 Uji KatalaseMensterilkan gelas objekMeletakkan biakan
yoghurt dan yakult ( 1 ose)Meneteskan larutan H2O2 ( 1 tetes) pada
kedua biakan (yoghurt dan yakult)pengamatan
3.2.6 Pembuatan Starter YoghurtSusu segar 20 mlPemanasan
85OC-90OCPendinginan hingga 45OCMenambahkan inokulum ( 2-3
inokulum)Penutupan dengan alumunium foilInkubasi 37OC, 24 jam
3.2.7 Pembuatan Starter Yakult
3.2.8 Produksi YoghurtSusu segar 200 mlPemanasan
85OC-90OCPendinginan hingga 45OCMenambahkan starter (jumlah sesuai
perlakuan kelompok masing-masing)Inkubasi 37OC, 4-6 jamKel.1 : 1
mlKel.2 : 2 mlKel.3 : 3 mlKel.4 : 4 ml
3.2.9 Produksi Yakult
BAB 4. HASIL PENGAMATAN DAN PERHITUNGAN
4.1 Hasil Pengamatan4.1.1 YoghurtTabel 1. Pengamatan inkubasi 6
jamKel.WarnaAromaViskositasPembentukan EmulsiRasapH
1+ ++ + + ++ + + + ++ + + + ++ + + + +5
2+ +++ + + ++ + + ++ + + +5
3+ + + ++ + ++ + ++ + ++ + +4
4+ + + ++ ++ ++ ++ +5
*)Ket: semakin banyak (+), warna semakin pekat; aroma semakin
asam; viskositas semakin kental; pembentukan emulsi semakin tebal;
dan rasa semakin asam.
4.1.2 YakultTabel 2. Pengamatan I (inkubasi 4
jam)Kel.WarnaAromaViskositasPembentukan EmulsipH
1+ + ++++ + +5
2+ ++ ++ ++ +5,5
3+ +++ ++ +6
4+ +++ + + +6
*)Ket: semakin banyak (+), warna semakin pekat; aroma semakin
asam; viskositas semakin kental; dan pembentukan emulsi semakin
tebal.
Tabel 3. Pengamatan II (inkubasi 5
jam)Kel.WarnaAromaViskositasPembentukan EmulsipH
1+ + + +++ ++ + + +4,5
2+ + ++ ++ ++ + +5,5
3+ + + + ++ + ++ +5,5
4+ ++ ++ + ++ +5,5
*)Ket: semakin banyak (+), warna semakin pekat; aroma semakin
asam; viskositas semakin kental; dan pembentukan emulsi semakin
tebal.
Tabel 4. Pengamatan III (inkubasi 6
jam)Kel.WarnaAromaViskositasPembentukan EmulsipH
1+ + + + ++ ++ + ++ + +6
2+ + + ++ + ++ ++ + + +5
3+ + ++ + ++ + + ++ + +5,5
4+ + ++ + ++ + + + + +5
*)Ket: semakin banyak (+), warna semakin pekat; aroma semakin
asam; viskositas semakin kental; dan pembentukan emulsi semakin
tebal.
4.2 Hasil PerhitunganPada praktikum produksi susu fermentasi
(yoghurt dan yakult) tidak ada hasil perhitungan.
BAB 5. PEMBAHASAN
5.1 Skema Kerja dan Fungsi Perlakuan5.1.1 Pembuatan MediaPada
produksi sufer diperlukan mikroba khusus, yaitu Lactobacillus
bulgaricus, Streptococcus thermophillus, dan Lactobacillus casei.
Untuk mendapatkannya perlu mengembangbiakkan mikroba tersebut.
