Kamis, 05 Juli 2012uji MPNLABORTATORIUM MIKROBIOLOGI &
PARASITOLOGIDIPLOMA IIIAKADEMI FARMASI BINA HUSADAKENDARI
LAPORAN MIKROBIOLOGI DAN PARASITOLOGI
METODE MPN(Most Probable Number)
OLEH
KELOMPOK : IVKELAS : C ASISTEN : KARMILA, S.Farm.,M.Si
AKADEMI FARMASI BINA HUSADAKENDARI2012
BAB I PENDAHULUAN
I.1. LATAR BELAKANGMikroba, di alam terdapat hampir disemua
tempat. Di udara mulai dari permukaan tanah sampai pada lapisan
atsmosfer yang paling tinggi. Dilaut terdapat sampai pada dasar
laut yang paling dalam. Didalam air, seperti sungai, selokan, kolam
atau air sawah. Pada tanah yang subur, kira-kira terdapat 50 juta
bakteri per gram tanah. Mikroba pun banyak terdapat ditempat dimana
manusia hidup. Terdapat pada udara yang kita hirup, pada makanan
yang kita makan, juga terdapat pada permukaan kulit, pada jari
tangan, pada rambut, dalam rongga mulut, usus dalam saluran
pernapasan dan pada seluruh permukaan tubuh yang terbuka dan
dianggap sebagai flora normal. Akan tetapi, untunglah hanya
sebagian kecil dari mikroba itu yang dapat menimbulkan penyakit
(pathogen). Pada setiap cm2kulit terdapat sekitar 10.000 sampai
100.000 bakteri.Berbagai mikroba patogen seringkali ditularkan
melalui air yang tercemar sehingga menimbulkan penyakit bawaan
manusia maupun hewan. Oleh karena itu perlu dilakukan penelitian
mengenai adanya mikroba dalam suatu makanan dan minuman agar dapat
dikonsumsi manusia dengan layak sehingga tidak menimbulkan penyakit
akibat kontaminasi mikroba dalam makanan dan minuman dan dapat
memenuhi kebutuhan tubuh secara optimal.Analisis kuantitatif
mikrobiologi pada bahan pangan penting dilakukan untuk mengetahui
mutu bahan pangan dan menghitung proses pengawetan yang akan
diterapkan pada bahan pangan tersebut. Ada beberapa cara yang dapat
digunakan untuk menghitung atau mengukur jumlah jasad renik dalam
suatu suspensi, salah satunya adalah pemeriksaan adanya bakteri
Coliform pada makanan dan minuman dengan metode MPN (Most Probable
Number).
I.2. TUJUAN Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk
mengetahui cara dan prinsip uji Angka MPN
I.4. PRINSIPMPN adalah suatu metode enumerasi mikroorganisme
yang menggunakan data dari hasil pertumbuhan mikroorganisme pada
medium cair spesifik dalam seri tabung yang ditanam dari sampel
padat atau cair yang ditanam berdasarkan jumlah sampel atau
diencerkan menurut tingkat seri tabungnya sehingga dihasilkan
kisaran jumlah mikroorganisme yang diuji dalam nilai MPN/satuan
volume atau massa sampel.Prinsip utama metode ini adalah
mengencerkan sampel sampai tingkat tertentu sehingga didapatkan
konsentrasi mikroorganisme yang pas/sesuai dan jika ditanam dalam
tabung menghasilkaan frekensi pertumbuhan tabung positif
kadang-kadang tetapi tidak selalu. Semakin besar jumlah sampel yang
dimasukkan (semakin rendah pengenceran yang dilakukan) maka semakin
sering tabung positif yang muncul. Semakin kecil jumlah sampel yang
dimasukkan (semakin tinggi pengenceran yang dilakukan) maka semakin
jarang tabung positif yang muncul. Jumlah sampel/pengenceran yang
baik adalah yang menghasilkan tabung positif kadang-kadang tetapi
tidak selalu. Semua tabung positif yang dihasilkan sangat
tergantung dengan probabilitas sel yang terambil oleh pipet saat
memasukkannya ke dalam media. Oleh karena itu homogenisasi sangat
mempengaruhi metode ini. Frekuensi positif (ya) atau negatif
(tidak) ini menggambarkan konsentrasi mikroorganisme pada sampel
sebelum diencerkan.Asumsi yang diterapkan dalam metode MPN adalah
:bakteri terdistribusi sempurna dalam sampelsel bakteri
terpisah-pisah secara individual, tidak dalam bentuk rantai atau
kumpulan (bakteri coliform termasuk E.coliterpisah sempurna tiap
selnya dan tidak membentuk rantai).Media yang dipilih telah sesuai
untuk pertumbuhan bakteri target dalam suhu dan waktu inkubasi
tertentu sehingga minimal satu sel hidup mampu menghasilkan tabung
positif selama masa inkubasi tersebut.jumlah yang didapatkan
menggambarkan bakteri yang hidup (viable) saja. Sel yang terluka
dan tidak mampu menghasilkan tabung positif tidak akan
terdeteksi.
