Reporte 4. Separación de proteinas

8/19/2019 Reporte 4. Separación de proteinas

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U NIVERSIDAD AUTONOMA DE QUERETARO || FACULTAD DE QUIMICAINGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA

SEPARACIÓN DE PROTEÍNAS

Albo Josué Hernn!e" Ro#$s

Ingeniería en biotecnología, Universidad Autónoma de Querétaro, [email protected]

Fern$n!o L$rr%&$ Sn'(e"

Ingeniería en biotecnología, Universidad Autónoma de Querétaro, fertom!@"ahoo.com.m#

Fern$n!o Ol&er$ M$r)*ne"

Ingeniería en biotecnología, Universidad Autónoma de Querétaro, fertom!@"ahoo.com.m#

Fr$n'%s'o Le+n Solor%o Ingeniería en biotecnología, Universidad Autónoma de Querétaro, [email protected]

N$)$l%$ G$r'*$ Or%(uel$

Ingeniería en biotecnología, Universidad Autónoma de Querétaro, nat"%&'(@hotmail.com

RESUMEN

PALABRAS CLAVE: DNS, Bradford, glucosa, BSA, l!adura, "#!r$asa

INTROUDCCION

METODOLO%IA

&' Cur!a d cal"(rado d glucosau$"l")a#do l *+$odo dl DNS

A ,$r)%r !e un$ solu'%+n !e -lu'os$ ./0M1 se ,re,$r+ un$ -$0$ !e solu'%ones!el $"2'$r !e !%s)%n)$ 'on'en)r$'%+n1 )$l'o0o se %n!%'$ en l$ T$bl$ 34

Ta(la &' Prarac"-# d u#a ga*a d

soluc"o#s d glucosa d d"fr#$co#c#$rac"-#'

Tu(o Co#c#$rac"-#.*M/

Aguads$"lada

.*l/

%lucosa01*M .*l/

/ / 5 /3 5 346 /43

5 . 347 /458 9 34: /48. 7 349 /4.; 3/ 34; /4;9 5/ 3 3: ./ / 5

Un$ &e" (e'($s l$s 0e"'l$s1 se $-%)+ b%en ,$r$ (o0o-ene%"$r l$ solu'%+n4 De '$!$)ubo se )o0$n /13 0l < se )r$ns=%r%eron $

un )ubo !e &%!r%o 'on )$,+n !e ros'$4 Se$>$!%+3 0l !el re$')%&o DNS1%n'ubn!ose ,os)er%or0en)e l$ 0e"'l$ enel blo?ue se'o $ 3// @C !ur$n)e 3/0%nu)os se !e#+ en=r%$r < se !e)er0%n+ l$$bsorb$n'%$ $ ;:/ n01 u)%l%"$n!o 'o0o bl$n'o l$ 0e"'l$ !el )ubo /4 $r$ 0$<or

mailto:[email protected]












=%$b%l%!$! !e los resul)$!os1 se )r$b$#+ ,or !u,l%'$!o4

2' Cur!a d cal"(rado d BSA

*d"a#$ l *+$odo d BradfordA ,$r)%r !e un$ solu'%+n !e BSA 5/ -0len $-u$ !es)%l$!$ < ,or !%lu'%+n en $-u$1Se ,re,$r+ un$ -$0$ !e solu'%ones !e!%=eren)e 'on'en)r$'%+n !e BSA1 se-2n se%n!%'$ en l$ T$bl$ 54

Ta(la 2' Prarac"-# d u#a ga*a dsoluc"o#s d BSA d d"fr#$co#c#$rac"-#'

Tu(o Co#c#$rac"-#.*M/

Aguads$"lada .*l/

BSA 21 3g4*l

.*l// / 5 /3 5 347 /455 . 349 /4.8 9 34. /49. 7 345 /47; 3/ 3 39 3; /4; 34;: 5/ / 5

Se $>$!%+ 3 0l !el re$')%&o !e Br$!=or! <se $-%)+4 Se !e)er0%n+ l$ $bsorb$n'%$ $56;n01 un$ &e" )r$ns'urr%!os 3/ 0%nu)os!e re,oso4

5' O($#c"-# d u# 6$rac$o crudod "#!r$asa d l!adura da#adr7a'

