Manual JICA de Tinción Ing. Taira

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Manual para tinción de citologías

Text of Manual JICA de Tinción Ing. Taira

  • LA TINCIN DE PAPANICOLAOU

    Bases y prctica

    JICA

    Yoshikuni Taira

    Dr. Pablo Anaya Rivera Secretario de Salud y Director General de los

    Servicios de Salud de Veracruz Dra. Minerva Junco Gonzlez

    Subsecretaria de Salud Dra. Irasema A. Guerrero Lagunes

    Directora de Salud de Pblica Dr. Alejandro Escobar Mesa

    Subdirector de Prevencin y Control de Enfermedades

    Dra. Rosa Aguilar y Meza Jefa del Departamento de Salud Reproductiva

    Dra. Martha Lilia Flores Guzmn Coordinadora Estatal del Programa de Salud de la

    Mujer

  • PRIMERO

    El diagnstico citolgico de alta confiabilidad se puede lograr con la

    observacin exacta de las muestras

    elaboradas adecuadamente y con la

    interpretacin correcta.

    Se logra obtener una muestra de buena calidad y con uniformidad,

    realizando el procedimiento de tincin

    adecuado.

    H FALTA DE TRANSPARENCIA

    Posibles causas

    1. Deshidratacin inadecuada el alcohol est mezclado con agua

    2. Aclaramiento(xilol de baja pureza Material inadecuado para el montaje.no es transparente

  • PRINCIPIO DE LA TINCIN

    3 REGLAS DE LA TINCINDE PAPANICOLAOU

    1) Afinididad qumica.

    Unificacion de los colorantes y el radical funcional quimico en

    componentes celulares.

    Ejemplo enlace ionico del quelato de hematin aluminio y radical fosforico del ADN.

    2) Concentracin.

    Densidad del radical funcional quimico en componente celular

    con el cual une con los colorantes.

    3) Permeabilidad.

    Relacion del tamao de las moleculas de los colorantes y

    densidad de la estructura celular.

    EjemploDiferentes tamaos de las moleculas de los colorantes acidos (OG, EosinY, Verde Claro), penetran en

    diferentes estructuras celulares y logran teir.

    E LA TINCIN INADECUADA DEL CITOPLASMA. ROSADONARANJA TENUE

    Posibles causas

    1. Sequedad antes de la fijacin.

    2. Tiempo Insuficiente para la fijacin.

    3. Deficiencia del lquido de EA-50.

  • PRINCIPIO DE LA TINCIN DEL NCLEO

    La cromatina es una sustancia nuclear que se

    tie de obscuro con el colorante bsico

    (hematoxilina).

    Cromatina est constituda por finas cadenas de cido desoxirribonucleico unidas a una protena

    base, por lo general histona; contiene la protena

    no- histona y poca cantidad de ARN.

    D TINCIN INADECUADA DEL CITOPLASMA (OSCURA).

    Posibles causas

    1. Exceso del tiempo de tincin.

    2. Falta de fraccionamiento

    3. Concentracin de los lquidos de tincin.

  • CAMBIO DEL NCLEO POR LA FIJACIN

    Por la fijacin del ncleo, hay cambio en la histona del

    mismo, producindose la disolucin del radical fosfrico del

    ADN, el cual tiene carga negativa.

    Lograr la tincin por la unin del ADN con el radical fosfrico y con hematoxilina().

    TINCION DEL NUCLEO

    La hematixilina tiene color transparente o blanco, se oxida

    por medio de un oxidante quimico para unirse fuertemente

    con los componentes vitales.

    Si se agrega aluminio el cual es mordente, forma el quelato y hace enlace ionico con la parte que tiene carga negativa

    de los componentes vitales, por consiguiente tie a esa

    parte con azul morado a azul.

  • ELPHDE LA HEMATOXILINA Y LA TINCIN

    LOS RADICALES FUNCIONALES ANINICOS.

    1. El radical cido sulfricoSOmucosidad, cartlago, etc. 2. El radical fosfricoPOncleo, etc. 3. El radical carboxiloCOO citoplasma, etc.

    Dependiendo del pH de la solucion de hematoxilina, cambia la

    disolucion del radical funcional del anion.

    El radical funcional del anion de la celula, el cual se une con la

    hematoxilina, esta mostrado en la diapositiva izquierda. Hasta

    pH 3.0, la hematoxilina se une con los tres radicales funcionales

    y tie en forma general.

    La hematoxilina de Harris de pH 2.7 2.8 se une con el nucleo

    que contiene el radical fosforico y con el citoplasma que contiene

    el radical carboxilo( COO), por esa razon, es necesario hacer el

    fraccionamiento.

    C TINCIN DEFECTOSA DEL CITOPLASMA (TENUE

    Posibles causas

    1. Lquidos de tincin deficientes.

    2. Deterioro del lquido de tincin por dilucin.

    3. Tiempo insuficiente de tincin.

    4. Exceso de fraccionamiento.

    5. Deshidratacin y aclaramiento inadecuado.

  • CLASE DE HEMATOXILINA Y LA

    TINCIN

    1. Tincin progresiva la hematoxilina de contenido de la

    hematoxilina

    2. Tincin regresiva la hematoxilina de r contenido de la hematoxilina

    Despus de teir con la hematoxilina, el ncleo y el citoplasma se

    tien conjuntamente.

