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INMUNOTERAPIAINMUNOTERAPIA
Luz Esmeralda Murcia UrregoLuz Esmeralda Murcia UrregoBacteriólogaBacterióloga
Alexandra Galeano GallegoAlexandra Galeano GallegoBioquímicaBioquímica
PROGRAMA DE ESPECIALIZACION EN MICROBIOLOGIA MEDICAPROGRAMA DE ESPECIALIZACION EN MICROBIOLOGIA MEDICAPONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANAPONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
INMUNOTERAPIAINMUNOTERAPIA
INMUNOTERAPIAINMUNOTERAPIA
Es el tratamiento y cura de Es el tratamiento y cura de enfermedades mediante la enfermedades mediante la manipulación, activación o manipulación, activación o estimulación del sistema inmune.estimulación del sistema inmune.
Incluye todos los tratamientos Incluye todos los tratamientos dirigidos a potenciar la inmunidad dirigidos a potenciar la inmunidad frente a una enfermedadfrente a una enfermedad
INMUNIZACIÓN
La inmunización es el proceso de inducir artificialmente la inmunidad o proporcionar protección de la enfermedad.
•Inmunización activa: es el proceso de estimular al organismo a producir anticuerpos y otras respuestas inmunes a través de la administración de una vacuna o toxoide.
•Inmunización Pasiva: Transmisión rápida de resistencia sin esperar a que se ponga en marcha la respuesta inmune activa.
INMUNIZACION ESPECIFICAINMUNIZACION ESPECIFICA
VACUNACIONVACUNACION Administración de antígenos.Administración de antígenos.
ANTICUERPOS MONOCLONALES CONJUGADOSANTICUERPOS MONOCLONALES CONJUGADOS Administración de proteínas recombinantes con capacidad de Administración de proteínas recombinantes con capacidad de
unión al antígeno, usualmente unidas a fármacos, unión al antígeno, usualmente unidas a fármacos, quimioterápicos, radioisótopos, etc. pero su uso aún no es quimioterápicos, radioisótopos, etc. pero su uso aún no es estándar.estándar.
INMUNOTERAPIA INMUNOTERAPIA ESPECÍFICAESPECÍFICA
En el tratamiento de las enfermedades En el tratamiento de las enfermedades alérgicas.alérgicas.
Mediante pautas establecidas de exposición Mediante pautas establecidas de exposición a concentraciones crecientes de alérgeno a concentraciones crecientes de alérgeno
Conduce a una insensibilidad de los Conduce a una insensibilidad de los linfocitos T específicos de alérgeno.linfocitos T específicos de alérgeno.
Dichas células progresivamente dejan de Dichas células progresivamente dejan de producir IL-4, IL-5 e IL-13 y pasan a producir producir IL-4, IL-5 e IL-13 y pasan a producir elevados niveles de IL-10 IgEelevados niveles de IL-10 IgE
INMUNOTERAPIA INMUNOTERAPIA ESPECÍFICAESPECÍFICA
La alergia al veneno de La alergia al veneno de abeja abeja
VenenoVeneno
Fosfolipasa Fosfolipasa A2 (PLA2)A2 (PLA2)
PéptidosPéptidosCélulas TCélulas T Células BCélulas B
tolerancia al tolerancia al alérgenoalérgeno
INMUNOTERAPIA INESPECIFICAINMUNOTERAPIA INESPECIFICA
BCG*: Produce una estimulación inespecífica BCG*: Produce una estimulación inespecífica del sistema retículo endotelial. Carcinomas de del sistema retículo endotelial. Carcinomas de vejiga.vejiga.
Citoquinas: disponibles en la actualidad por Citoquinas: disponibles en la actualidad por tecnología recombinante.tecnología recombinante. IFNIFNαα Leucemia mieloide crónica, leucemias de Leucemia mieloide crónica, leucemias de
bajo grado, mielomas, melanomas etc.bajo grado, mielomas, melanomas etc. IL-2:IL-2: Hipernefromas.Hipernefromas. NKNK Linfocitos del propio paciente estimulados Linfocitos del propio paciente estimulados
in-vitroin-vitro y re-infundidos. Melanomas. y re-infundidos. Melanomas.
