sillabus 2015-1 Bio General

7/24/2019 sillabus 2015-1 Bio General

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FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y

CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA ACADMICA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUMICA

ESCUELA ACADMICA PROFESIONAL DE NUTRICIN HUMANA

GUA DE PRCTICAS DE BIOLOGA GENERAL

Lima Per

2015


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Elaborado y revisado por:

Blgo. MSc. Ethel Vania Mallqui Brito.

Blgo. MSc. Juana del Carmen Caldern Snchez.


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CONTENIDO

PRACTICA No. TEMA

1 Prctica No. 1:

Bioseguridad.

2 Prctica N 2:

Microscopa: Identificacin del microscopio compuesto.

3 Prctica N 3:

Reconocimiento de carbohidratos

4 Prctica N 4:

Reconocimiento de Lpidos

5 Prctica N 5:

Determinacin de Protenas

6 Prctica N 6:

Tcnicas de coloracin

7 Prctica N 7:

Diversidad de organismos: clula Eucariota: Animal y Vegetal

8 Prctica N 8:Observacin de protozoarios

9 Prctica N 9:

Permeabilidad celular

10 Prctica N 10:

Observacin de plastidios

ANEXOS


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INTRODUCCIN

Todos los seres vivientes estn formados por clulas; pero el nmero y la variedad de

las clulas difieren grandemente entre los distintos organismos. Algunos organismos se

componen solamente de una clula. Otros como los seres humanos, se componen de

billones de clulas La biologa como ciencia enmarca los principios bsicos del

conocimiento requerido sobre el estudio de los seres vivos. A travs de su desarrollo

ha surgido una diversidad de campos especializados dentro de lo que destaca la

Biologa Celular, la Gentica, con sus estudios del genoma humano, la Terapia Gnica

el desarrollo de animales y vegetales transgnicos, que nos sirven para la alimentacin

humana.

Para tener un mayor conocimiento acerca de la organizacin celular es necesario

partir del estudio de las diferentes molculas y estructuras que la conforman. Esto nos

permite enfocar los diferentes procesos celulares que se llevan a cabo en el entorno

celular. Para lo cual brindamos la presente gua de prcticas detallndose los

diferentes procesos y estructuras que permitan la comprensin de los procesos

biolgicos.


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RECOMENDACIONES GENERALES

Normas bsicas de conducta en el laboratorio

Como todo ambiente de trabajo, el laboratorio tiene una serie de normas, que rige la

conducta, deberes y obligaciones del personal que labora en l y que en una sola

palabra lo resumimos como BIOSEGURIDAD; por tal razn, es responsabilidad del

personal, respetar y hacer respetar stas normas en todo momento, a fin de evitar

errores en las investigaciones y/o accidentes. Las normas bsicas que debemos

practicar siempre son las siguientes:

1. La hora de entrada tendr 5 como mximo de tolerancia, despus de este

tiempo, no se permitir el acceso al laboratorio.

2. Al entrar al laboratorio, el alumno deber ponerse el guradapolvo blanco y

abotonarlo completamente, deber recogerse el cabello para as poder

efectuar el trabajo de laboratorio.

3. Limpiar y desinfectar el rea de trabajo antes y despus de usarla.

4. Las mochilas, maletines, etc., NO debern ser colocadas en las mesas de

trabajo.

5. No comer, ni fumar en el laboratorio, no introducirse ningn objeto a la boca.

6. Est PROHIBIDOel uso de telfonos celulares en el laboratorio y de cualquier

otro artefacto que distraiga la atencin del estudiante.

7.

El trabajo deber efectuarse en su sitio sentado y con su equipo de trabajo,hablar slo lo necesario con los compaeros. NO fomentar el desorden en el

laboratorio

8. Das antes de iniciar la prctica lea cuidadosamente que es lo que se va a

realizar, si no entiende pregunte al profesor. Si hay necesidad de llevar material

biolgico, es responsabilidad del alumno conseguirlo, de lo contrario la prctica

se suspender.

9.

Est PROHIBIDOabsorber o pipetear cualquier tipo de sustancia con la boca.Usar pro-pipetas (bombillas) u otro dispensador.


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10.El uso de guantes y mascarilla, estar restricto al tipo de prctica que se realice.

11.El uso de agujas, jeringas y cualquier otro instrumento similar deber ser

restringido a su uso indispensable. Las agujas y otros elementos punzantes

debern ser descartados en un recipiente resistente.

12.Asegurarse que los insumos, reactivos y soluciones estn debidamente

ROTULADOS y que los frascos o envases no estn deteriorados.

13.Dejar DESCONECTADOSlos equipos y CERRADASlas llaves de gas y grifos.

14.Informe al profesor de cualquier accidente que ocurra.

15.Lvese las manos con agua y jabn antes de salir del laboratorio.

16.Es obligacin de cada equipo entregar todo el material


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PRCTICA N 1

BIOSEGURIDAD

I. INTRODUCCIN

La seguridad biolgica o bioseguridad es la aplicacin del conocimiento, las tcnicas y

el uso de elementos y equipos para prevenir la exposicin del personal, el laboratorio y

el medio ambiente a agentes potencialmente infecciosos; entonces, seguridad se

refiere a realizar un trabajo seguro, libre de peligros, daos o riesgos, el aspecto bio

se refiere a la parte tcnica dada por los seres humanos, como es el adecuado manejo

de desechos txicos y patolgicos.

II. OBJETIVOS

1. Determinar los diferentes niveles de bioseguridad.

2. Establecer la importancia de los elementos de bioseguridad.

3. Comprender las normas generales de bioseguridad.

4. Reconocer algunos materiales y equipos utilizados comnmente en el

laboratorio de Biologa.

III. MARCO TERICO

A. Caractersticas generales del laboratorio

El ambiente de Laboratorio es el lugar donde el investigador lleva acabo sus pruebas y

ensayos experimentales, tratando de hallar, a travs de la experimentacin, respuestas

a hiptesis formuladas como consecuencia de una observacin determinada (mtodocientfico). Los resultados experimentales demostrables y repetitivos, forjaran una

teora que a lo largo del tiempo podra convertirse en una ley.

La experimentacin, como parte integral del mtodo cientfico, requiere de un

ambiente laboratorio, es decir, un lugar apropiado y acondicionado que garantice la

seguridad del personal, de la comunidad as como la seriedad de las investigaciones.

Segn el nivel de contencin, los laboratorios se pueden clasificar hasta en IV tipos,

siendo el nivel de contencin I el menos complejo en cuanto a diseo, infraestructura ydotacin de materiales, sin que esto lo haga menos seguro. Precisamente, el


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laboratorio para el curso de Biologa, est dentro de este nivel y cumple con las

caractersticas anteriormente citadas.

La infraestructura de un laboratorio es de material noble con acabados acordes y

seguros al nivel de contencin. El diseo corresponde al de un ambiente relativamente

amplio en rea y altura, con una capacidad 15 a20 personas, buena iluminacin y

ventilacin, cmodas mesas de trabajo superficies lavables y anticorrosivas con

instalaciones de agua luz y gas. Adems, debe contar con anaqueles o vitrinas que

permitan mantener seguros los materiales de vidrio, reactivos y equipos. Las paredes

deben estar pintadas de color claro con pintura epxica, de tal manera que cualquier

mancha por muestra biolgica o qumica sea fcilmente removible.