    Comparando con el numero absoluto del radical anion de la celula,

    con una mayor cantidad de colorante de hematoxilina, se tie

    mas fuerte el nucleo, si embargo, al mismo tiempo, tie en forma

    general.

    La utilizacion de la hematoxilina de Harris o Gill de alta

    concentracion en la citologia , es para uniformizar el grado de

    tincion del extendido el cual no es uniforme, si no que presenta areas gruesas. Caso particular en la citologia. Si se utiliza el

    liquido colorante con menos densidad (Mayer), dependiendo del

    extendido de la laminilla, se tie irregularmente.

    B LA TINCIN DEL NCLEO ES FUERTE Y LA ESTRUCTURA DEL NCLEO QUEDA

    AMBIGUA.

    POSIBLES CAUSAS

    1. Uso de alcohol de alta concentracin.

    2. Exceso de tiempo para la tincin del ncleo.

    3. Falta de fraccionamiento.

  • PRINCIPIO DEL FRACCIONAMIENTO

    Despues de la tincion con hematoxilina, el nucleo y el

    citoplasma estan teidos conjuntamente. Despues de teir

    fuerte a toda la celula se sumerge en el acido(H )clohidrico, el

    quelato de hematin aluminio que se unio con el citoplasma, se

    intercambia con el ion hidrogeno y por este resultado, se

    decolora la parte del citoplasma. La diapositiva seala que

    esta teido conjuntamente.

    se seala que esta sumergida en el liquido para fraccionar. Se

    seala el intercambio del quelato de hematin aluminio que se

    unio con el citoplasma, con el ion hidrogeno. Sin embargo, hay

    que tener cuidado porque si se deja mucho tiempo el quelato

    que se ha unido con el nucleo, tambien intercambia con el ion

    hidrogeno y lo decolora. Dependiendo de la densidad del

    alcohol de acido clorhidrico, cambia tambien la intensidad del

    fraccionamiento. El liquido de hematoxilina es acido, por esa

    razon, si se deja como esta, las partes teidas cambian a color

    pardo rojo y ademas tienden a decolorarse.

    A LA TINCIN DEL NCLEO ES TENUE

    POSIBLES CAUSAS 1. Lquido de tincin deficiente.

    2. Sequedad antes de la fijacin.

    3. Tiempo insuficiente para la fijacin.

    4. Tiempo insuficiente para la tincin del

    ncleo.

    5. Deterioro de la hematoxilina por dilucin.

    6. Exceso de fraccionamiento con alcohol de

    cido clorhdrico.

    7. Blanqueado por el cloro del agua de la llave.

    8. Mezcla con el lquido de citospray para la

    fijacin.

  • PRINCIPIO DE LA COLORACIN

    (VIRAJE)

    Disolucin acuosa de hematoxilina amarillo rojomorado azul La tincin recibe influencia del del agua, densidad del cloro y temperatura del

    lquido colorante.

    CAUSAS DE UNA TINCIN INADECUADA

    El diagnstico citolgico de alta confiabilidad se puede lograr con las muestras elaboradas adecuadamente. As que todos nosotros, quienes nos dedicamos al examen de citologa, siempre debemos tratar de elaborar muestras de buena calidad.

    Para esto, no hay que ignorar las muestras inadecuadas, sino buscar la causa y mejorarlas.

    DESHIDRATACIN

    Deshidratar bien con alcohol de 96alcohol absoluto. Si

    no se hace bien la deshidratacin, las laminillas se vuelven

    color blanquecido y no se logra obtener una muestra

    adecuada. Los colorantes tienden a disolverse en el agua o

    en alcohol, y sta es la causa de la decoloracin.

  • OrangeG OG6 contiene el radical sulfito(SO3) que tiende a disociarse.

    Si baja el pH, aumenta la intensidad de la tincin. Cerca

    de la neutralizacin, se debilita la intensidad de la tincin.

    Con esto puede pensarse que el radical sulfito es bastante

    fcil de disociarse y dificulta la unin de la protena con el

    colorante.

    Principio de la tincin del citoplasma.

    Los colorantes OG6 (orange G) y EA 50 (eoginY, verde

    palido) son colorantes acidos que tienen el radical funcional

    acido, y carga negativa. Los componentes principales del

    citoplasma son azucar, lipidos y proteinas antoferas que

    contiene RNA y tiene la caracteristica de tener carga

    negativa y positiva. Sin embargo, dependiendo de las

    condiciones de la tincion(pH), cambian estas cargas.

    Cuando el pH es neutro, muchas veces tiene carga negativa

    y cada vez que tiende a la acidez, el radical amino se ioniza y

    toma carga positiva y por esa razon se mejora la tincion.

    ACLARAMIENTO(PENETRACIN

    COMPLETO) MONTAJE

  • Eosin Y

    contiene el radical carboxilo(COOH), el cual tiene tendencia a

    no disociarse; con pH 5 6 se tie ms fuerte y cada vez que baja el pH, tiende a bajar la intensidad de la tincin. Si

    baja el pH, se reduce la ionizacin del radical

    carboxilo(COOH) de eosin Y y es frenado, por esa razn no se

    puede combinar con