Se sus,en!%+ 3 - !e ,re,$r$!o l%o=%l%"$!o!e le&$!ur$ en 5// 0l !e )$0,+n !ee)r$''%+n )$0,+n $'e)$)o /13 M1 ,H;1/1 en N$Cl /1; M4 Se $-%)+ l$ 0e"'l$!ur$n)e 3; 0%nu)os1 se lle&o $ unro0,%0%en)o !e 0e0br$n$ 'elul$r ,or0e!%o !e un son%'$!or !ur$n)e 5 0%nu)os< 0e!%o1 se 'en)r%=u-+1 < se )o0+ elsobren$!$n)e 'o0o e)r$')o en"%0)%'o4

0' E#sa8o d la ac$"!"dad "#!r$asadl 6$rac$o crudo

Se ,re,$r$ron . )ubos 'o0o se 0ues)r$ en

l$ )$bl$ 84Ta(la 5' M)cla d #sa8o s$9#darara la d$r*"#ac"-# d la ac$"!"dad"#!r$asa'

Co*o##$ Bl$n'o !esus)r$)o

Bl$n'o !een"%0$

roble0$

Sacarosa 1'2 M .*l/ / 3 3Ta*-# .*l/ 5 5 5Agua ds$"lada .*l/ 5 3 3E6$rac$o crudo .3l/ 3// / 3//

Los 'u$)ro )ubos ,re,$r$!os se %n'ub$ron$ ;; @C !ur$n)e 3; 0%nu)os1 ,$r$ ?ue l$$')%&%!$! %n&er)$s$ ,resen)e en el e)r$')o(%!rol%'e l$ s$'$ros$4 $s$!o el ,er%o!o!e %n'ub$'%+n1 se !e)u&o l$ re$''%+nsu0er-%en!o los )ubos en un b$>o !e(%elo ,%'$!o4 Se $n$l%"$ron 'o0o se%n!%'$ en l$ se''%+n 3 !e l$ Me)o!olo-*$4A ,$r)%r !e los &$lores !e $bsorb$n'%$ !elos ens$<os ,roble0$1 !es'on)$!os el

&$lor !e los bl$n'os1 se !e)er0%n+ l$$')%&%!$! %n&er)$s$ !el e)r$')o4

' Prc""$ac"-# co# sulfa$oa*-#"co

Dos $l*'uo)$s !e 5/ 0l !e e)r$')o 'ru!ose lle&$ron1 res,e')%&$0en)e1 $l ./ <7/ !e s$)ur$'%+n 'on sul=$)o $0+n%'o4L$ s$l se $>$!%+ en =or0$ =%n$0en)e ,ul&er%"$!$ < 'on $-%)$'%+n ,$r$

=$&ore'er su !%solu'%+n4 Un$ &e" !%suel)$l$ s$l1 se !e#+ re,oso < en =r*o !ur$n)e .;0%n4 $s$!o es)e )%e0,o1 se se,$r+ ,or 'en)r%=u-$'%+n el ,re'%,%)$!o ob)en%!o !elsobren$!$n)e1 < se $no)+ el &olu0en !eés)e4 Los ,re'%,%)$!os 3 ./s$)ur$'%+n < 5 7/ s$)ur$'%+n se&ol&%eron $ !%sol&er en un &olu0en !e



)$0,+n $'e)$)o /13 M ,H ;1/4 Un$ &e"'o0,le)$!$ l$ re!%solu'%+n1 se 0%!%eron <se $no)$ron los &ol20enes4

;' A#9l"s"s d las fracc"o#s

ro$"casAl*'uo)$s !e 51; 0l !e '$!$ un$ !e l$s'u$)ro =r$''%ones ,ro)e%'$s ob)en%!$s !el$ ,re'%,%)$'%+n 'on sul=$)o $0+n%'o 3151 S31 S5 se $n$l%"$ron ,$r$ $')%&%!$!%n&er)$s$ < 'on)en%!o !e ,ro)e*n$4 Cones)os &$lores se 'ons)ru%r un$ )$bl$ !e ,ur%=%'$'%+n1 )$l 'o0o se %n!%'$ en l$T$bl$ .4