B. Tipos de laboratorio con relacin al nivel de riesgo.

a. Nivel de Bioseguridad 1 (NBS 1): Laboratorio bsico que permite el trabajo con

agentes de bajo riesgo, no est separado del edificio, el trabajo se realiza en

mesas de laboratorio. Son laboratorios que se encuentran en los centros de

salud, hospitales de nivel local, laboratorios de diagnstico, universidades y

centros de enseanza.

b. Nivel de Bioseguridad 2 (NBS 2):Laboratorio bsico que cuenta con cmaras

de bioseguridad y otros dispositivos apropiados de proteccin personal o de

contencin fsica. Cuenta con reas de trnsito limitado, se puede trabajar con

agentes de riesgo de clase II y III. Es utilizado en Hospitales regionales y

laboratorios de Salud Pblica.

c. Nivel de Bioseguridad 3 (NBS 3):Laboratorio que cuenta con reas de acceso

restringido y barreras de contencin para proteger al operador. Est destinado

para trabajar con agentes de clase III. Son laboratorios de diagnstico

especializado.

d. Nivel de Bioseguridad 4 (NBS 4): Laboratorio de contencin mxima que

cuenta con recintos separados o aislados, con sistemas de apoyo exclusivo, y en

cuyo diseo se incluyen barreras de contencin que dan proteccin mxima al

personal y/o comunidad. Sirve para trabajar con agentes de clase IV.


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C. Agentes de riesgo

a. Agentes biolgicos, transmitidos por ingestin, inhalacin, inoculacin y por

contacto directo a travs de piel o mucosas.

b.

Agentes fsicos y mecnicos, como las temperaturas extremas, radiaciones

ionizantes, contactos elctricos o conexiones defectuosas y vidrios

resquebrajados de recipientes daados.

c. Agentes qumicos que pueden ser corrosivos, txicos, carcingenos,

inflamables, explosivos.


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D. Clasificacin de los agentes biolgicos

Para saber a qu riesgos est expuesto el personal de laboratorio se tendr que saber

qu riesgos presenta el trabajar con un agente biolgico en concreto. Con este fin, se

han clasificado los agentes biolgicos en diferentes categoras segn su ndice de

riesgo. La clasificacin en categoras de riesgo es tanto para bacterias como virus y

hongos.

GRUPO I: Agentes con bajo riesgo para el individuo y la comunidad.

GRUPO II: Agentes con moderado riesgo individual y riesgo comunitario limitado.

GRUPO III: Agentes con elevado riesgo individual y bajo riesgo para la comunidad.

GRUPO IV: Agentes con alto riesgo para el individuo y para la comunidad.

IV. IDENTIFICACIN DE MATERIAL DE LABORATORIO:

Tubo de ensayo. Ah se observan las reacciones de las sustancias que se

depositan en l. Los hay de diferentes medidas.

Embudo.Es til para separar sustancias por medio de filtracin y para evitar su

desperdicio o derramamiento al ser cambiadas de un recipiente a otro.

Portaobjetos. Son laminillas de cristal que pueden ser cncavas, en ellas se

depositan sustancias para su observacin.

Cubreobjetos. Cubren y protegen las preparaciones u objetos que se

observarn al microscopio e impiden que se desprendan o muevan al ser

observados.

Mortero. Sirve para moler, triturar slidos o mezclar dos o ms sustancias

slidas

Mechero de alcohol. Se emplea como fuente de calor cuando se requiere

calentamiento lento. Al usarla debe cuidarse que la mecha est limpia y

recortada para que el calor que proporcione sea adecuado..

Matraz Erlenmeyer. Se utiliza para el armado de aparatos de destilacin o para

hacer reaccionar sustancias que necesitan un largo calentamiento. Tambin

sirve para contener lquidos que deben ser conservados durante mucho

tiempo.


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Matraz Aforado o fiolas . se emplea para medir con exactitud un volumen

determinado de lquido. La marca de graduacin rodea todo el cuello de vidrio,

por lo cual es fcil determinar con precisin cundo el lquido llega hasta la

marca.

Vasos de precipitacin o beakers. se utiliza muy comnmente en el

laboratorio, sobre todo, para preparar o calentar sustancias y traspasar

lquidos.

Desecador.Recipiente de vidrio que se utiliza para evitar que los solutos tomen

humedad ambiental. En , donde hay una placa, se coloca el soluto y un

deshidratante

Buchner y Kitasato. El Buchner es un embudo de porcelana, tiene una placafiltrante de agujeros grandes por lo que se necesita colocar un papel de filtro

circular, que acople perfectamente, para su uso. Se emplea para filtrar a

presin reducida. Su uso va unido al Kitasato, recipiente de vidrio con rama

lateral para conectar con la bomba de vaco (normalmente, una trompa de

agua).

Probeta.Recipiente de vidrio para medir volmenes, su precisin es bastante

aceptable, aunque por debajo de la pipeta. Las hay de capacidades muy

diferentes: 10, 25, 50, 100 , 500 y 1000 ml.

Pipetas.Recipientes de vidrio para medir volmenes, son de gran precisin. Las

hay de capacidades muy diferentes: 0'1, 1, 2 , 5 y 10 ml ; las ms precisas

miden I). En cuanto a la forma de medir el volumen, podemos distinguir entre:

graduadas (pueden medir cualquier volumen inferior al de su mxima

capacidad) y de enrase(solo miden el volumen que se indica).


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MATERIAL DE LABORATORIO


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VII. CUESTIONARIO

1. Enumere una relacin de 20 microorganismos causante de enfermedades en el

Per e indique en que nivel de bioseguridad se encuentra.

2. Defina que es contencin primaria y secundaria.

3.

Investigue 5 equipos de proteccin para el personal y 5 equipos de seguridad para

un laboratorio, mencione su uso y/o utilidad

4. Defina los siguientes conceptos: Asepsia, Contaminacin, Desinfeccin y

Esterilizacin.

5. Escriba la clasificacin por color de los residuos peligrosos biolgicos infecciosos

(RPBI)

Escriba la fuente bibliogrfica.


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PRCTICA N 2

MICROSCOPA

IDENTIFICACION DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

I. INTRODUCCIN

Desde Van Leeuvenhoek hasta nuestros das, la microscopa ha avanzado a tal punto

que, el hombre es ahora capaz de ver ms all de lo que poda ver hasta los aos 50,

con el desarrollo del microscopio electrnico. Sin embargo, el microscopio ptico de

campo claro ha sido, es y seguir siendo de gran utilidad en el laboratorio y en los

diversos campos de la ciencias biolgicas, por su relativa practicidad, fcil manejo y

poder de resolucin.

El microscopio es sin duda el elemento ms importante para el estudio de la

morfologa celular. El tipo de microscopio ms utilizado es el microscopio ptico, que

se sirve de la luz visible para crear una imagen aumentada del objeto. El microscopio

ptico ms simple es la lente convexa doble con una distancia focal corta. Estas lentes

pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo general se utilizan microscopios

compuestos, que disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos

mayores. Algunos microscopios pticos pueden aumentar un objeto por encima de las

2,000 veces, lo que resulta de gran utilidad considerando, por ejemplo, que una clulaanimal tpica mide entre 10 y 20de dimetro.

II. OBJETIVOS

1. Conocer las diferentes partes del microscopio compuesto y sus respectivas

funciones.

2. Reconocer la importancia del microscopio en el desarrollo de las ciencias

biolgicas.