*Bacilo de Calmette-Guerin
INMUNOTERAPIA ADOPTIVAINMUNOTERAPIA ADOPTIVA
Celular: Administración de células inmunitarias Celular: Administración de células inmunitarias obtenidas del paciente o de un donante más o obtenidas del paciente o de un donante más o menos específicas frente a tumores.menos específicas frente a tumores.
NKNK Linfocitos del propio paciente estimulados Linfocitos del propio paciente estimulados in-in-vitrovitro y re-infundidos. Melanomas. y re-infundidos. Melanomas.
LITLIT Linfocitos de tumor resecadoLinfocitos de tumor resecado Transplante alogénico.Ingerto contra leucemia.Transplante alogénico.Ingerto contra leucemia.
Humoral: Administración de sueros o Humoral: Administración de sueros o inmunoglobulinas de pacientes o animales inmunoglobulinas de pacientes o animales inmunizados frente a un tumorinmunizados frente a un tumor
COMPOSICION DE LAS COMPOSICION DE LAS VACUNASVACUNAS
Microorganismos vivos atenuados o inactivados, o Microorganismos vivos atenuados o inactivados, o fracciones del mismo.fracciones del mismo.
Líquido de suspensión, que pueden ser líquidos Líquido de suspensión, que pueden ser líquidos
salinos o complejos que contienen constituyentes salinos o complejos que contienen constituyentes derivados de sistemas biológicos.derivados de sistemas biológicos.
Preservadores, estabilizadores y antibióticos, Preservadores, estabilizadores y antibióticos, usados para inhibir el crecimiento bacteriano en usados para inhibir el crecimiento bacteriano en cultivos virales o el producto final o para cultivos virales o el producto final o para estabilizar antígenos.estabilizar antígenos.
Adyuvantes, que aumentan la respuesta a los Adyuvantes, que aumentan la respuesta a los
antígenos inactivados (aluminio, hidróxido o antígenos inactivados (aluminio, hidróxido o fosfato).fosfato).
VACUNASVACUNAS
Inactivadas:Inactivadas: Organismos completos inactivados por Organismos completos inactivados por calor, formalina, u otros agentes.calor, formalina, u otros agentes. BCG, Polio BCG, Polio
Antígenos purificados:Antígenos purificados: Proteína purificada, antígenos Proteína purificada, antígenos polisacáridos de organismos completos y toxoides. polisacáridos de organismos completos y toxoides.
Difteria Difteria
Producidos por Producidos por organismos genéticamente alteradosorganismos genéticamente alterados. . Hepatitis B Hepatitis B
Antígenos sintéticos:Antígenos sintéticos: modificados químicamente, modificados químicamente, conjugados a proteínas acarreadoras.conjugados a proteínas acarreadoras.
Péptidos Péptidos
ADN: logran que sea el propio huésped el que desarrolle el antígeno contra el germen inyectado, ofreciendo así una protección eficazmente superior frente al patógeno que invade el organismo.
Toxoides: Son toxinas bacterianas modificadas producidas en cultivo bacteriano que han perdido su toxicidad pero retienen habilidad para estimular la formación de antitoxina.
Difteria Tetanos
Células muertas: La proteína que expresa su antigenicidad se encuentra inactiva, pero expresa la proteína que activa el anticuerpo. Tifoidea
VACUNAS
ENFERMEDAD VACUNA DOSISNo. DE DOSIS
EDAD INTERVALOVIA Y SITIO DE APLICACION
REFUERZO
Tuberculosis Antituberculosa BCG
0.05 a 0.1 ml. según
casa productor
a
1Menores de un
añoNo tiene
Intradérmica región
supraescapular izquierda
No tiene
Poliomielitis Antipoliomielítica VOP 2 gotas 4Recién nacido
2,4,6 mesesCuatro
semanasOral
18 meses y 5 años
Hepatitis tipo b Antihepatitis B 1 ml. 3Recién nacido 2
y 6 mesesMínimo 4 semanas
Intramuscular región
anterolateral del muslo
No tiene
Difteria, Tosferina y Tétanos
DPT
0.5 a 1 ml. según casa
productora
3 2, 4 y 6 mesesMínimo 4 semanas
Intramuscular profunda glúteo
o muslo
18 meses y 5 años
Sarampión, rubéola, paperas y rubéola congénita
Triple Viral (SRP) 0.5 ml. 1 Un Año No tieneSubcutánea
brazo
10 años, MEF en Post-parto y Post-aborto
1a. dosis Inicial.