Ta(la 0' Pur"f"cac"-# d la ac$"!"dad"#!r$asa d l!adura

RESULTADOS

&' Cur!a d cal"(rado d glucosau$"l")a#do l *+$odo dl DNS

<"gura &' %lucosa a d"fr#$sco#c#$rac"o#s: 1, 2, 0, ;, =, &1, 21, 01

*M rsc$"!a*#$ d ")>u"rda adrc?a co# DNS'

Ta(la ' Rsul$ados d lad$r*"#ac"-# d glucosa a d"fr#$sco#c#$rac"o#s or dul"cadou$"l")a#do l sc$rofo$-*$ro a @1#*'

Tu(o & uA(s 2 uA(s/ / /3 /436/ /436;5 /48:. /48;;8 /4;/; /4;78. /4:39 /4:5.; /47;/ /477:9 /4758 /4:66: /47:5 /47;9

uAbs un%!$!es !e Absorb$n'%$

Un$ &e" ob)en%!os es)e !u,l%'$!o !eresul)$!os1 se ob)u&o un ,ro0e!%o !e$bsorb$n'%$ < se re$l%"+ l$ 'ur&$ !e'$l%br$'%+n ?ue se 0ues)r$ en l$ =%-ur$ 54$r$ su re$l%"$'%+n se el%0%n$ron los2l)%0os !os ,un)os1 es !e'%r l$$bsorb$n'%$ !e los )ubos 9 < : ,or l$ob)en'%+n !e !$)os err+neos4 Ks)os es)n0$r'$!os en l$ )$bl$ ; 'on 'olor $"ul4

1086420

0.9

0.8

0.7

0.6

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0.0

[mM]1}

A B S p r o m

!r"a d$ a&'ra'* +,SABSprom 0.01221 0.08721[mM]1}

<"gura 2' Cur!a d cal"(rac"-# dglucosa or l *+$odo DNS

2' Cur!a d cal"(rado d BSA*d"a#$ l *+$odo d Bradford



<"gura 5' BSA a d"fr#$sco#c#$rac"o#s: 1, 2, 0, ;, =, &1, &, 21

*M rsc$"!a*#$ d ")>u"rda adrc?a co# Bradford'

Ta(la ;' Rsul$ados d lad$r*"#ac"-# d BSA a d"fr#$sco#c#$rac"o#s or dul"cadou$"l")a#do l sc$rofo$-*$ro a#*'

Tu(o & uA(s 2 uA(s/ / /3 /4/:6 /4/:/5 /43.. /43./

8 /43:5 /45/5. /45/8 /45.3; /45/3 /43;39 /45.: /4337: /4586 /43:.

uAbs un%!$!es !e Absorb$n'%$

Un$ &e" ob)en%!os es)e !u,l%'$!o !eresul)$!os1 se ob)u&o un ,ro0e!%o !e$bsorb$n'%$ < se re$l%"+ l$ 'ur&$ !e

'$l%br$'%+n ?ue se 0ues)r$ en l$ =%-ur$ .4

9876543210

0.25

0.20

0.15

0.10

0.05

0.00

[mM]

A B S

!r"a d$ a&'ra'* Brad/ordABS 0.007800 0.03070 [mM]

<"gura 0' Cur!a d cal"(rac"-# d BSAor Bradford'

5' O($#c"-# d u# 6$rac$o crudo

d "#!r$asa d l!adura da#adr7a'

0' E#sa8o d la ac$"!"dad "#!r$asadl 6$rac$o crudo

' Prc""$ac"-# co# sulfa$oa*-#"co

;' A#9l"s"s d las fracc"o#sro$"cas

DISCUSIÓN

El '%!o 84;!%n%)ros$l%'*l%'o es elre$')%&o u)%l%"$!o ,$r$ l$ !e)er0%n$'%+n!e $"2'$res4 En !%solu'%+n $l'$l%n$ el$"2'$r se (%!rol%"$ ,ro!u'%en!o un'o0,ues)o ?ue re!u'e $ un -ru,o n%)ro!el DNS1 ,$r$ !$r el ,ro!u')o $l 0ono$0%no 'orres,on!%en)e4 Es)$ re$''%+n !$un ,ro!u')o 'olor%!o1 ?ue '$us$ ?ue en ,resen'%$ !e -lu'os$ el 'olor $0$r%llo

or%-%n$l '$0b%e $ ro#o l$!r%llo 'o0o seobser&$ en l$ =%-ur$ 34 G or es)e0o)%&o el bl$n'o !e nues)ro )ubos'onser&+ el 'olor $0$r%llo1 0%en)r$s ?ue $0e!%!$ ?ue $u0en)$b$ l$ 'on'en)r$'%+n!e -lu'os$ )$0b%én lo ($'*$ l$ %n)ens%!$!!el 'olor o#o l$!r%llo4