III. MARCO TERICO

Partes del Microscopio

a. El pie, o base de sustentacin.

b. El brazoo columna.

c. La platina; que consiste en una plataforma horizontal con un orificio central

por donde pasa la luz. Es aqu donde se ubica la preparacin en un carro mvil

que permite desplazarla.


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d. El tubo ptico; es un cilindro metlico que lleva en el extremo prximo al

observador el ocular y el revlver en el extremo opuesto.

e. El revlver o portaobjetivos; es una pieza giratoria que posee diferentes lentes

objetivos, cada uno de ellos posee un aumento distinto. Al girar esta pieza es

posible utilizar estos lentes para la observacin.

f.

Los tornillos de focalizacin;el enfoque se realiza modificado la distancia entre

la preparacin y el objetivo. El ajuste se realiza con dos tornillos; el

macromtricoque se usa para los ajustes gruesos y el micromtrico para el

ajuste fino o de precisin. Este ltimo tiene una escala graduada, en donde

cada marca representa un avance de dos micrones.

g. Engranajes y cremallera; mecanismos de desplazamiento de las diferentes

partes del microscopio.

h. Cabezal; alberga prismas o espejos que sirven para acondicionar dos o ms

oculares, sistemas mecnicos que soporten cmaras, videos o proyeccin de

imagen.

i. El condensador; tiene como funcin principal concentrar y regular los rayos

luminosos que provienen de la fuente luminosa.

j. El diafragma o iris;se localiza en el condensador y permite regular la cantidad

de luz que sale de este.

k. Lentes objetivos; elementos ms importantes en la formacin de la imagen

microscpica se encuentran montadas en el revlver que permite su

intercambio durante la observacin. El objetivo menor tiene un aumento de

4X, los otros generalmente son 10X, 40X y 100X (inmersin).l. Lentes oculares; se encuentran en la parte superior del tubo, por lo general

tienen un aumento de 8X, 10X o 12X. Los oculares estn formados

generalmente por un sistema de dos lentes plano convexas simples o

compuestas, separadas por un diafragma interno. El lente inferior se denomina

"lente de campo" y tiene por funcin recoger la mayor cantidad de rayos

divergentes que vienen del objetivo. Tiene su foco en el diafragma y ah la

imagen es aumentada por el lente superior.

m.Prismas; microscopios modernos monoculares o binoculares, se requiere el

empleo de prismas estructuras transparentes en caso de monoculares sirvenpara desviar los rayos luminosos de la trayectoria rectilnea del eje ptico del

objetivo.

n. Fuente de Luz : La cual puede ser:

- Natural; emitida por el sol, se obtiene de manera indirecta mediante un

espejo.

- Artificial;se genera a travs de una lmpara de bajo voltaje.

IV. MATERIAL Y MUESTRA

MaterialMicroscopios compuestos.


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Portaobjetos, cubreobjetos.

Pipetas, goteros.

Material biolgico:

Agua estancada y laminas fijadas proporcionadas por el docente.

V. PROCEDIMIENTO

A. Cuidados del microscopio

Es importante tener en cuenta los siguientes cuidados y precauciones al usar el

microscopio:

Cuando se transporta el microscopio tmelo siempre con las dos manos. Nunca

tenga objetos adicionales en sus manos.

Al colocar el microscopio sobre la mesa de trabajo, sitelo a unos 10 o 15cm

del borde.

Si se requiere limpiar los lentes utilice solo el papel y una solucin destinada

para tal fin, no utilice ningn otro tipo de papel y/o solucin.

Cuando termine de trabajar deje el microscopio en el lento objetivo de 4X.

B. Reconocimiento de las partes del microscopio.

Siga atentamente las instrucciones del docente.

C. Observacin del agua estancada / lamina fijadas

1. Coloca una gota de agua estancada sobre un portaobjetos y cbrela con elcubreobjetos. De tratarse de las lamina fijadas colocarlas directamente.

2. Coloca la preparacin sobre la platina y sujtala con las pinzas.

3. Observa la preparacin con el objetivo de menor aumento.

4. Acciona el tornillo micromtrico, mirando por el ocular hasta que alcances elpunto de enfoque.

5. Cuando puedas observar la preparacin, afina el enfoque con el tornillomicromtrico.

6. Puedes observar con el objetivo de mayor aumento girando el revlver.

7. Grafica tus resultados.


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VI. RESULTADOS


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GRFICO

Identifique las partes del microscopio


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VII. CUESTIONARIO

1. Cules son los sistemas que conforman un microscopio?

2. Qu funcin tiene el aceite de inmersin cuando se observa con el objetivo de

100 aumentos?

3. Cuntos tipos de microscopios pticos existen?

4.

Cul es el fundamento del microscopio electrnico y cuantos tipos existen?5. Defina la importancia del microscopio para el investigador Qumico farmacutico y

Nutricionista.



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PRCTICA N3

RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS

I. INTRODUCCIN

Los carbohidratos o hidratos de carbono glcidos constituyen compuestos qumicos

formados principalmente por carbono, hidrgeno y oxgeno, elementos que se

conjugan para formar diversos tipos, en una proporcin generalmente de 1:2:1,

respectivamente.

Qumicamente se definen como polialcoholes con un grupo aldehdo o cetona. Estas

Biomolculas ejercen funciones fundamentales en los seres vivos, como: soporte

(celulosa), reserva de alimento (almidn), reserva energtica (glucgeno), energa

inmediata (glucosa).

Pueden clasificarse atendiendo a varios criterios: de acuerdo al nmero de monmeros

que constituyen al carbohidrato, al nmero de carbonos de sus monmeros, segn el

grupo funcional que posee ese monmero.

Responden a la frmula general:

II. OBJETIVOS

1. Reconocer los carbohidratos por medio de reacciones coloreadas de carcter

cualitativo.

2. Diferenciar e identificar azucares reductores y no reductores

III. MARCO TERICO

Para el reconocimiento de los carbohidratos existen diferentes mtodos:

Entre los mtodos cualitativos basados en las propiedades fsicas de los carbohidratos

estn las cromatografas en papel y capa fina, la cromatografa gas-lquido, la de

intercambio inico, la electroforesis, la refractometra, la polarimetra y la

espectroscopia de rayos infrarrojos.

Los mtodos qumicos estn los basados en reacciones que dan origen a compuestos

coloreados, tales como las que se dan despus de tratar los monosacridos con cido


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mineral fuerte y hacer reaccionar el furfural o hidroxifurfural formado, con

compuestos orgnicos tales como fenoles, aminas aromticas, urea y entre otras. De

la misma forma, tambin se hace uso de su capacidad reductora, hacindolos

reaccionar con sales de metales como el cobre, hierro, yodo, plata y cerio.

Por ltimo, tambin es posible su anlisis basndose en la capacidad de formar

complejos coloreados con el yodo, tal como sucede con el almidn.

En relacin con los mtodos bioqumicos de anlisis de carbohidratos, estos pueden

ser microbiolgicos o enzimticos.

IV. MATERIALES Y MUESTRAS

- Tubos de ensayo - Gradilla

- Mechero - Pizetas con agua destilada

- Pipetas - Pinzas

- Reactivo de Benedict - Solucin de Lugol

- Soluciones al 5% de glucosa, sacarosa y almidn.