2a. dosis a las 4
semanas de la 1a.
3a. dosis a los 6 meses
de la 2a.
4a. dosis al año de la 3a.
5a. dosis al año de la 4a.
Neunonías y Meningitis por Haemophilus
Influenzae tipo b
Contra Haemophilus Influenzae Tipo B Hib
0.5 ml. 3 2, 4 y 6 mesesmínimo 4 semanas
Intramuscular glúteo
No requiere
Fiebre Amarilla Antiamarílica 0.5 ml. 1
Mayores de 1 año, toda la
población en áreas de alto y
mediano riesgo. En áreas no endémicas
deben vacunarse los que van a a salir fuera del
país
Dosis UnicaSubcutanea
brazoCada 10 años
Intramuscular brazo/glúteo
Una al Embarazo
Toxoide tetánico/diftérico TT o Td
Tétanos neonatal y difteria
0.5 ml. 5MEF (10 A 49
años)
ENFERMEDAD TIPO DE VACUNA EMPLEADA
DIFTERIA TOXOIDETETANOS TOXOIDETOSFERINA BACTERIAS MUERTAS (BORDETELLA PERTUSIS)FIEBRE TIFOIDEA BACTERIAS MUERTAS (SALMONELLA TYPHI)FIEBRE PARATIFOIDEA BACTERIAS MUERTAS (SALMONELLA PARATYPHI)COLERA CELULAS MUERTAS O EXTRACTOS DE CELULAS (VIBIRO CHOLERAE)PESTE CELULAS MUERTAS O EXTRACTOS DE CELULAS (YERSINIA PESTIS)TUBERCULOSIS CEPA ATENUADA DE MYCOBACTERIUM TUBERCULOSSIS (BCG)MENINGITIS POLISACARIDO PURIFICADO DE NEISSERIA MENINGITIDITISNEUMONIA BACTERIANA POLISACARIDO PURIFICADO DE STREPTOCOCCUS PNEUMONIAEFIEBRE TIFUS BACTERIAS MUERTAS (RTICKETTSIA PROWAZEKII)
VIRUELA CEPA ATENUADA (VACCIMIA)FIEBRE AMARILLA CEPA ATENUADASARAMPION CEPA ATENUADAPAROTIDITIS CEPA ATENUADARUBEOLA CEPA ATENUADAPOLIO CEPA ATENUADA (SABIN) O VIRUS INACTIVO (SALK)INFLUENZA VIRUS INACTIVADORABIA VIRUS INACTIVADO (HUMANO) O VIRUS ATENUADO (PERROS Y OTROS ANIMALES)
VACUNAS DISPONIBLES PARA ENFERMEDADES INFECCIOSAS DE HUMANOS
ENFERMEDADES VIRALES
ENFERMEDADES BACTERIANAS
ENFERMEDAD VACUNA
Cólera
Existe actualmente una vacuna oral
de bacterias vivas, atenuada por
ingeniería genética, derivada del
serotipo Inaba 569B.
Tiene una eficacia del 67- 100%.
Debe administrarse con al menos
una hora de ayuno previo y
posterior a la vacunación.
ENFERMEDAD VACUNA
Coqueluche (tos
convulsa)
La aparición de la vacuna bacteriana a
células enteras en la década del '50,
combinada con las de difteria y
tétanos, disminuyó en forma
espectacular la incidencia de la
coqueluche.
Actualmente, además de ésta, se ha
desarrollado otra con menos efectos c
ENFERMEDAD VACUNA
Difteria
El agente inmunizante es un toxoide
diftérico obtenido de cultivos de
Corynebacterium diphteriae productor
de toxina, e inactivado con formol
(asociado siempre con toxoide
tetánico).