Dengan jalan membuat media terlebih dahulu sebagai media
pertumbuhan dan perkembangbiakan. Untuk mikroba yang telah
disebutkan media yang cocok adalah MRSA. Awalnya disediakan agar
sesuai. Lalu dimasukkan ke dalam beaker glass (BG) yang telah
berisi akuades 60 ml dan diaduk hingga homogen, agar tidak terjadi
penggumpalan. Kemudian ditambahkan MRSB dan diaduk hingga homogen,
agar nutrisi yang ada pada MRSB menyebar secara merata dan mikroba
dapat tumbuh baik disemua bagian. Penambahan agar ini menyebabkan
media MRSB menjadi media MRSA. Diaduk tidak sampai mendidih.
Kemudian dituangkan pada delapan tabung reaksi dengan ketentuan 5
ml (4 tabung) sebagai agar miring dan 10 ml (4 tabung) sebagai
media cawan. Penuangan ini dilakukan secara aseptis, agar tidak ada
kontaminasi pada media. Setelah itu, diberi label sesuai perlakuan
dan diautoklaf pada suhu 121OC selama 15 menit untuk membunuh semua
mikroba pengganggu (kontaminan).5.1.2 IsolasiPada saat isolasi
inilah mulai dikembangkan mikroba yang dibutuhkan sesuai dengan
media yang telah dibuat. Langkah awal adalah menuang media MRSA ke
dalam cawan petri lalu didiamkan hingga memadat, untuk memudahkan
penggoresan. Diberi label sesuai dengan perlakuan masing-masing.
Pada saat penuangan dilakukan dekat bunsen agar aseptis, sehingga
tidak ada kontaminasi. Menambahkan sampel yang diambil dari susu
fermentasi (yoghurt dan yakult) dengan cara penggoresan sinambung
(jarum ose dipanaskan hingga berpijar pada bunsen terlebih dahulu,
agar aseptis). Penggorsan ini berguna untuk mendapatkan kultur
murni dari mikroba yang akan dibiakkan. Terakhir diinkubasi pada
suhu 37OC selama 48 jam agar mikroba tumbuh dengan baik.
5.1.3 InokulasiFungsi dari inokulasi ini untuk mendapatkan
kultur murni dari mikroba yang telah diisolasi. Langkah awal yang
perlu dilakukan adalah menyiapkan media MRSA yang telah dituang
pada cawan petri baru yang digunakan sebagai wadah inokulasi.
Membuat 4 ruang dengan spidol untuk memudahkan dalam penggoresan
kuadran. Lalu mengambil mikroba yang telah diisolasi dan
dipindahkan pada media baru (inokulasi) secara aseptis, supaya
tidak terjadi kontaminasi. Fungsi dari penggoresan kuadran ini
adalah supaya mikroba yang dibiakkan tidak tumbuh menumpuk dan
mudah dalam mendaptkan kultur murninya. Kemudian diinkubasi pada
suhu 37OC selama 48 jam dengan cara membalik cawan petri, sehingga
uap air dari penguapan tidak menetes pada mikroba yang dibiakkan
.5.1.4 Pewarnaan Gram (identifikasi mikroba)Fungsi dari pewarnaan
gram ini adalah untuk memastikan mikroba yang kita biakkan sesuai
dengan kebutuhan produksi susu fermentasi (yoghurt dan yakult).
Mula-mula gelas objek disterilkan dengan alkohol 70% lalu dikering
anginkan, jika dilap akan terjadi kontaminasi. Lalu ditambahkan 1
tetes akuades sebagai media biakan, kemudian ditambahkan 1 ose
inokulum pada 1 tetes akudes tersebut. Setelah itu, difiksasi untuk
mematikan dan melekatkan biakan pada gelas objek tanpa merusak sel
biakan. Fiksasi dilakukan dengan melewatkan geas objek berisi
biakan di atas api (bunsen yang menyala). Ditetesi 2-3 tetes
kristal violet (KV) pada sampel (biakan yang telah difiksasi)
sebagai warna primer dan didiamkan 1 menit agar benar-benar meresap
pada dinding sel sampel. Cuci dengan air mengalir untuk
menghilangkan sisa KV dan kering anginkan. Tambahkan 2-3 tetes
mordan pada sampel sebagai penguat warna primer dan didiamkan 1
menit. Cuci dengan air mengalir untuk menghilangkan sisa mordan dan
kering anginkan. Tambahkan 2-3 tetes alkohol 96% pada sampel
sebagai perusak permeabilitas dinding sel sampel, hal ini dapat
mengakibatkan dinding sel sampel tetap berwarna ungu atau
kehilangan warna ungu dan didiamkan 1 menit agar reaksinya
maksimal. Cuci dengan air mengalir untuk menghilangkan sisa alkohol
96% yang akan mengganggu proses selanjutnya dan kering anginkan.