V. PROCEDIMIENTO

1. RECONOCIMIENTO DE AZCARES REDUCTORES

REACTIVO DE BENEDICTLos monosacridos tienen poder reductor debido a los radicales aldehdo o cetona de

sus molculas. Los disacridos con enlace glucosdico entre un radical reductor y un

grupo alcohol tambin tienen poder reductor. Si el enlace se realiza entre los dos

radicales reductores (carbonos carbonlicos), no tienen poder reductor. Este poder

reductor puede ponerse de manifiesto frente a sales de cobre, ya que el in cprico se

reduce por ganancia de un electrn, pasando a in cuproso en un medio alcalino:

Esta reaccin es especfica para azcares con grupo reductores libres (C=O).

Todos los monosacridos poseen un grupo reductor libre. Los disacridos maltosa y

lactosa tienen grupos reductores libres, pero la sacarosa no los posee, ya que se

pierden los grupos reductores de sus componentes cuando sta es formada.

La accin reductora se manifiesta mediante una solucin de sulfato cprico (SO4Cu) de

color azul, que pasa a xido cuproso (Cu2O) de color rojo ladrillo que precipita. El

reactivo utilizado es el de Benedict o el de Fehling, que contienen sulfato cprico. Una


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turbidez verde-amarillenta en los resultados indica un 0,1-0,3% de azcar reductor. Un

precipitado de color mbar anaranjado, indica ms de un 1,5% de azcar reductor.

La coloracin depender de la concentracin de xido de cobre y sta a su vez de la

reduccin del cobre; va desde verde, amarillo, anaranjado o rojizo.

Identificacin cualitativa de azcares reductores con el reactivo de Benedict

Tubo N 1 Tubo N 2 Tubo N 3 Tubo N 4

-Adicionar10 gotas

de agua destilada

-Adicionar10 gotas

de glucosa

-Adicionar10 gotas

de sacarosa

-Adicionar10 gotas

de almidn-Adicionar10 gotas

del reactivo de

Benedict

-Adicionar 10 gotas

del reactivo de

Benedict

-Adicionar 10 gotas

del reactivo de

Benedict

-Adicionar 10 gotas

del reactivo de

Benedict

- Calentar con

ayuda del mechero

hasta hervor

-Calentar con ayuda

del mechero hasta

hervor

-Calentar con ayuda

del mechero hasta

hervor

-Calentar con ayuda

del mechero hasta

hervor

Resultado: Resultado: Resultado: Resultado:

2. RECONOCIMIENTO DE ALMIDONES

REACTIVO DE LUGOL

El Lugol (solucin de yodo-yodurado) colorea las micelas de almidn de color azul

intenso casi negro. El almidn es una mezcla (en diferentes proporciones segn las

especies) de los polisacridos amilosa (10-20%) y amilopectina (80-90%). El almidn es

coloreado de azul en presencia de Lugol, debido a una adsorcin o fijacin del I-3sobre

las unidades de glucosa de la amilosa, y ayuda a mantener su estructura. Al calentarhasta ebullicin, desaparece la estructura ternaria (incoloro) y reaparece al enfriar

(azul-violeta).

Identificacin cualitativa de almidn con el reactivo de Lugol

Tubo N 1 Tubo N 2

- Adicionar 5 gotas de agua destilada - Adicionar 5 gotas de almidn

- Adicionar 5 gotas de lugol - Adicionar 5 gotas de lugol

- Resultado: - Resultado


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VI. RESULTADOS

GRAFIQUE E INTERPRETE LOS RESULTADOS

RECONOCIMIENTO DE AZCARES REDUCTORES

(Escriba la reaccin de cada una de las pruebas realizadas)


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RECONOCIMIENTO DE ALMIDONES

(Escriba la reaccin de la prueba realizada)


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VII. CUESTIONARIO

1. Qu otros reactivos qumicos se utilizan para la identificacin de

carbohidratos, explique su fundamentos de cada uno de ellos?

2. Cite 5 ejemplos de carbohidratos reductores y no reductores.

3.

Por qu se considera reductor un azcar?

4. A qu se debe que el almidn con Lugol pierda el color al calentar, y

que vuelva a recuperar su color azul-violeta despus de enfriarse



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PRCTICA N4

RECONOCIMIENTO DE LPIDOS

I. INTRODUCCION

Los lpidos o grasas, son molculas orgnicas ternarias, formadas por carbono

hidrgeno y oxgeno, aunque este ltimo en porcentaje muy bajo. Qumicamente son

steres de glicerol con cidos carboxlicos que, en sus formas ms complejas pueden

tener fsforo, nitrgeno y azufre. A pesar de su heterogeneidad se caracterizan por ser

insolubles en agua y solubles en disolventes orgnicos, como cloroformo, benceno,

ter etc.

II. OBJETIVO

1. Conocer el comportamiento de los lpidos; su reaccin ante algunos reactivos.

Sus caractersticas esenciales como lpidos.

III. MARCO TERICO

En trminos generales llamamos aceites a los triglicridos de origen vegetal, y

corresponden a derivados que contienen cidos grasos insaturados

predominantemente por lo que son lquidos a temperatura ambiente. (Aceites

vegetales de cocina, y en los pescados.

Los lpidos desempean diferentes tipos de funciones biolgicas:

Funcin de reserva energtica. Los triglicridos son la principal reserva de

energa de los animales ya que un gramo de grasa produce 9 kilocaloras en las

reacciones metablicas de oxidacin, mientras que las protenas y los glcidos

slo producen 4 kilocaloras por gramo.

Funcin estructural. Los fosfolpidos, los glucolpidos y el colesterol forman las

bicapas lipdicas de las membranas celulares. Los triglicridos del tejido adiposo

recubren y proporcionan consistencia a los rganos y protegen mecnicamente

estructuras o son aislantes trmicos.

Funcin reguladora, hormonal o de comunicacin celular. Las vitaminas

liposolubles son de naturaleza lipdica (terpenos, esteroides); las hormonas

esteroides regulan el metabolismo y las funciones de reproduccin; losglucolpidos actan como receptores de membrana; los eicosanoides poseen
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un papel destacado en la comunicacin celular, inflamacin, respuesta inmune,

etc.

Funcin transportadora. El transporte de lpidos desde el intestino hasta su

lugar de destino se realiza mediante su emulsin gracias a los cidos biliares y a

las lipoprotenas.

La caracterstica comn a todos los lpidos es que son insolubles en agua y solubles en

disolventes orgnicos como la gasolina, benceno, xilol, cloroformo.

Las grasas son insolubles en agua. Cuando se mezcla agua y aceite y se agita

fuertemente la mezcla, se forma una emulsin transitoria. Esto significa que si se deja

la mezclareposar unos instantes, las gotas de aceite, de menor densidad, suben y se

unen entre s, formndose dos capas, la superior de aceite y la inferior de agua.

Si a esta mezcla se la aade una solucin de jabn o detergente y se agita, se produce

entonces una emulsin permanente. Esto es debido a que el jabn rodea a las gotas

de aceite quedando su parte hidrofbicas (cola del cido graso) en contacto con el

aceite y su zona polar (COO Na+) en contacto con el agua. Esto es lo que da a los

jabones en general, sus cualidades como agentes de limpieza y es una propiedad muy

utilizada en la fabricacin de cosmticos que tienen en su composicin agua y aceites,

consiguindose un producto homogneo (se evita la formacin de dos fases).


- Gradilla - Tubos de ensayo - Aceite vegetal

- Pizeta s - Cloroformo o ter - Mechero

- NaOH 20% - Sudan III - Pinzas

- Pipetas - Solucin de detergente

V. PROCEDIMIENTO

1. SAPONIFICACIN

Los lpidos reaccionan en calor con el NaOH o KOH descomponindose en glicerina y

cidos grasos. Los cidos grasos se combinan con los iones sodio o potasio del

hidrxido para dar jabones, que son las sales sdicas o potsicas de los cidos grasos.