Su eficacia es del 95% y es el único
método de control de la infección
ENFERMEDAD VACUNA
Fiebre amarilla
A virus vivos atenuados, provoca una
seroconversión del 95% entre los 7 y
21 días, lo que la convierte en una de
las vacunas más eficaces. Se refuerza,
si es necesario, cada 10 años (los
certificados de vacunación
internacionales, tienen esta validez).
ENFERMEDAD VACUNA
Fiebre tifoidea
La vacuna a células enteras muertas, ya no
se utiliza por sus efectos colaterales.
Actualmente existen dos: una con
polisacáridos capsulares purificados
(antígeno Vi), de administración
parenteral; y Otra oral, que contiene una
cepa mutante atenuada de S.typhi (Ty21a)
En abril del 2001, se conoció el desarrollo de una vacuna conformada por un polisacárido capsular de la Salmonella typhi Vi, unido a la exotoxina A de otra bacteria, la Pseudomona aeruginosa recombinante no tóxica (denominada rEPA).
ENFERMEDAD VACUNA
Gripe o
Influenza
La Organizacion Mundial de la Salud ha
implementado una red de monitoreo de los
virus gripales, en más de 80 países en todo
el mundo; esto le permite indicar las cepas
de los virus en circulación para la
preparación de las vacunas antigripales de
la siguiente temporada, siendo asi más
efectivas.
ENFERMEDAD VACUNA
Haemophilus
influenzae b
Las primeras vacunas fueron elaboradas
solamente con el polisacárido capsular
purificado. estas no protegían
adecuadamente a los menores de 2 años
(los más susceptibles).
Las vacunas actuales utilizan este
polisacárido (PRP) de la cápsula del bacilo,
conjugado con una proteína transportadora
("carrier": toxoide tetánico, diftérico o de
la membrana del meningococo). Se aplica
en forma intramuscular.
ENFERMEDAD VACUNA
Hepatitis A
En 1976 fue aislada en Australia, una cepa
del virus de hepatitis A, que condujo a la
vacuna. En 1988, comenzaron los ensayos
clínicos y su uso formal, se inició en 1991.
Es una vacuna que contiene virus
inactivados.
ENFERMEDAD
VACUNA
Hepatitis B
Las vacunas actuales, logradas por Ingeniería Genética, son lo más efectivo como prevención: utilizan el antígeno de superficie del virus B (HBsAg) y se producen con ADN recombinante. El gen es insertado en una levadura que se reproduce conteniendo el HBsAg. Su cultivo y posterior purificación determina una vacuna altamente efectiva.
VACUNA CONTRA LA HEPATITIS B
ENFERMEDAD
VACUNA
A Meningococo
Las vacunas están constituidas por polisacáridos. Desde 1981 se dispone de una vacuna combinada para los serogrupos A, C, Y y W-135. No se aconseja su aplicación en forma masiva, a menos que existan riesgos ciertos de epidemia. Los títulos de anticuerpos obtenidos luego de la vacunación descienden rápidamente y debiera hacerse una revacunación al cabo de algunos años.
ENFERMEDAD
VACUNA
A Neumococo
Esta vacuna polivalente fue elaborada con antígenos polisacáridos purificados de la cápsula de 23 serotipos, responsables del 85 a 90% de las infecciones neumocóccicas. Provee además, protección cruzada con otros serotipos.
Existe desde hace poco tiempo, una nueva presentación pediátrica, conteniendo siete serotipos, que puede usarse por debajo de los dos años.
ENFERMEDAD
VACUNA
Paperas o Parotiditis urliana
A virus vivos atenuados. En 1948 se produjo la primer vacuna a virus muertos, que luego de algunos años fue desestimada porque generaba corta inmunidad. En 1967 se licenció en EE.UU. la vacuna usada actualmente, conteniendo la cepa Jeryl Lynn, cultivada en embrión de pollo.
ENFERMEDAD
VACUNA
Poliomielitis
PVO (Poliovirus Oral): a virus vivos atenuados de tipo I, II y III, cultivados en células de riñón de mono. Es conocida como Sabin oral, haciendo honor al apellido de quién la desarrolló, el Dr. Albert Sabin.
PVI (Poliovirus Inactivados): también incluye 3 tipos, pero los PV son cultivados en células diploides humanas o Vero, e inactivados con formalina.