Pemilihan media sangat berpengaruh terhadap metode MPN yang
dilakukan. Umumnya media yang digunakan mengandung bahan nutrisi
khusus untuk pertumbuhan bakteri tertentu. Misalnya dalam
mendeteksi kelompok coliform dapat menggunakan media Brilliant
Green Lactose 2% Bile (BGLB) broth. Di dalam media ini
mengandunglactosedan garam empedu (bile salt) yang hanya
mengizinkan coliformuntuk tumbuh.Jadi nilai MPN adalah suatu angka
yang menggambarkan hasil yang paling mungkin.
BAB IITINJAUAN PUSTAKA
II.1. TEORI UMUM Metode MPN untuk uji kualitas mikrobiologi air
dalam praktikum digunakan kelompok coliform sebagai indicator.
Kelompok coliform mencakup bakteri yang bersifat aerobic dan
anaerobic fakultatif, batang gram negatif dan tidak membentuk
spora. Coliform memfermentasikan laktosa dengan pembentukan asam
dan gas dalam waktu 48 jam pada suhu 35oC (Hadioetomo,1993) Dalam
metode MPN digunakan medium cair, berbeda dengan metode cawan yang
menggunakan medium padat (agar). Perhitungan dilakukan berdasarkan
jumlah tabung yang positif, yaitu yang ditumbuhi oleh mikroba
setelah inkubasi pada suhu dan waktu tertentu.pengamatan tabung
positif dapat dilihat dengan timbulnya kekeruhan atau terbentuk gas
dalam tabung durham (sutedjo,1991).Metode MPN biasanya biasanya
dilakukan untuk menghitung jumlah mikroba di dalam contoh yang
bebentuk cair, meskipun dapat pula digunakan untuk contoh berbentuk
padat. Dalam praktikum ini suatu bahan makanan/ minuman dengan
sampelnya yaitu sirup dilakukan pengenceran secara desimal (10-1),
kemudian masing-masing tabung dengan seri 3-3-3 dimasukkan 10 ml, 1
ml dan 0,1 ml ke dalam tabung yang berisi Lactosa Broth dan tabung
Durham. (sutedjo,1991).Untuk setiap pengenceran digunakan 3 seri
tabung. Setelah diinkubasi selama 2 x 24 jam dengan suhu 37C, maka
akan dapat dilihat tabung yang positif yaitu tabung yang ditumbuhi
mikroba yang dapat ditandai dengan terbentuknya gas di dalam tabung
Durham. Lalu diamati tabung yang terdapat gas/ gelembung dan
berwarna keruh sehingga kombinasi tabung yang positif dari uji duga
dan uji penegasan dapat dicocokkan dengan tabel MPN-seri 9 tabung.
(sutedjo,1991).
Prosedur pengujian MPN Coliform sesuai Metode Analisis
Mikrobiologi (MA PPOM 69/MIK/06) yaitu dengan cara menyiapkan dua
tabung reaksi masing-masing berisi 9 mlPDF. Dari hasil homogenisasi
pada penyiapan sampel dipipet 1 ml pengenceran 10-1ke dalam tabung
PDF pertama hingga diperoleh suspense dengan pengenceran 10-2lalu
dikocok sampai homogen. Selanjutnya dibuat pengenceran 10-3.Ada dua
tahap pengujian MPN Coliform yaitu : (BPOM RI, 2006)
1. Uji Praduga (Presumtif Test)Untuk mendapatkan pengenceran
disiapkan 3 tabung reaksi berisi 9 ml MCB yang dilengkapi tabung
durham. Kedalam tiap tabung dari masing masing seri dimasukkan 1 ml
suspensi pengenceran. Diiinkubasi pada suhu 37 C selama 24-48 jam.