En los seres vivos, la hidrlisis de las grasas neutras (acilglicridos) se realiza mediante

la accin de lipasas que terminan formando cidos grasos y glicerina. En la prctica,

evidenciaremos este fenmeno de la siguiente manera:


29/66

29

1. zona inferior clara que contiene la sosa con glicerina

2. zona media semislida que es el jabn formado

3. Zona superior de aceite inalterado

Tubo N 1 Tubo N 2

- Colocar 2 ml de agua destilada - Colocar 2 ml de aceite

- Agregar 2 ml de NaOH - Agregar 2 ml de NaOH

- Agitar vigorosamente y llevarlo al calor - Agitar vigorosamente y llevarlo al calor

Resultado Resultado

2. PRUEBA DE SOLUBILIDAD

Los lpidos, debido a que son compuestos apolares, son insolubles en agua. Cuando se

agitan en ella, se dividen en pequesimas gotculas formando una emulsin transitoria

que desaparece en reposo por reagrupacin de las gotculas y, que al ser menos

densas, se sita sobre el agua. Por el contrario, las grasas son solubles en disolventes

orgnicos apolares, como el ter y el cloroformo.

Tubo N 1 Tubo N 1 Tubo N 1

Colocar 2 ml de agua Colocar 2ml de ter u otro

disolvente

Colocar 2ml agua y un

pizcade detergente.

Agitar fuertemente los tubos y dejar reposar.

Resultado Resultado Resultado


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30

Se ver cmo el aceite se ha disuelto en el ter y, en cambio no lo hace en el agua y el

aceite subir debido a su menor densidad, y con el agua y detergente la solubilidad es

parcial.

3. TINCIN CON SUDN III

Las grasas se colorean en rojo anaranjado por el colorante denominado Sudan

III.

Colocar 2 ml de aceite en un tubo

Aadir 2 ml de agua y dejar reposar

Una vez formadas las dos fases, dejar caer unas gotas de Sudn III y agitar.

Dejar reposar el tubo.

Resultados

V. RESULTADOS


SAPONIFICACION


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31

SOLUBILIDAD

TINCION CON SUDAN III


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VI. CUESTIONARIO

1. Qu enzima logra en el aparato digestivo la hidrlisis de las grasas?

2.

Qu es el Sudan III?

3. Qu es una emulsin?

4. Qu son las sales biliares y cules son sus funciones?



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33

PRCTICA N5

DETERMINACION DE PROTENAS

I. INTRODUCCIN

Las protenas son macromolculas formadas por carbono, hidrgeno, oxgeno y

nitrgeno, pudiendo contener adems azufre y en algunos tipos de protenas, fsforo,

hierro, magnesio y cobre entre otros elementos. Son susceptibles de desnaturalizarse

bajo determinadas circunstancias y perder su actividad biolgica. Pueden considerarse

polmeros de aminocidos los cuales se unen por enlaces peptdicos y tienen como

principal caracterstica su naturaleza anftera dependiente del pH.

Estn ampliamente distribuidas en todos los seres vivos, donde se encuentran

formando polmeros complejos ya sean estructurales o funcionales. Tambin se

pueden encontrar formando lipoprotenas para cumplir con funciones ms complejas

como la de las membranas celulares. Algunas protenas cumplen funciones

catalizadoras de vital importancia en el metabolismo.

II. OBJETIVO

1.

Identificar la presencia de protenas es diversos alimentos por medio dediferentes reacciones.

III. MARCO TERICO

Las protenas son macromolculas compuestas por carbono, hidrgeno, oxgeno y

nitrgeno. La mayora tambin contienen azufre y fsforo. Las mismas estn formadas

por la unin de varios aminocidos, unidos mediante enlaces peptdicos. El orden y

disposicin de losaminocidos en una protena depende del cdigo gentico, ADN, de

la persona.

Las protenas desempean un papel fundamental para la vida y son las Biomolculas

ms verstiles y ms diversas. Son imprescindibles para el crecimiento del organismo.

Realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, entre las que destacan:

Estructural (colgeno y queratina).

Reguladora (insulina y hormona del crecimiento).

Transportadora (hemoglobina).

Defensiva (anticuerpos),

Enzimtica (sacarasa y pepsina).

Contrctil (actina y miosina).
http://www.zonadiet.com/nutricion/amacido.htmhttp://es.wikipedia.org/wiki/Anticuerposhttp://es.wikipedia.org/wiki/Anticuerposhttp://www.zonadiet.com/nutricion/amacido.htm


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Son esenciales para el crecimiento.Las grasas y carbohidratos no las pueden

sustituir, por no contener nitrgeno.

Proporcionan los aminocidos esenciales fundamentales para la sntesis tisular.

Son materia prima para la formacin de los jugos digestivos, hormonas,

protenas plasmticas, hemoglobina, vitaminas y enzimas.

Funcionan como amortiguadores, ayudando a mantener la reaccin de diversos

medios como el plasma.

Las protenas estn formadas por aminocidos. Las protenas de todo ser vivo estn

determinadas mayoritariamente por su gentica (con excepcin de algunos pptidos

antimicrobianos de sntesis no ribosomal), es decir, la informacin gentica determina

en gran medida qu protenas tiene una clula, un tejido y un organismo.


- Tubos de ensayo - NaOH 20% - Alcohol

- Gradilla - HCl concentrado - Reactivo de Biuret

- Pizetas - Pinzas -Acetato de plomo

- Mechero - Pizetas -Huevo (ovoalbmina)

V. PROCEDIMIENTO

1. COAGULACIN DE LAS PROTENAS

Las protenas, debido al gran tamao de sus molculas, forman con el agua soluciones

coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formacin de cogulos al ser

calentadas a temperaturas superiores a los 70C o al ser tratadas con soluciones

salinas, cidos, alcohol, etc.

La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a su

desnaturalizacin por los agentes indicados, que al actuar sobre la protena la

desordenan por la destruccin de su estructura secundaria, terciaria y cuaternaria.

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4

- 2 ml agua destilada - 2 ml alcohol -2 ml HCL concent. - 2 ml de NaOH 20%

- Adicionar 1 ml

ovoalbmina y

calentar al mechero

-Adicionar 1 ml

ovoalbmina

-Adicionar 1 ml

ovoalbmina

- Adicionar 1 ml

ovoalbmina

Resultado Resultado Resultado Resultado
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2. REACCIN DE BIURET

Esta reaccin la producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos ya que

se debe a la presencia del enlace peptdico CO-NH que se destruye al liberarse los

aminocidos.

El reactivo de Biuret contiene CuSO4en solucin acuosa alcalina (gracias a la presencia

de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin de un compuesto de color

violeta, debido a la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+

y

los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces

peptdicos. La intensidad de color depende de la concentracin de protenas.

La presencia de protenas en una mezcla se puede determinar mediante la reaccin del Biuret. El reactivo de Biuret contiene

CuSO4en solucin acuosa alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin de un compuesto

de color violeta, debido a la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+

y los pares de electrones no

compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos

Tubo 1 Tubo 2Adicionar 3 ml agua destilada Adicionar 3 ml ovoalbmina

Adicionar 1ml del reactivo de Biuret Adicionar 1ml del reactivo de Biuret

Agitar para que se mezcle bien Agitar para que se mezcle bien

Resultado Resultado

3. REACCIN DE AMINOCIDOS AZUFRADOS

Se basa en la separacin, mediante un lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al

reaccionar con una solucin de acetato de plomo en calor, forma sulfuro de plomo que

se pone de manifiesto por la formacin de un precipitado negro (reaccin positiva).