$r$ l$ re$l%"$'%+n !e l$ 'ur&$ ?ue seobser&$ en l$ =%-ur$ 5 se el%0%n$ron los2l)%0os !os !$)os1 es !e'%r l$s$bsorb$n'%$s !e los )ubos ;1 9 < : ,or?uese ob)u&%eron !$)os err+neos1 )$l 'o0o se

en'uen)r$ %n!%'$!o en l$ T$bl$ ;4

L$ $lb20%n$ !e suero bo&%n$ es un$ ,ro)e*n$ ll$0$!$ BSA ,or sus s%-l$s en%n-lés4 Cons)$ !e 9/: $0%no'%!os < su ,eso 0ole'ul$r es !e 994875 D$ D4 El0é)o!o !e Br$!=or!1 se u)%l%"$ ,$r$ su!e)er0%n$'%+n ,or?ue es) b$s$!o en el'$0b%o !e 'olor !el 'olor$n)e Coo0$ss%e br%ll$n) blue G5;/ en res,ues)$ $

!%=eren)es 'on'en)r$'%ones !e ,ro)e*n$4Es)e 'o0,ues)o %n)er$''%on$ 'on$0%no'%!os bs%'os es,e'%$l0en)e$r-%n%n$ < $ro0)%'os4 Es)$ un%+n !el'olor$n)e 'on los $0%no'%!os ,ro&o'$un '$0b%o en el 0%0o !e $bsor'%+n !el'olor$n)e ?ue es $ los ;6; n041 r$"+n ,or l$ ?ue se !%o le')ur$ $ es$ lon-%)u! !eon!$4 L$ %n)ens%!$! !el 'olor $"ul

ob)en%!o es !%re')$0en)e ,ro,or'%on$l $l$ 'on'en)r$'%+n !e ,ro)e*n$ ,resen)e1 ,or ello se obser&$ un %n're0en)o -r$!u$l !e%"?u%er!$ $ !er'($ en l$ =%-ur$ 84

$r$ l$ re$l%"$'%+n !e l$ 'ur&$ ?ue seobser&$ en l$ =%-ur$ . se el%0%n$ron los2l)%0os )res !$)os1 es !e'%r l$s$bsorb$n'%$s !e los )ubos ;1 9 < : ,or?uese ob)u&%eron !$)os err+neos1 )$l 'o0o se

en'uen)r$ %n!%'$!o en l$ T$bl$ 94En $0bos '$sos se el%0%n$ron 5 < 8 !$)os ,or?ue 'on ello se lo-r+ ob)ener un$re-res%+n l%ne$l 0u'(o 0s $l)$ 6646 <67461 res,e')%&$0en)e4 Con es)$sre-res%ones se )%ene un$ 0$<or 'on=%$n"$en l$ 'ur&$ < se !ebe )ener ,or?ue es l$

?ue se u)%l%"$r ,$r$ l$ !e)er0%n$'%+n !e-lu'os$ < ,ro)e*n$ en el e)r$')oen"%0)%'o !e l$ le&$!ur$4

CONCLUSIÓN

A%RADECIMIENTOS

A-r$!e'e0os $ l$ $'$!e0%$ !eB%o)e'nolo-*$ !e l$ Un%&ers%!$!Au)+no0$ !e Queré)$ro ,or br%n!$r l$s%ns)$l$'%ones !e l$bor$)or%o re?uer%!$s ,$r$ lle&$r $ '$bo es)$ ,r')%'$4A-r$!e'e0os )$0b%én $l Dr4 Al!o A0$roRe<es ,or ,ro,or'%on$r l$ -lu'os$ ,$r$ ,o!er re$l%"$r l$ 'ur&$ !e '$l%br$'%+n !esu !e)er0%n$'%+n ,or el 0é)o!o !e DNS4As* 'o0o $ nues)r$ 'o0,$>ero M%-uelPn-el Br'en$s ,or ,ro,or'%on$r l$le&$!ur$ ,$r$ re$l%"$r l$ e)r$''%+nen"%0)%'$4