Setelah 24 jam dicatat dan diamati adanya gas yang terbentuk dalam
tiap tabung, kemudian inkubasi dilanjutkan hingga 48 jam dan
dicatat tabung-tabung yang menunjukkan uji positif.
2. Uji PenegasanBiakan dari tabung yang menunjukkan uji praduga
positif dipindahkan 1 sengkelit ke dalam tabung reaksi berisi 10 ml
BGLB yang telah dibungkus tabung durham. Seluruh tabung diiinkubasi
pada suhu 37 C selama 24- 48jam. Dilakukan pengamatan adanya
pembentukkan gas. Pernyataan hasil dari uji MPN coliform ini yaitu
jumlah tabung yang positif gas dicatat dan dirujuk ke tabel MPN.
Angka yang diperoleh pada table MPN menyatakan jumlah bakteri
coliform dalam tiap gram/tiap ml sampel yang diuji (BPOM RI,
2006).
Mikroorganisme sebagai indikator air:Pada pemeriksaan
mikrobiologi yang rutin terhadap air untuk menentukan aman tidaknya
untuk diminum, tidaklah cukup bila mendasarkan uji-uji yang
digunakan hanya terhadap adanya mikroorganisme patogenik karena
alas an sebagai beikut :1)Kemungkinan besar pathogen masuk kedalam
air secara sporadic, tetapi karena tidak dapat bertahan hidup lama
mungkin saja tidak dapat bertahan hidup lama mungkin saja tidak
terdapat di dalam contoh air yang dikirimkan ke laboratorium.2)Bila
terdapat jumlahnya amat sedikit, maka besar kemungkinan
patogen-patogen tersebut tidak terdeteksi oleh prosedur
laboratorium yang digunakan.3)Hasil pemeriksaan laboratorium baru
dapat diketahui setelah 24 jam atau lebih. Arabia ternate ditemukan
adanya patogen sementara itu tetntunya banyak orang telah
mengkonsumsi air tersebut dan tereksposisi terhadap infeksi sebelum
dapat dilakukan usaha untuk mengatasi situasi tersebut.Beberapa
spesies atau kelompok bakteri telah dievaluasi untuk menentukan
sesuai tidaknya untuk digunakan sebagai organism indikator.
Diantaranya organism-organisem yang dipelajari, yang hamper
memenuhi semua persyaratan suatu organism indikator yang ideal
adalah Escherica coli dan kelompok bakteri coli lainnya.
Bakteri-bakteri tersebut dianggap sebagai indikator polusi tinja
yang dapat diandalkan.Escherichia Coli pertama kali
diidentifikasikan oleh dokter hewan Jerman, Theodor Escherich dalam
studinya mengenai sistem pencernaan pada bayi hewan. Pada 1885,
beliau menggambarkan organisme ini sebagai komunitas bakteri coli
(Escherich 1885) dengan membangun segala perlengkapan
patogenitasnya di infeksi saluran pencernaan. Nama Bacterium Coli
sering digunakan sampai pada tahun 1991. Ketika Castellani dan
Chalames menemukan genus Escherichia dan menyusun tipe spesiesE.
Coli.Escherichia colidan bakteri coliform lainEscherichia
coliadalah penghuni normal saluran pencernaan manusia dan hewan
berdarah panas. Biasanya tidak patogenik, anggota lain kelompok
koliform adalahKlebsiella pneumonia,yang tersebar ialah luas dialam
terdapat dalam tanah, air, dan paddi-padian, dan juga dalam
saluuran pencernaan manusia dan hewan.Eterobacter aerogenes,sejenis
bakteri koliform yang terdapat dalam saluran pencernaan manusia dan
juga terdapat dalam tanah, air, koliform sebagai suatu kelompok
dicirikan sebagai bakteri yang berbentuk batang gram negative,
tidak membentuk spora, aerobic dan anaerobic fakultatif yang
memfermentasikan laktosa dengan menghasilkan asam dan gas dalam
wakti 48 jam pada suhu 350C.(sutedjo,1991).Kelompok koliform
mempunyai beberapa cirri yang juga dimiliki oleh anggota-anggota
genus Salmonella dan shigella, yaitu duagenera yang mempunyai
spesies-spesies enteric patogenik. Namun, ada juga perbedaan
biokimiawi utama yang nyata yaitu bahwa koliform dapat
memfermentasikan lactose dengan menghasilkan asam dan gas,
sedangkan salmonella dan shigella tidak memfermentasikan
laktosa.(sutedjo,1991).