Colocar en un tubo de ensayo 23 ml de ovoalbmina

Adicionar 2ml de NaOH.

Adicionar 10 gotas de acetato de plomo

Calentar el tubo hasta ebullicin.

Resultados


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VI. RESULTADOS


COAGULACIN DE LAS PROTENAS

REACCIN DE BIURET



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REACCIN DE AMINOCIDOS AZUFRADOS



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VII. CUESTIONARIO

1. Qu es la desnaturalizacin y cul de los agentes utilizados tiene mayor poder de

desnaturalizacin?

2. Cmo podramos saber que una sustancia desconocida contiene o es una

protena?

3.

Una protena coagulada podra dar positiva la reaccin del Biuret?

4. Si se realiza la reaccin del Biuret sobre un aminocido como la Glicina es positiva

o negativa? Por qu?.



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PRCTICA N6

TCNICAS DE COLORACIN

I. INTRODUCCION

El imperceptible tamao de las bacterias y otros microorganismo, as como la dificultad

para observarlas en detalle con el microscopio ptico por causa de la falta de contraste

que existe entre estos, debido a que son usualmente transparentes en el medio que

les rodea; hizo que se crearan mtodos para poder apreciarlas, siendo los mtodos

ms sencillos en de fijacin y tincin; iniciados por Paul Ehrlich y Roberto Koch, los que

permitieron a los microbilogos distinguir muchas caractersticas estructurales

normalmente vistas; as el uso de colorantes, es el medio ms simple e aumentar el

contraste. Estos pueden utilizarse para distinguir entre distintos tipos de clulas o para

apreciar la presencia de algunos elementos celulares, como flagelos, esporas, capsula,

paredes celulares, mitocondrias, ncleos, membranas celulares, entre otras.

Existen numerosas colorantes y en su mayora son compuestos orgnicos naturales

que tiene alguna afinidad especifica por los materiales celulares. Los colorantes que se

utilizan usualmente son molculas cargadas positivamente (cationes) que se combinan

con intensidad con los componentes celulares cargados negativamente, tales como loscidos nuclecos y los polisacridos , entre estos podemos mencionar al azul de

metileno, el cristal violeta y la safranina; otros colorantes son molculas cargadas

negativamente (aniones) los que se combinan con los elementos celulares cargados

positivamente, como las protenas y entre ellos podemos mencionar a la eosina, la

fucsina acida y el rojo cong. Existe otro grupo de colorantes formados por sustancias

liposolubles; los colorantes de este grupo se combinan con los materiales lipdicos de

la clula, usndose generalmente para revelar la localizacin de los depsitos de grasas

como es el caso del colorante negro de sudan.

La tincin de Gram es uno de los mtodos de tincin ms importantes en el

laboratorio, Su aplicacin prctica es innegable sobre todo en el trabajo microscopio

de rutina; las referencias a la morfologa celular bacterianas (cocos, bacilos, espirilos,)

como su clasificacin en positivas o negativas se basan precisamente en la tincin de

GRAM.


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II. OBJETIVOS

1. Realizar tincin simple de bacterias obtenidas de muestras biolgicas.

2. Observar las diferencias de forma y tamao de las bacterias a partir de

muestras coloreadas.

3.

Adiestrar al alumno en el manejo del microscopio ptico.

III. MARCO TERICO

La tincin de Gram, tambin conocida como coloracin de Gram, es una tcnica de

laboratorio que se utiliza rutinariamente en los estudios microbiolgicos de las

bacterias. Fue diseada por Christian Gram, un cientfico dans, en el ao 1884. El

objetivo de Gram era conseguir una prueba con la que fuera posible diferenciar

diferentes grupos de bacterias para as poder estudiarlas y clasificarlas. La prueba

result todo un xito y pronto se convirti en una tcnica muy til no solo para el

estudio de las bacterias, sino tambin para poder identificarlas rpidamente en una

infeccin y seleccionar elantibiticoms adecuadopara tratarla.

La tcnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier origen

(esputo, orina, pus, etctera) que supuestamente contenga bacterias no identificadas.

Los colorantes tien la pared de las bacterias de color morado y, tras unos minutos, se

realiza un lavado del colorante. Despus de eso puede que el colorante permanezca en

la pared bacteriana o que se haya ido. En el primer caso permanecera el color

morado, y se tratara de bacterias Gram positivasy, en el segundo, la pared tendra un

color rosado, y seran Gram negativas.

Estos dos grupos de bacterias son los pilares en los que se basa la clasificacin de la

amplia mayora de las bacterias. Cada uno de los grupos responde de forma diferente a

cada tipo de antibiticos, por eso es una tcnica til para seleccionar el frmaco

antimicrobiano inicial ante una infeccin. Hay que tener en cuenta que en ciertas

situaciones (como la sepsia) es muy importante iniciar un tratamiento antibitico

adecuado de forma precoz, por eso la tincin de Gram se pide de urgencia en muchas

ocasiones.

La tincin de Gram tambin tiene ciertas limitaciones. Algunas bacterias no tienen

pared, como por ejemplo las Chlamidias, y no se podrn identificar, al igual que los

virus. En esos casos la tincin no colorear ningn germen. Otro aspecto negativo de la

prueba es que no puede identificar el tipo exacto de bacteria responsable de la

infeccin. Para ello es necesario realizar un cultivo microbiolgico que se acompaa

siempre de un antibiograma para estudiar de forma exacta el antibitico ms efectivo.


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a. PARED BACTERIANA

Debajo de las sustancias extracelulares tales como las cpsulas o capas mucosas y

externas a la membrana citoplasmtica est la pared bacteriana que es una estructura

muy rgida y que da forma a la clula bacteriana. Las paredes celulares bacterianas son

esenciales para el crecimiento y la divisin. Todas las bacterias poseen paredes

celulares rgidas que protegen a la clula de explotar en medios de baja presin

osmtica.

Composicin qumica de las paredes celulares.

El pptidoglucano proporciona a la pared celular una estructura rgida. Estos grandes

polmeros, estn compuestos de tres clases de bloques estructurales: N- Acetil-

Glucosamina, cido N- Acetil-Murmicoy un pptido que consta de cuatro o cinco

aminocidos. Adems contiene protenas con polisacridos, lipoprotenas y

lipopolisacridos.

Propiedades y Funciones:

Brinda proteccin y resistencia a la bacteria frente a los posibles cambios de

presin osmtica del medio en el que se encuentra y a la accin de ciertos

agentes externos.

Presenta poros que actan como filtros, permitiendo el pasaje de aguay

metabolitos esenciales.Presenta antgenos de tipo y grupo especficos.

Participa en la divisin (multiplicacin) bacteriana (se invagina junto con la

membrana plasmtica).

b. MTODO DE TINCIN DE GRAM

A pesar de que fue desarrollada en el siglo XIX la tincin de Gram es la ms utilizada en

el diagnstico microbiolgico. La tincin de Gram es una tincin diferencial que

permite distinguir dos grandes grupos bacterianos: las Gram (+) y las Gram (-).Tincin empleada en microbiologa para la visualizacin de bacterias en muestras

clnicas. Tambin se emplea como primer paso en la diferenciacin bacteriana. El

examen con microscopio ptico de preparacin con tincin de Gram se emplea de

rutina para determinar la forma de las bacterias. Las formas comunes son cocos

(esfricas), bacilos (alargadas) y formas espiraladas Las bacterias pueden diferenciarse

con esta tincin en dos grupos. Los microorganismos Gram positivos se tien de

violeta, y si se tie de rojo se dice que son Gramnegativos.