BIBLIO%RA<ÍA

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https://www.google.com.mx/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=6&cad=rja&uact=8&ved=0ahUKEwjWm7fKscrKAhVmuYMKHfdkBGMQFgg6MAU&url=http%3A%2F%2Fwww.biol.unlp.edu.ar%2Fqcabiolfarmacia%2Fguia1.doc&usg=AFQjCNEE8UliYu602KZz9eSHS_4u7SeF9Q&sig2=7maL4xBZWXzwxzBDcUXrMw&bvm=bv.112766941,d.amc
















G SOUTHGATE1 D4 De)er0%n$)%on o=Foo! C$rbo(<!r$)es4 5$ e!4 Else&%erA,,l%e! S'%en'e Lon!on $n! Ne Xor136634

ANEOS

Rac$"!o d Bradford' Se u)%l%"+ un ,re,$r$!o 'o0er'%$l S%-0$ Re=4 B96394

Rac$"!o d DNS' A'%!o 81;!%n%)ros$l%'*l%'o C:H.N5O: M 55713$l /13 ,&1 )$r)r$)o s+!%'o ,o)s%'oN$COO5CHOH5⋅.H5O M575158 $l 8/ ,& en NaO .PM 01/

1,0 M' D%sol&er 3 - !e '%!o 81;!%n%)ros$l%'*l%'o < 8// - !e )$r)r$)o s+!%'o ,o)s%'o en 5// 0l !e (%!r+%!o s+!%'o 5M 39 - !e N$OH en 5// 0l !e $-u$!es)%l$!$ < !%lu%r ($s)$ 3/// 0l 'on $-u$!es)%l$!$4 El re$')%&o !ebe -u$r!$rse en bo)e os'uro 'olor )o,$'%o1 s%en!oes)$ble !ur$n)e &$r%$s se0$n$s4

Soluc"-# d glucosa .C;&2O;, PM&=1/ 01 *M # agua ds$"lada4 D%sol&er

317 - !e -lu'os$ en 5;/ 0l !e $-u$!es)%l$!$4 L$ solu'%+n1 'u$n!o no se es)éu)%l%"$n!o1 se -u$r!$r en =r*o=r%-or*=%'o4

Soluc"-# d BSA 21 3g *l&' D%sol&er 3/ 0- en ;// 0l !e $-u$ !es)%l$!$ <$-%)$r l$ 0e"'l$ ($s)$ ?ue se ($<$!%suel)o )o!$ l$ ,ro)e*n$4

Soluc"-# d sacarosa .C&222O&& PM502,5/ 1,2 M # agua ds$"lada' 971; - l34 L$ solu'%+n !e s$'$ros$1 'u$n!o no sees)é u)%l%"$n!o1 se -u$r!$r en =r*o=r%-or*=%'o4

Ta*-# ac$a$o 1,& M, ,/ 3.7 0l!e A < 8;5 0l !e B se !%lu<en $ un&olu0en !e 3/// 0l4 A Solu'%+n !e'%!o $'é)%'o /15 M 331;; 0l en 3///0l4 BSoluc"-# d ac$a$o s-d"co 1,2 M 391.!e s$l $n(%!r$ + 5:15 - !e s$l )r%(%!r$)$!$en 3/// 0l4 L$ solu'%+n !el )$0,+n1'u$n!o no se es)é u)%l%"$n!o1 se -u$r!$ren =r*o =r%-or*=%'o4

Ta*-# ac$a$o 1,& M, ,1 # NaCl1, M' Me"'l$r 3.7 0l !e A < 8;5 0l !eB1 $>$!%r 5615 - !e N$Cl M ;71.. <!%lu%r $ un &olu0en !e 3/// 0l4 L$ssolu'%ones A < B1 son l$s !es'r%)$s ,re'e!en)e0en)e4 L$ solu'%+n !el )$0,+n1'u$n!o no se es)é u)%l%"$n!o1 se -u$r!$ren =r*o4

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