ENFERMEDAD
VACUNA
Rubeola
A virus vivos atenuados, se presenta en forma aislada o combinada con antiparotiditis y antisarampionosa.Ver (Triple viral).
Se comenzó a usar en 1969, con otras cepas distintas a la actual. La utilizada desde 1979 a la fecha, contiene la cepa RA 27/3, obtenida del cultivo de células diploides humanas.
ENFERMEDAD
VACUNA
Sarampión
Es una vacuna a virus vivos atenuados. Se presenta sola o combinada con antirrubeólica y antiparotiditis (Triple viral). La presentación combinada sólo con antirrubeólica se denomina Doble viral.
Aplicada antes de las 72 horas posteriores a la exposición, previene la enfermedad. En la actualidad se está trabajando en una vacuna en aerosol.
ENFERMEDAD
VACUNA
Tétanos
Agente inmunizante: está compuesta por toxoide tetánico inactivado con formol. Esta vacuna, luego de su administración según calendario en la infancia, mantiene efecto protector durante 10 años.
ENFERMEDAD
VACUNA
Tuberculosis
Es un liofilizado de bacterias vivas atenuadas, obtenidas de cultivo y atenuación de bacilos bovinos (Mycobacterium bovis), cuyo resultado final es la llamada BCG, por las primeras letras que identifican al Bacilo de Calmette-Guérin.En la actualidad hay varias líneas de trabajo en nuevas vacunas. Algunas derivadas de la BCG o combinadas; y otras aprovechando el descubrimiento del genoma del bacilo.
ENFERMEDAD
VACUNA
Varicela
A virus vivos atenuados, elaborada con una cepa atenuada (OKA) y cultivada en células humanas MRC-5. La vacuna se presenta liofilizada. Una vez diluida, debe ser aplicada dentro de los 30 minutos posteriores.
VACUNAS DE NUEVA GENERACIÓN
Se basa en la identificación de la proteína o proteínas de un agente infeccioso capaces de inducir una respuesta inmune protectiva de forma semejante a la que induciría el agente infeccioso completo
Mediante técnicas de ingeniería genética, se pueden seleccionar los genes correspondientes clonarlos y expresarlos en diferentes vectores o eliminarlos mediante una delección selectiva.
VACUNAS DE NUEVA GENERACIÓN
•La técnica de ADN recombinante: Vacuna de subunidades.
•La producción de proteínas sintéticas: Vacunas sintéticas.
PROTEÍNAS INACTIVADAS.
Las técnicas moleculares más utilizadas para la obtención de grandes cantidades de proteínas antigénicas en la actualidad son:
LA TÉCNICA DE ADN RECOMBINANTE
Una vez conocida el fragmento de ADN y su secuencia, la proteína de interés inmunológico, se aísla el fragmento de ADN (1), y se inserta en un plásmido (2). Este plásmido se introduce en un vector de expresión (E. coli, Baculovirus) (3). Algunos aceptarán el gen y producirán el recombinante (4). Otros, la mayoría, no (5).
MECANISMOS DE ACCION DE VACUNASMECANISMOS DE ACCION DE VACUNAS
Vacunas vivas atenuadasVacunas vivas atenuadas
Producen una respuesta inmunológica compleja Producen una respuesta inmunológica compleja simulando la infección natural.simulando la infección natural.
Variedad de antígenos. Variedad de antígenos.
Es de larga duración, posiblemente de por vida.Es de larga duración, posiblemente de por vida.
Puede ser inhibida por anticuerpos pasivos, ya sea Puede ser inhibida por anticuerpos pasivos, ya sea por la adquisición transplacentaria de la madre o por la adquisición transplacentaria de la madre o por recibir productos sanguíneos que contengan por recibir productos sanguíneos que contengan inmunoglobulinasinmunoglobulinas
MECANISMOS DE ACCION DE VACUNASMECANISMOS DE ACCION DE VACUNAS
Vacunas de antígenos inactivados o Vacunas de antígenos inactivados o purificadospurificados
Inducen respuesta únicamente a aquellos Inducen respuesta únicamente a aquellos
componentes presentes en la vacuna.componentes presentes en la vacuna.