II.2. URAIAN MIKROBAII.2.1. KLASIFIKASI MIKROBAa.Escherichia
coli
Kingdom : ProtistaFilum : ProtophytaKelas : SchyzomycutesOrdo :
EnterobacterialesFamily : EnterobacteriaceaeGenus :
EscherichiaSpecies : Escherichia Coli
II.3. MORFOLOGI MIKROBAa.Escherihia coliE.Colidari anggota
family Enterobacteriaceae. Ukuran sel dengan panjang 2,0 6,0 m dan
lebar 1,1 1,5 m. Bentuk sel dari bentuk seperti coocal hingga
membentuk sepanjang ukuran filamentous. Tidak ditemukan spora.. E.
Coli batang gram negatif. Selnya bisa terdapat tunggal,
berpasangan, dan dalam rantai pendek, biasanya tidak
berkapsul.bakteri ini aerobic dan dapat juga aerobic
fakultatif.E.coliberbentuk besar (2-3 mm), circular, konveks dan
koloni tidak berpigemn pada nutrient dan media darah. E. Coli dapat
bertahan hingga suhu 600C selama 15 menit atau pada 550C selama 60
menit.II.4. URAIAN BAHAN1.SampelAir sumurPemerian : cairan jernih
tidak berwarna, tidak berbau, tidak mempunyai rasaLokasi :Jln. Tina
Orima 3 kendari
Gambar :
2.Mediaa.BGLB 2% ( Brilliant Green Lactose Bile Broth )Pepton
10Ochsenyalle 20Lactose 10Brilliant gom 0,0137
b.MCBPancreatic digest of gelatin 17Peptons 3Lactose 10Bile
Salts 1,5Sodium chloride 11,5Netral ped 0,03Chrystal violet
0,01Cara pembuatan :Ambillah 50 gram Mac Conkey Broth. Larutkan
dalam 1 liter air campur hingga merata. Panaskan sampai mendidih.
Kemudian mesukan dalam autoklaf pada suhu 121oC selama 15
menit.
BAB IIIMETODE PRAKTIKUM
III.1. ALAT DAN BAHANIII.1.1. Alat-alta yang
digunakan1.Erlenmeyer 100 mL2.Erlenmeyer 500 mL3.Rak Tabung4.Lampu
Spiritus5.Tabung Reaksi6.Sprayer + Alkohol7.Spoit 10 mL8.Spoit 1
mL9.Tabung Durham10.Pipet Ukur11.Karet Penghisap
III.1.2. Bahan yang digunakan1.MCB (Media)2.BGLB 2 %
(Media)3.Aquadest4.Air sumur5.NaCl fisiologi6.Alcohol
70%7.Tissue8.Minyak Bunsen
III.2. CARA KERJAIII.2.1. Penyiapan sampel1.Persiapan AlatTabung
reaksi di bersihkan sekitar 120 tabung, tabung durham juga di
bersihkan.Kemudian di keringkan. Tabung durham di masukkan ke dalam
tabung reaksi.
2.Perhitungan Media-BGLB 2% = 2/100 x 1000= 20 gram-MCB = 2/100
x 1000= 20 gram
3.Pembuatan Media1)Media MCB dan BGLB 2% di timbang masing-
masing 20 g untuk 500 mL2)Masukkan media ke dalam
Erlenmeyer3)Dilarutkan dengan air 500 mL, sedikit demi sedikit, di
kocok.4)Kemudian di sumbat dengan kapas.5)Di panaskan ke dalam
belanga sampai mendidih dan homogen.6)Setelah di panaskan, media di
dinginkan. Kemudian setiap media di pipet 9 mL dan di masukkan ke
dalam tabung reaksi, yang telah berisi tabung durham di
dalamnya.7)Setelah semua tabung reaksi terisi oleh media,
tabung-tabung itu di bungkus dengan kertas untuk di sterilisasikan
ke dalam autoklaf dengan suhu 1210C selama 15 menit.8)Setelah
sterilisasi, media di dinginkan dan di simpan ke dalam kulkas untuk
di gunakan keesokan harinya.