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Formas ms comunes de las bacterias.

El valor diagnstico de esta tincin es variable; normalmente permite una buena

orientacin al microbilogo para seleccionar las tcnicas de cultivo ms adecuadas y

tambin tiene valor en orientar hacia un diagnstico etiolgico, en especial para

instaurar un tratamiento inicial.

La tincin de Gram requiere cuatro soluciones:

Primer colorante:El cristal violeta es un colorante bsico que en contacto con

las clulas bacterianas cargadas negativamente, reaccionan con ellas

colorendolas.

Solucin mordiente:El Lugol que fija las tinciones y aumenta la afinidad entre

el colorante y las clulas. El ingrediente activo de este compuesto es el I2; El KI

simplemente hace soluble el I2en el agua. El I2entra en las clulas y forma un

complejo insoluble en agua con el cristal violeta. Hasta este momento las

clulas Gram (+) como Gram (-) se encuentran teidas de color violeta.

Agente decolorante:El alcohol acetona es un solvente orgnico que disuelve la

membrana externa de las Gram (-) facilitando la salida del complejo colorante-

mordiente. Debemos tomar en cuenta la delgada capa de murena incapaz de

retener este complejo en las Gram (-).Luego de este tratamiento las bacterias

Gram (+) mantienen el color violeta y las Gram (-) quedan decoloradas.

Colorante de contraste:Es un colorante bsico de distinto color que el primer

colorante, como la safranina ola fucsina bsica-


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Los dos grupos bacterianos que distingue esta tcnica difieren en el color con el que

finalmente aparecen. Las bacterias Gram (+) se tien de azul-violeta por el cristal

violeta y no perdern esta coloracin durante los pasos sucesivos. Las bacterias Gram

(-)perdern la coloracin inicial del cristal violeta en los siguientes pasos y se teirn

de rosadebido al colorante de contraste.

La diferencia est determinada por la composicin de su pared celular. Las bacterias

Gram (+) poseen una gruesa malla de pptidoglucano en su parte ms externa,

mientras que, las Gram (-), recubriendo una capa fina de pptidoglucano, presentan

una membrana lipdica externa que envuelve toda la clula.


Material

- Palillo mondadientes - Microscopio ptico

- Pinzas - Aceite de inmersin

- Lminas portaobjetos - Mechero

- Laminillas cubreobjetos. - Batera coloracin de Gram

Muestras biolgicas:

-Alba dental (sarro dentario).

- Biolactol

V. PROCEDIMIENTO

1. Preparacin de frotis

a. Sarro dentario

- Limpiar bien un portaobjetos.

-

Con la ayuda de una pipeta Pasteur coloca una gota de agua destilada sobre elporta objeto limpio.

- Obtener mediante un palillo mondadientes muestra de sarro dentario.

- Extenderlo sobre la lmina portaobjeto.

b. Biolactol

- Sobre una lmina portaobjeto limpiar y extender una a dos gotas del biolactol.


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2. Fijacin

Sujeta la lmina portaobjeto por uno de sus extremos y realizando una ligera

oscilacin, psalo suavemente sobre la llama del mechero, por la cara opuesta a la de

la extensin, hasta que se seque el material, procurando que el calor no sea excesivo.

Con este proceder las bacterias mueren, se altera la permeabilidad de sus membranas

y el colorante pasa mucho mejor a su interior. Tambin se las puede dejar secar al aire,

bien dejndolas sobre la mesa, durante algunos minutos, o bien con un secador de

aire.

3. Coloracin

Coloracin de Gram

1. Permita que los frotis se sequen al aire y luego fjelos con calor.

2. Tia con cristal violeta agregando suficiente colorante y deje que acte durante

un minuto.

3. Lave suavemente con agua con ayuda de una pizeta.

4. Inunde suavemente con el mordiente, yodo de Gram, y deje actuar durante un

minuto.

5. Lave suavemente con agua.

6. Decolore con alcoholcetona, agregue el alcohol gota a gota lavando la

preparacin durante10 segundos, si se requiere ms lavados realizar los que

sea necesario, hasta que la preparacin a nuestra vista est casi claro oligeramente color violeta.


8. Agregue la safranina para la tincin de contraste y dejar actuar durante un

minuto.


10.Dejar secar al aire o con ayuda del mechero y observar al microscopio.

11.Enfocar campo a 10X ; agregar una gota de aceite de inmersin y observar con

objetivo de inmersin.

12.Graficar lo observado.


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Pasos de la coloracin Gram

VI. RESULTADOS

Observaciones:


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VII. CUESTIONARIO

1. Qu es un frotis? y Con qu finalidad se fija la muestra de microorganismos

en el porta objetos?

2.

Cul es el fundamento de la tincin Gram y que funcin cumple cada uno de

los reactivos que se emplean?

3. Por qu es necesario emplear aceite de inmersin para la observacin de los

microorganismos?

4. Menciona diez bacterias Gram (+) y cinco bacterias Gram (-) de importancia

medica en el Per, e indique que enfermedad causan.



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PRCTICA N 7

DIVERSIDAD DE ORGANISMOS

CLULA EUCARIOTA: ANIMAL Y VEGETAL

I. INTRODUCCION

La clula constituye la unidad biolgica de los seres vivos. Representa la mnima

estructura necesaria para que se pueda observar la totalidad de las manifestaciones

caractersticas de la vida incluyendo la reproduccin. Por lo tanto la clula constituye el

primer nivel en el que puede llevarse a cabo la unidad de un sistema vivo completo.

Existen clulas procariotas como las bacterias donde el material gentico no se

encuentra limitado por una membrana, no presenta organelas membranosas,

presenta una pared celular rgida. Estn adaptadas a vivir en una gran variedad de

ambientes. Para diferenciarlas es importante reconocer la forma y la tcnica de

coloracin diferencial de Gram.

Las clulas eucariotas tienen un modelo de organizacin mucho ms complejo que las

procariotas. Su tamao es mucho mayor y en el citoplasma es posible encontrar un

conjunto de estructuras celulares que cumplen diversas funciones y en conjunto sedenominan organelas celulares. Entre las clulas eucariotas podemos distinguir dos

tipos de clulas que presentan algunas diferencia: son las clulas animales y vegetales.

La clula vegetalpresenta una forma ms regular o prismtica mientras que la clula

animal presenta formas muy variadas e irregulares. Los orgnulos tambin son

diferentes: las vegetales presentan cloroplastos, pared vegetal, leuco plastos y una

gran vacuola que ocupa un gran volumen citoplasmtico. La clula animalno presenta

los orgnulos anteriores y s presenta centriolos.

II.

OBJETIVOS

1. Conocer las partes de la clula Eucariota mediante la observacin microscpica

2. Describir las partes de una clula eucariota.

3. Utilizar colorantes parra una mejor observacin de la clula eucariota.

4. Adiestrar al estudiante sobre el manejo del microscopio.Adquirir la destreza en

el uso del microscopio ptico.