Generalmente, son necesarias dosis Generalmente, son necesarias dosis múltiples, usualmente tres o más, para múltiples, usualmente tres o más, para inducir niveles de anticuerpos satisfactorios inducir niveles de anticuerpos satisfactorios que persistan por periodos largos. que persistan por periodos largos.
Las dosis de refuerzo a intervalos más Las dosis de refuerzo a intervalos más amplios (diez o más años) son necesarias amplios (diez o más años) son necesarias para asegurar una protección duradera.para asegurar una protección duradera.
VACUNAS ATENUADAS VACUNAS INACTIVADAS
Estimulación CD 4+ y CD 8+ Fundamentalmente CD 4+
CITOCINAS (Interferón) Menos CITOCINAS
MENOR ANTÍGENO MAYOR ANTÍGENO
MENOR ESTABILIDAD MAYOR ESTABILIDAD
ALMACENAMIENTO ALMACENAMIENTO
MENOS SEGURAS MÁS SEGURAS
ADYUVANTES NO CRÍTICOS ADYUVANTES SON CRÍTICOS
DETERMINANTES DE LA RESPUESTA
Los determinantes de la inmunogenicidad y respuesta a la vacuna, incluyen las características de la vacuna y del hospedero.
Las dosis vacunales deben ajustarse antes de su
aplicación. La ruta de administración. El tiempo de administración de la dosis de vacuna. Los factores intrínsecos genéticos (polimorfismo del
MHC), edad, debilidad extrema, inmunosupresión, y algunas enfermedades crónicas, etc.
C.A Janeway et al. ImmunoBiology (1999)
Anticuerpos contra Tumores
VACUNASVACUNAS ETAPAS PRE CLINICA ETAPAS PRE CLINICA
Síntesis y estudios acelulares y celulares.Síntesis y estudios acelulares y celulares. Propiedades físico-químicas.Propiedades físico-químicas. Efectos sobre sistemas acelulares y celulares.Efectos sobre sistemas acelulares y celulares.
Toxicidad agudaToxicidad aguda Dosis incrementadas.Dosis incrementadas. DL50DL50 DE50DE50
Toxicidad subaguda y crónicaToxicidad subaguda y crónica Efectos a largo plazo Efectos a largo plazo
(Teratogénicos,mutagénicos, carcinogénicos)(Teratogénicos,mutagénicos, carcinogénicos)
ENSAYO PRE-CLINICO ENSAYO PRE-CLINICO DE INMUNOGENICIDADDE INMUNOGENICIDAD
Ratones BALB/cRatones BALB/cHembrasHembras6-7 semanas6-7 semanas100 ratones100 ratones
INMUNIZACIONINMUNIZACION
Inmunización primariaInmunización primaria Inmunización secundariaInmunización secundaria Inmunización in vitroInmunización in vitro
Ag
GRUPOS DE TRABAJOGRUPOS DE TRABAJO
Nº AnimalesNº Animales FreundFreund MicroesferasMicroesferas MontanideMontanide ControlControl
DDCDDC
50ug50ug
1010 1010 1010 1010
250ug250ug 1010 1010 1010 1010
PolímeroPolímero
50ug50ug
1010 1010 1010 1010
250ug250ug 1010 1010 1010 1010
SPf66SPf66
50ug50ug
1010 1010 1010 1010
250ug250ug 1010 1010 1010 1010
ENSAYOENSAYO
ENSAYOS CELULARES
ELISPOT
Citoquinas Citometría de Flujo
RT-PCR
Linfoproliferación
Citoquinas por ELISA
Dormir con éter 5 minutos
Disección y perfusión del bazo
Obtención de 108 Esplenocitos aprox.
Criopreservación del 80% en DMSO
Criopreservación del 10% en Trizol
Montaje de ensayos celulares
con 10% Esplenocitos
Sangría por punción ocular Pipeta Pasteur o capilares
ENSAYOS HUMORALES
ENSAYO PRE-CLINICOENSAYO PRE-CLINICO DE TOXICIDAD DE TOXICIDAD
Animales: Ratones exogénicos ICR, 50%H / 50%M, 21 días de edad, 8-12 grs de peso.- Cantidad necesaria : 40 (20H / 20M) - Exclusión máxima : 10%- Origen: I.N.S.