Ditambahkan 2-3 tetes safranin pada sampel sebagai warna
saingan/tandingan warna primer dan didiamkan 1 menit agar bereaksi
dengan maksimal. Cuci dengan air mengalir untuk menghilangkan
kelebihan zat safranin dan kering anginkan. Ketika akan dilakukan
pengamatan dengan mikroskop untuk memastikan morfologi dari sampel,
perlu ditambahkan minyak atsiri untuk memudahkan dalam
pengamatan.5.1.5 Uji KatalaseFungsi dari uji katalase ini adalah
untuk mengetahui salah satu sifat fisiologis dari sampel
sebelumnya. Sehingga, didapatkan data yang komplit untuk
mengidentifikasi jenis mikroba yang telah dibiakkan. Langkah awal
adalah menyiapkan gelas objek yang telah disterilkan. Lalu
ditambahkan satu ose biakan susu fermentasi. Diteteskan larutan
H2O2 pada masing-masing biakan. Larutan ini berguna untuk
mengetahui produksi enzim katalase dari biakan. Apabila
menghasilkan/memproduksi enzim katalase, maka akan terjadi
gelembung-gelembung udara. Oleh karena itu, setelah dilakukan
penetesan larutan H2O2 dilakukan pengamatan dan dicatat hasil yang
didaptkan. Digunakan sebagai data fisiologis biakan yang akan
diidentifikasi.5.1.6 Pembuatan Starter YoghurtSetelah dilakukan
identifikasi dan didapatkan bahwa hasilnya positif (mikroba susu
fermentasi), maka akan dilakukan pembuatan starter. Pada awalnya
menyiapkan susu segar sebanyak 20 ml. Kemudian dipanaskan hingga
85OC-90OC, agar tidak ada mikroba yang hidup dan mengganggu proses
pembuatan starter. Setelah dipanaskan lalu didinginkan hingga suhu
45OC, supaya mikroba yang digunakan tidak mati karena suhu yang
maksimal/tidak sesuai. Kemudian ditambahkan 2-3 inokulum sebagai
biakan pada starter. Ditutup dengan alumunium foil, sehingga proses
di dalamnya anaerob. Diinkubasi pada suhu 37OC selama 24 jam agar
biakan dapat tumbuh dengan baik dan menghasilkan starter yang
baik.5.1.7 Pembuatan Starter YakultPada pembuatan starter yakult,
biakan yang telah diisolasi pada media agar miring diambil 1 ose
untuk diinokulasi pada media MRSB 10 ml. Kemudian diinkubasi pada
suhu 37OC selama 20 jam, agar biakan dapat tumbuh lebih dari yang
ditambahkan. Setelah itu, hasil dari inokulasi tadi diambil
masing-masing 1 ml untuk ditambahkan pada 4 tabung reaksi berisi
masing-masing susu segar (sebagai media starter) 9 ml. Terakhir
diinkubasi pada suhu 37OC selama 24 jam. Sehingga, starter memiliki
jumlah mikroba lebih banyak dan dapat digunakan untuk produksi.
Perlu diingat semua kegiatan di atas dilakukan dengan perlakuan
aseptis (dekat bunsen), agar tidak terjadi kontaminasi oleh mikroba
yang tidak diinginkan.5.1.8 Produksi YoghurtSetelah dibuat starter
yoghurt dan didapatkan hasilnya, maka siap dilakukan produksi
yoghurt. Langkah awal adalah memanaskan/pasteurisasi susu segar
hingga suhu 85OC-90OC, sehingga tidak ada mikroba pengganggu yang
hidup. Kemudian didinginkan hingga suhu 45OC, supaya mikroba yang
digunakan tidak mati karena suhu yang maksimal/tidak sesuai.