4.Prosedur Kerja1.Di siapkan alat dan bahan2.Di pipet sampel
yakni air sumur sebanyak 10 mL, dan di masukkan ke dalam Erlenmeyer
steril3.Di pipet NaCl Fisiologis sebanyak 90 mL dan di masukkan ke
dalam Erlenmeyer berisi sampel, di kocok hingga homogen.4.Kemudian
dilakukan faktor pengenceran sebanyak 2x. Di pipet 1 mL sampel di
dalam Erlenmeyer steril (10-1) dan di masukkan ke dalam tabung
reaksi (10-2) yang berisi 9 mL NaCl Fisiologis. Di kocok, kemudian
di pipet kembali 1 mL sampel di dalam tabung reaksi (10-2) dan di
masukkan ke dalam tabung reaksi (10-3) yang berisi 9 mL NaCl
Fisiologis, dan di kocok homogen.5.Setelah itu, di siapkan 9 tabung
reaksi yang berisi 9 mL MCB dan di lengkapi tabung durham di
dalamnya.6.Di pipet 1 mL pengenceran 10-1dan di masukkan ke masing_
masing 3 tabung reaksi MCB. Di lakukan hal yang sama pada
pengenceran 10-2dan 10-3.7.Setelah itu, media di bungkus kembali
dengan kertas dan di inkubasi pada suhu 350-370C selama 2 x 24
jam.8.Di lakukan pengamatan dan di catat tabung yang menunjukkan
uji presumtif positif yaitu terbentuknya di dalam tabung durham dan
perubahan warna media menjadi kuning.9.Setelah di amati, di lakukan
uji konfirmasi dengan di pindahkan 1 sengkelit biakan dengan
menggunakan ose dari tabung yang menunjukkan uji presumtif positif
ke dalam tabung reaksi yang berisi BGLB 2% sebanyak 10 mL yang di
lengkapi tabung durham.10.Kemudian di bungkus kembali dengan kertas
dan di inkubasi selama 2 x 24 jam dengan suhu 370C.11.Setelah itu
di lakukan pengamatan kembali dan di catat tabung yang menunjukkan
reaksi positif yaitu terbentuknya gas dalam tabung durham.
BAB IVHASIL PENGAMATAN
IV.1. HASIL PENGAMATANI.Tabel pengamatanDalam percobaan MPN
dengan sampel air sumur, terdapat beberapa tabung yang menunjukkan
tabung positif pada uji persumtif dan uji konfirmasi, yakni sebagai
berikut :
aUji PersumtifHari / TanggalJumlah tabung positifAMP per
gram/mL
Senin,7-05-201210-110-210-3
333 > 1100
bUji KonfirmasiHari / TanggalJumlah tabung positifAMP per
gram/mL
Rabu,9-05-201210-110-210-3
033---( Tidak terdapat pada table MPN )
IV.2. GAMBAR PENGAMATANa.Uji persumtif
1.Tabung reaksi yang berisi 9 mL MCB yang dilengkapi tabung
durham2.Hasil pengamatan setelah diinkubasi pada suhu 35-370C
selama 48 jamb.Uji Konfirmasi1.Tabung reaksi yang berisi 10 mL BGLB
2% yang dilengkapi tabung durham
2.Hasil pengamatan setelah diinkubasi pada suhu 35-370C selama
48 jam
IV.3. PERHITUNGAN
Dalam percobaan kali ini kami tidak dapat melakukan perhitungan,
karena kami gagal dalam melakukan percobaan dengan menggunakan
metode MPN (Most probable Number) pada saat melakukan uji
konfirmasi, jumlah tabung yang kami peroleh 0-3-3 yakni :0 pada
pengenceran 10-13 pada pengenceran 10-23 pada pengenceran
10-3Sehingga hasil yang diperoleh tidak terdapat pada tabel MPN
yang ada.
BAB VPEMBAHASAN
Pada percobaan kali ini yakni metode MPN (Most probable number)
yaitu metode pengujian untuk memperlihatkan kualitas mikrobiologi
bakteri coliform dalam air seperti bakteriEschechia coli,salmonella
dan lain-lain. Dimana tuuan praktikum ini adalah untuk mengetahui
kadar dan prinsip uju MPN (Most Probable Number) pada sedian air.