20202020ACF4
20202020AlOH3
20202020Adyuvante B2
20202020Adyuvante A1
controlPep3Pep2Pep1
2ºSacrificio
21 3 4
Nacimientos
Semanas
Meses8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 210 1 2 3 4 5 6 7
1ºDosis 2º Dosis 1ºSacrificio 3º Dosis
5
VACUNASVACUNAS ETAPA CLINICAETAPA CLINICA
Evaluación del primer contacto del Evaluación del primer contacto del inmunoterápico en humanos.inmunoterápico en humanos. Fase I: Reclutamiento de voluntarios sanos. Fase I: Reclutamiento de voluntarios sanos.
Dosis: DMT.Dosis: DMT. Toxicidad: TL.Toxicidad: TL. Farmacocinética.Farmacocinética.
Fase II: Estimación de la actividad clínica de Fase II: Estimación de la actividad clínica de la droga.la droga. Actividad.Actividad. Efectos sin comparativos.Efectos sin comparativos.
VACUNASVACUNAS Fase III: Ensayo clínico comparativo.Fase III: Ensayo clínico comparativo.
Mejor o peor?Mejor o peor? Aprobación.Aprobación.
Fase IV: Evaluación de nuevas Fase IV: Evaluación de nuevas aplicaciones.aplicaciones. Dosis en ancianos, pacientes con falla renalDosis en ancianos, pacientes con falla renal Farmacovigilancia.Farmacovigilancia.
PROCESO, DESARROLLO Y APROBACIÓN DE NUEVAS VACUNAS
FASE I FASE II FASE IIINUMERO DE INDIVIDUOS
10-100 100-300 300-3000
INOCUIDAD
REACCIONES INDESEABLES
FABRICACION EN GRAN ESCALA
POTENCIALÍMITES DE CONFIANZA
AMPLIOS
LIMITES DE CONFIANZA
ESTRECHOSDISTRIBUCION
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
EFICACIAPROPORCIONA
DATOS MÍNIMOS
PROPORCIONA LA MAYORIA DE
LOS DATOS CRÍTICOS
APROBADO
CONTROL NACIONAL DE SALUD
PRODUCTO
REVISIÓN DE LOS ESTUDIOS
DEL PRODUCTO Y
DE LA DOCUMENTACI
ÓN PRESENTADA
PARA EL REGISTRO
INFORME DEL PRODUCTOR
A LA AUTORIDAD
NACIONAL DE SALUD
ESTUDIOS PRECLÍNICOS
DE LABORATORIO Y EN ANIMALES
EVALUAR INOCUIDAD Y ACTIVIDAD
BIOLÓGICA EN ANIMALES DE LABORATORIO
CORRELA-CIONES
POTENCIA - EFICACIA
AUTORIDAD
INFORME DEL PRODUCTOR
A LA AUTORIDAD
NACIONAL DE SALUD
VIGILANCIA DE INOCUIDAD EN
EL CAMPO
EDUCACION DE USUARIOS
FASES DE LA INVESTIGACIÓN CLÍNICA
REVELA EVENTOS DE
ALTA FRECUENCIA
REVELA EVENTOS DE FRECUENCIA MODERADA
REVELA EVENTOS DE
BAJA FRECUENCIA
INMUNIZACION ESPECIFICAINMUNIZACION ESPECIFICA
VACUNACIONVACUNACION Administración de antígenos.Administración de antígenos.
ANTICUERPOS MONOCLONALES CONJUGADOSANTICUERPOS MONOCLONALES CONJUGADOS Administración de proteínas recombinantes con capacidad de Administración de proteínas recombinantes con capacidad de
unión al antígeno, usualmente unidas a fármacos, unión al antígeno, usualmente unidas a fármacos, quimioterápicos, radioisótopos, etc. pero su uso aún no es quimioterápicos, radioisótopos, etc. pero su uso aún no es estándar.estándar.
ANTICUERPOS ANTICUERPOS
MONOCLONALESMONOCLONALES
Cultivo continuo de células fusionadas Cultivo continuo de células fusionadas
secretoras de anticuerpos con secretoras de anticuerpos con
especificidad predefinida.especificidad predefinida.