Ditambahkan starter sesuai perlakuan kelompok masing-masing (kel.1
:1 ml; kel.2 :2 ml; kel.3 :3 ml; dan kel.4 :4 ml) sebagai bahan
yang akan mengubah susu menjadi yoghurt. Perbedaan perlakuan ini
untuk mengetahui berapa jumlah penambahan starter yang baik untuk
menghasilkan yoghurt yang optimal. Setelah itu, diinkubasi pada
suhu 37OC selam 4-6 jam. Kemudian diamati, untuk mengetahui hasil
yoghurt yang terbaik.5.1.9 Produksi YakultPada produksi yakult,
perlakuan yang dilakukan memiliki prinsip yang sama dengan
pengenceran bertingkat. Pada kelompok 1 starter masing-masing
sebanyak 1 ml ditambahkan pada 4 tabung reaksi yang masing-masing
berisi 9 ml susu segar (bahan utamayakult). Kemudian divortex agar
starter menyebar secara merata dan semua bagian susu digunakan
dengan baik dan maksimal. Setelah itu, kelompok 2 menggunakan
starter dari produksi yakult kelompok 1. Diambil masing-masing
sebanyak 1 ml dan dimasukkan ke dalam 4 tabung reaksi berisi
masing-masing 9 ml susu segar, kemudian divortex. Starter kelompok
3 menggunakan produk yakult kelompok 2. Diambil masing-masing
sebanyak 1 ml dan dimasukkan ke dalam 4 tabung reaksi yang
masing-masing berisi 9 ml susu segar, kemudian divortex. Pada
kelompok 4 juga sama seperti sebelumnya, starter menggunakan produk
yakult kelompok 3. Diambil masing-masing sebanyak 1 ml dan
dimasukkan ke dalam 3 tabung reaksi yang masing-masing berisi 9 ml
susu segar, kemudian divortex. Setelah, semuanya siap lalu
siinkubasi pada suhu 37OC selam 4-6 jam. Kemudian dilakukan
pengamatan secara bertahap pada jam ke-4, 5, dan 6.
5.2 Reaksi Kimia5.2.1 Yoghurt
5.2.2 Yakult
5.3 Analisa Data5.3.1 Yoghurt
5.3.2 Yakult
BAB 6. PENUTUP
6.1 KesimpulanSetelah dilakukan praktikum dapat diambil
kesimpulan bahwa, pada produksi awal susu fermentasi diperlukan
persiapan yang matang. Pembuatan media yang merupakan awal dari
produksi perlu diperhatikan secara teliti. Karena tidak dapat
menggunakan media yang sembarangan. Proses isolasi dan inokulasi
merupakan tahap didapatkannya mikroba yang akan membantu dalam
produksi susu fermentasi (yoghurt dan yakult). Kemudian dilakukan
pembuatan starter sebagai peremajaan mikroba yang telah didapat.
Sehingga, dalam produksinya akan lebih baik. Karena mikroba yang
digunakan dalam jumlah besar.
6.2 Saran1. Bahan yang digunakan dalam praktikum diusahakan
tepat, agar tidak terjadi penyimpangan (e.g. pewarnaan kapang).2.
Ditetapkan tata tertib pada saat praktikum berjalan (e.g. tidak
boleh ramai, toleransi waktu keterlambatan), serta pemberian sanksi
bagi yang melanggar tata tertib.3. Tetap dibuat suasan yang
menyenangkan dan kondusif (seperti praktikum kali ini, praktikum
bioproses 2014).4. Pemberian tuntunan penulisan aporan secara
tertulis/diketik.
DAFTAR PUSTAKA
LAMPIRAN