Semua tehnik dan prosedur pengerjaan praktikum dilakukan dengan
tehnik aseptic,baik pada alat-alat yang digunakan maupun pada
bahan-bahan yang akan dipakai pada praktikum kali ini.Dalam metode
MPN (Most probable number) digunakan medium air,berbeda dengan
metode cawan yang menggunakan medium padat (agar). Perhitungan pun
dilakukan berdasarkan jumlah tabung yang positif yaitu ditandai
dengan pertumbuhan oleh mikroba setelah proses inkubasi pada suhu
dan waktu rettentu. Pengamatan tabung positif dapat dilihat dengan
timbulnya kekeruhan dan perubahan warna atau terbentuknya gas dalam
tabung durham.Adapun alat-alat dan bahan yang digunakan pada
praktikum kali ini adalah erlenmeyer 250 ml dan 500 ml, rak tabung,
lampu spiritus, tabung reaksi, tabung durham, sprayer, alkohol,
spoit, pipet ukur, dan karet pengisap. Serta bahan-bahan yang
digunakan adalah aquadest,NaCL Fisiologis, air sumur sebagai
sampel,dan media yaitu MCB dan BGLB 2% media. Alat-alat tersebut
kemudian dibersihkan dengan menggunakan air dan dikeringkanPada
proses pembuatan media yaitu MCB (Mac conkey broth) dan BGLG
(Brilliant Green lactose Broth) masing-masing media ditimbang 20
gram dalam 500 mL aquadest lalu dimasukan kedalam Erlenmeyer 50 mL
dan dikocok hingga homogen, kemudian Erlenmeyer disumbat kapas dan
dimasukan kedalam belanga sampai memndidih dan homogen.Setelah
dipanaskan, media tersebut didinginkan, kemudian setiap media
dipipet 9 mL dan dimasukan kedalam tabung reaksi yang telah berisi
tabung durham setelah semua tabung terisi oleh media, tabung
tersebut dibungkus dengan kertas untuk disterilisasikan dalam
autoklaf selama 15 menit pada suhu 1210C , setelah selesai
didinginkan dan disimpan kedalam kulkas untuk digunakan uji
lanjutDalam percobaan ini,prosedur kerja uji MPN (Most Probable
Number) , sampel yang digunakan adalah air sumur , dipipet 10 mL
dan dimasukan kedalam Erlenmeyer steril ,kemudian dipipet 90 mL
NaCL Fisiologis untuk pengenceran sampel dan dimasukan dalam
Erlenmeyer berisi sampel,itu adalah pengenceran pertama
(10-1),kocok homogen. Kemudian dilakukan pengenceran kedua (10-2)
dan ketiga (10-3) , yang berisi 9 mL NaCL Fisiologis dalam tabung
reaksi. Kemudian disiapkan Sembilan tabung reaksi berisi media MCB
(Mac Conkey Borth) yang dilengkapi tabung durham , dipipet 1 mL
dari pengenceran 10-1dan dimasukan kemasing-masing tiga tabung
reaksi MCB (Mac Conkey Bort). Dilakukan hal-hal yang sama pada
pengenceran 10-2dan 10-3,kemudian media dibungkus kembali dengan
kertas dan diinkkubasi pada suhu sedang yakni 350-370C selama 2 x
24 jam. Setelah itu dilakukan pengamatan dan dicatat jumlah tabung
yang menunjukan uji presumtif pasif yaitu terbentuknya gas dalam
tabung durham dan perubahan warna media menjadi kuning atau
keruh.Dengan demikian didapat tabel hasil pengamatan pada sampel
air sumur pada hari senin 07/05/2012 pukul 14.30, yakni sebagai
berikut :Hari / TanggalJumlah tabung positifAMP per gram/mL
Senin,7-05-201210-110-210-3
333 > 1100
Berdasarkan table pengamatan tersebut diperoleh hasil yang
menunjukan bahwa jumlah tabung positif pada percobaan MPN persatuan
volume atau massa sampel yakni diperoleh tiga tabung positif dari
pengenceran 1/10 (10-1), dan tiga tabung positif dari pengnceran
1/1000 (10-3) sehingga berdasarkan table MPN (Most Probable Number)
angka yang diperoleh yakni >11000 jumlah bakteri coliform dalam
tiap gram atau tiap ml. Setelah itu dilakukan uji konfirmasi atau
uji lanjut dengan tujuan untuk memastikan jumlah bakteri coliform
yang terdapat pada tabung yang telah dilakukan uji presumtif.Uji
konfirmasi dilakukan dengan proses pemindahan satu sengkelit biakan
dengan menggunakankemudian dibun ose dari tabung yang menunjukan