Köhler, G. Milstein,C. Nature 256 :1 495-7. 1975
APLICACIONESAPLICACIONES
MOLECULAS ASOCIADAS A SUPERFICIEMOLECULAS ASOCIADAS A SUPERFICIE
Diagnostico de infecciones.Diagnostico de infecciones. Diagnóstico e inmunolocalización de Diagnóstico e inmunolocalización de
tumores.tumores. Determinación de tipos celulares.Determinación de tipos celulares.
MOLECULAS SOLUBLESMOLECULAS SOLUBLES
Determinación y/o cuantificación de Determinación y/o cuantificación de proteínas, hormonas, enzimas proteínas, hormonas, enzimas medicamentos y drogas entre otros.medicamentos y drogas entre otros.
Ingeniería de Ingeniería de AnticuerposAnticuerpos
AntecedentesAntecedentes
Expresión y Presentación de AnticuerposExpresión y Presentación de Anticuerpos
Clonación del Repertorio de AnticuerposClonación del Repertorio de Anticuerpos
Ingeniería de AnticuerposIngeniería de Anticuerpos
PerspectivasPerspectivas
ADN RECOMBINANTE
S. Linn, W. Arber. PNAS 59: 1300-1306 (1968)
Restrictasas
Aislamiento de Genes Clonados
Ciclo de vida del Fago
F.R. Blattner et al. Gene, 2: 95-113 (1977) H. Lodish et al. Molecular Cell Biology, W.H. Feeman Ed. (1999)
GENES QUE CODIFICAN LA GENES QUE CODIFICAN LA MOLECULA DE AcMOLECULA DE Ac
ANTICUERPOS QUIMERICOSANTICUERPOS QUIMERICOS
ANTICUERPOS HUMANIZADOSANTICUERPOS HUMANIZADOS
Humanización de Anticuerpos
G.L. Boulianne et al. Nature 312: 643-646 (1984)
P.T. Jones et al. Nature 321: 522-525 (1986)
CONSTRUCTOS DE CONSTRUCTOS DE ANTICUERPOS ANTICUERPOS
RECOMBINANTESRECOMBINANTES
Constructos de Anticuerpos Recombinantes
Expresión y Presentación de Anticuerpos
Expresión de Anticuerpos
Sistemas de Presentación
M. Better, et al. Science 240: 1041-1043 (1988) A. Skerra, A. Pluckthun. Science 240: 1038-1041 (1988)
Expresión en E. coli
Expresión de Fragmentos Fab
VH - CH -S-S- CL - VL
Expresión de Fragmentos scFV
VH (Gly4Ser)3 VL
Expresión en Levaduras
Expresión en Hongos
Expresión en Células COS
Expresión en Células CHO Expresión en Animales transgénicos
SISTEMAS DE EXPRESION
Expresión en Plantas
R.T. Fraley et al. PNAS 80: 4803-4807 (1983)
Producción a bajo costo
Producción a gran escala
Correcto ensamblaje
Seguridad
Menor costo de capitalización
J.W. Larrick et al. Res. Immunol. 149: 603-608 (1998)
PLANTIBODIES
A. Hiatt et al. Nature 342: 76-78 (1989)
Expresión y Presentación de Anticuerpos
Expresión de Anticuerpos
Sistemas de Presentación
Presentación en Fagos
G.P. Smith, Science 228: 1315-1317 (1985) J. McCafferty et al. Nature 348: 552-554
(1990)
Plasmid with DNA insert
Presentación en Fagos
H. de Haard et al. Advance Drug Delivery Reviews 31: 5-31 (1998)
Imitando al Sistema Inmune !
RESUMIENDO
Los genes de anticuerpos se pueden clonar y expresar en diferentes sistemas
Presentación en Fagos: sistema efectivo para obtención de Fragmentos de Anticuerpos
Para recordar…..
Anticuerpos Monoclonales Murinos
Anticuerpos Quiméricos
Anticuerpos Humanizados
Anticuerpos de Librerías de Fagos
Anticuerpos Transgénicos
Perspectivas
AcMo anti - AcMo anti - tubulina tubulina
AcMo anti-FNTAcMo anti-FNT
INTRABODIESINTRABODIES
GRACIASGRACIAS