uji persumtif kedalam tabung reaksi yang berisi BGLB 2% sebanyak 10
ml,yang telah dilengkapi dengan tabung durham,kemudan dibungkus
kemali dengan kertas dan diinkubasi selama 2 x 24 jam pada suhu
350-370C. Setelah itu dilakukan pengamatan kembali serta dicatat
tabung yang menunjukan reaksi positif yaitu terbentuknya gas dalam
tabung durham.Pada pengamatan uji konfirmasi diperoleh hasil
pengamatan pada sampel air sumur pada hari rabu tanggal 09/05/2012
jam 16.00, yakni sebagai berikut :Hari / TanggalJumlah tabung
positifAMP per gram/mL
Rabu,9-05-201210-110-210-3
033---(Tidak terdapat pada table MPN)
Berdasarkan tabel pengamatan tersebut diperoleh hasil yang
menghasilkan bahwa jumlah tabung positif yakni diperoleh nol tabung
positif (tidak ada tabung positif) dari pengnceran 1/10 (10-1) ,
tiga tabung positif dari pengenceran 1/100 (10-2) , serta tiga
tabung positif dari pengenceran 1/1000 (10-3)Hasil yang diperoleh,
tidaklah sesuai berdasarkan table MPN (Most Probable Number) yang
ada , hal ini terjadi dimungkinkan karena kurang telitinya atau
terjadi kesalahan pada saat pemindahan sengkelit, dan juga
percobaan dilakukan tidak secara aseptik pada saat praktikum
berlangsung.. kemungkinan selanjutnya yakni pada saat pemindahan
sengkelit pada label (pelabelan) sehingga jumlah angka bakteri
coliform dalam tiap gram atai tiap ml tersebut tidaklah sesuai
dengan table MPN (Most Probable Number) yang ada.
.
BAB VIPENUTUP
VI.1. KESIMPULANBerdasarkan hasil percobaan yang kami lakukan,
dapat disimpulkan beberapa hal yakni sebagai berikut :aUji
PersumtifHari / TanggalJumlah tabung positifAMP per gram/mL
Senin,7-05-201210-110-210-3
333 > 1100
bUji KonfirmasiHari / TanggalJumlah tabung positifAMP per
gram/mL
Rabu,9-05-201210-110-210-3
033---(Tidak terdapat pada table MPN)
VI.2. SARAN Adapun saran yang ingin diajukan dalam pelaksanakan
praktikum ini adalah diharapkan semua praktikan lebih serius dan
disiplin lagi dalam melakukan praktikum berikutnya. Dan sebaiknya
para praktikan sebelum melakukan sterilisasi harus melakukan
berdasarkan prosedur tehnik pengerjaan yakni pengerjaan atau
prosedur kegiatan di laboratorium mikrobiologi harus dikerjakan
secara aseptic. Dengan tujuan untuk mencegah adanya kontaminasi
silang atau tercemarnya biakan murni dari mikroorganisme luar baik
melalui kontak langsung dengan permukaan atau tangan sekaligus
melindungi diri dari infeksi dan orangorang yang berada di dalam
laboratorium.DAFTAR PUSTAKA
BPOM RI. 2006.Metode Analisis Mikrobiologi Suplemen 2000. Pusat
Pengujian Obat Dan Makanan Badan Pengawasan Obat Dan Makanan
Republik Indonesia : Jakarta.Hadioetomo, R.S 1993.Mikrobiologi
dasar dalam praktek teknik dan prosedur dasar laboratorium. PT
Gramedia Pustaka Utama : JakartaLalo, Ahmad., dkk, 2012.Penuntun
Praktikum Mikrobilologi dan Parasitologi.Akfar Bina Husada :
KendariLay, Bibiana W. 1994.Anaisis Mikroba di aboratorium.PT
RajaGrafindo Persada : Jakarta.Sutedjo, M.M. 1991.Mikrobiologi
tanah. Rineka Cipta : JakartaWaluyo Lud, 2007.Edisi Revisi
Mikrobiologi Umu.Penerbit UMM PRESS :
Malang.file:///C:/Users/speedy/Downloads/mikrobiologi%20modul%204%20_%20dizzideepinsohard-blog.htm
Beberapa ciri penting suatu organisme indikator ialah :1)
Terdapat dalam air tercemar dan tidak ada dalam air yang tidak
tercemar.2) Terdalam dalam air bila ada bakteri pathogen.3) Jumlah
mikroorganisme indikator berkorelasi dengan kadar polusi.4)
Mempunyai kemampuan bertahan hidup yang lebih besar daripada
bakteri patogen.5) Mempunyai sifat yang seragam dan mantap.6) Tidak
berbahaya bagi manusia dan hewan.7) Terdapat dalam jumlah yang
lebih banyak daripada bakteri patogen.8) Mudah dideteksi dengan
teknik-teknik laboratorium yang sederhana.
Metode MPN terdiri dari tiga tahap, yaitu uji pendugaan
(presumtive test), uji penetapan (confirmed test), dan uji
kelengkapan (completed test). Dalam uji tahap pertama, keberadaan
coliform masih dalam tingkat probabilitas rendah; masih dalam
dugaan. Uji ini mendeteksi sifat fermentatif coliform dalam sampel.
Karena beberapa jenis bakteri selain coliform juga memiliki sifat
fermentatif, diperlukan uji konfirmasi untuk mengetes kembali
kebenaran adanya coliform dengan bantuan medium selektif
diferensial. Uji kelengkapan kembali meyakinkan hasil tes uji
konfirmasi dengan mendeteksi sifat fermentatif dan pengamatan
mikroskop terhadap ciri-ciri coliform: berbentuk batang, Gram
negatif, tidak-berspora (Fardiaz,1989).Pengecatan gram dilakukan
dalam 4 tahap yaitu1. Pemberian cat warna utama (cairan kristal
violet) berwarna ungu.2. Pengintesifan cat utama dengan penambahan
larutan mordan JKJ.3. Pencucian (dekolarisasi) dengan larutan
alkohol asam.4. Pemberian cat lawan yaitu cat warna safranin
Perbedaan dasar antara bakteri gram positif dan negatif adalah
pada komponen dinding selnya. Kompleks zat iodin terperangkap
antara dinding sel dan membran sitoplasma organisme gram positif,
sedangkan penyingkiran zat lipida dari dinding sel organisme gram
negatif dengan pencucian alkohol memungkinkan hilang dari sel.
Bakteri gram positif memiliki membran tunggal yang dilapisi
peptidoglikan yang tebal (25-50nm) sedangkan bakteri negative
lapisan peptidoglikogennya tipis (1-3 nm).Sifat bakteri terhadap
pewarnaan Gram merupakan sifat penting untuk membantu determinasi
suatu bakteri. Beberapa perbedaan sifat yang dapat dijumpai antara
bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif yaitu:
Ciri-ciri bakteri gram negatif yaitu: Struktur dinding selnya
tipis, sekitar 10 15 mm, berlapis tiga atau multilayer. Dinding
selnya mengandung lemak lebih banyak (11-22%), peptidoglikan
terdapat didalam lapisan kaku, sebelah dalam dengan jumlah sedikit
10% dari berat kering, tidak mengandung asam tekoat. Kurang rentan
terhadap senyawa penisilin. Pertumbuhannya tidak begitu dihambat
oleh zat warna dasar misalnya kristal violet. Komposisi nutrisi
yang dibutuhkan relatif sederhana. Tidak resisten terhadap gangguan
fisik. Resistensi terhadap alkali (1% KOH) lebih pekat Peka
terhadap streptomisin Toksin yang dibentuk Endotoksin
Ciri-ciri bakteri gram positif yaitu: Struktur dinding selnya
tebal, sekitar 15-80 nm, berlapis tunggal atau monolayer. Dinding
selnya mengandung lipid yang lebih normal (1-4%), peptidoglikan ada
yang sebagai lapisan tunggal. Komponen utama merupakan lebih dari
50% berat ringan. Mengandung asam tekoat. Bersifat lebih rentan
terhadap penisilin. Pertumbuhan dihambat secara nyata oleh zat-zat
warna seperti ungu kristal. Komposisi nutrisi yang dibutuhkan lebih
rumit. Lebih resisten terhadap gangguan fisik. Resistensi terhadap
alkali (1% KOH) larut Tidak peka terhadap streptomisin Toksin yang
dibentuk Eksotoksin Endotoksin