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III. MARCO TEORICO

Se denomina eucariotas a todas las clulas que tienen su material hereditario

fundamental (su informacin gentica) encerrado dentro de una doble membrana, la

envoltura nuclear, que delimita un ncleo celular. Igualmente estas clulas vienen a

ser microscpicas pero de tamao grande y variado comparado con las otras clulas.

Las clulas eucariotas presentan un citoplasma muy compartimentado, con orgnulos

(membranosos) separados o interconectados, limitados por membranas biolgicas que

son de la misma naturaleza esencial que la membrana plasmtica. El ncleo es

solamente el ms notable y caracterstico de los compartimentos en que se divide el

protoplasma, es decir, la parte activa de la clula. En el protoplasma distinguimos tres

componentes principales, a saber, la membrana plasmtica, el ncleo y el citoplasma,

constituido por todo lo dems. Las clulas eucariotas estn dotadas en su citoplasma

de un citoesqueleto complejo, muy estructurado y dinmico, formado por

microtbulos y diversos filamentos proteicos. Adems puede haber pared celular, que

es lo tpico de plantas, hongos y protistas pluricelulares, o algn otro tipo de

recubrimiento externo al protoplasma. .

Las clulas eucariotas contienen en principio mitocondrias, orgnulos que habran

adquirido por endosimbiosis de ciertas bacterias primitivas, lo que les dota de lacapacidad de desarrollar un metabolismo aerobio.

IV..MATERIAL Y MUESTRA

Material

-Tubos de ensayo

-Gradilla

-Bistur

-Lminas portaobjetos y laminillas

-Pipetas

-Pizetas

-Mecheros

Goteros

-Alcohol

-Algodn

-Guantes de ltex

-Colorantes: Azul de metileno y/o Cristal

violeta

-Soporte para preparaciones

-Microscopios

Muestra biolgicaHisopado bucal

Cebolla


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VII. PROCEDIMIENTO

a) Clula animal:

1.- Colocamos una gota de agua sobre un portaobjetos. Raspamos suavemente con el

hisopo el interior de la cavidad bucal de un compaero para obtener clulas epiteliales

y diluimos las clulas obtenidas en el agua del portaobjetos

2.-Tomamos el portaobjetos con una pinza y pasamos la preparacin por la flama del

mechero con el objeto hasta que se evaporara el agua y quedaran fijadas las clulas en

el portaobjetos.

3.- Colocamos sobre la preparacin una gota de azul de metileno y dejamos reposar

aproximadamente 2 minutos. Escurrimos el exceso de colorante y agregamos un poco

de agua para quitar el exceso de colorante. Dejamos secar.

4.- Observamos al microscopio, primero con objetivo de 10x y luego en 40X

5.- Dibujar lo observado, identificando estructuras.

b) Clula vegetal:

1.-Tomamos una cebolla le quitamos su epidermis y lo colocamos sobre un

portaobjeto y sobre ella una gota de agua o lugol y en otro portaobjetos con

epidermis con azul de metileno

2.- Lo cubrimos con un cubreobjeto.

3.- Observamos al microscopio, primero con objetivo de 10x y luego en 40X.4.- Dibujar lo observado, identificando estructuras.

VI. RESULTADOS

Clula animal.


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Clula vegetal.

VII. CUESTIONARIO

1. Fundamente 5 tcnicas de coloracin para la observacin de clula eucariota.

2. Escriba 8 diferencias entre clula procariota y eucariota.

3. Escriba 5 diferencias y 5 semejanzas entre clula animal y vegetal.

Escriba la fuente bibliogrfica


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PRCTICA N8

OBSERVACION DE PROTOZOARIOS

I. INTRODUCCIN

Los Protozoarios son organismos eucariticosunicelulares que en su mayora habitan

en ambientes acuticos (agua dulce y salada). Generalmente son mviles, en algunas

ocasiones aparecen reunidos semejando colonias.Junto a las bacterias y hongos

cumplen un rol bio-desintegrador en la biosfera. Son tambin, agentes causales de

enfermedades no slo en animales, tambin en humanos como el paludismo, la

leishmaniasis, la toxoplasmosis, etc.

Es muy probable la observacin en charcas de agua, pequeos metazoos de vida

acutica, siendo los ms frecuentes rotferos, gusanos, crustceos, insectos.

II. OBJETIVOS

1. Estudiar y observar la diversidad de microorganismos que habitan en una

charca de agua dulce.

2.

Observar y reconocer algunos protozoarios de vida libre y de importancia ensalud pblica.

3. Adiestrar al alumno en el manejo del microscopio ptico.

III. MARCO TERICO

Los protozoarios son eucariticoses decir con un ncleo encerrado en una membrana,

el cual se encuentra en el interior del citoplasma. La porcin ms interna de los

protozoarios es el endoplasma y es la parte que rodea al ncleo, est compuesto de

protoplasma que es un coloide en el que se puede encontrar; lisosomas, vacuolas conmaterial alimenticio sin digerir, mitocondrias, aparato de Golgi, ribosomas y retculo

endoplsmico. Cubriendo el endoplasma se encuentra el ectoplasma, el cual es menos

granuloso y ms homogneo. El ectoplasma funciona como aparato locomotor, sirve

para la presin o captura e ingestin de los alimentos y como rgano respiratorio,

elimina los productos de catabolismo expulsndolos y protege al protozoario.

Cubriendo al ectoplasma se encuentra la membrana plasmtica, la cual controla la

entrada y salida de alimento, excreciones y secreciones, mantiene una concentracin

normal de la sustancia citoplsmica, tornndose permeable a ciertas sustancias. En

algunos protozoarios como Histomona meleagridiso las amebas no tienen una formaconstante y cambian frecuente. En otros su contorno es ms o menos constante.


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Los protozoarios presentan tres tipos de organelos locomotores. La clasificacin de los

protozoarios se debe en gran parte a la clase y distribucin de estas partes

locomotoras. Los seudpodos son proyecciones protoplsmicas transitorias de la

superficie del cuerpo. Los flagelos son estructuras como ltigos que baten impulsando

a los flagelos en el seno del agua. La envoltura externa del flagelo es una continuacin

de la membrana plasmtica, en su interior presentan 11 fibrillas. El flagelo se origina

del blefaroplasto, que tiene la misma estructura fina que el centrolo de las clulas

animales. En algunos flagelados, el blefaroplasto acta como centro organizador del

huso mittico del ncleo en divisin, funcionando as como centrolo y como base de

los flagelos, adems tienen cerca el DNA de una mitocondria que se tie basofilamente

y recibe el nombre de cuerpo parabasal. El blefaroblasto y el cuerpo parabasal forman

el Kinetoplasto. Los cilios se presentan en grandes cantidades en la superficie de

algunos protozoarios y presentan la misma estructura bsica del flagelo,nicamente

son ms pequeos y no se originan de blefaroplastos.

Clasificacin de los protozoarios


Materiales

- Laminillas cubreobjetos

- Lminas portaobjetos

- Goteros

- Microscopio y aceite de inmersin

Muestra biolgica

Agua estancada o de pantano.

Muestras clnicas: Sern proporcionadas por el docente.


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V. PROCEDIMIENTO

Muestra de agua estancada o de pantano para protozoos de vida libre

Obtener muestras de agua en varios frascos (mar, lago, lagunas, charcas).

En el laboratorio, extraer del fondo ayudado con una pipeta el lquido.

Colocarlo en el centro de la lmina portaobjeto y cubrirlo con laminilla.

Observar de menor a mayor aumento 10x y 40x.

Grfica lo observado.

Muestras clnicas de protozoarios parsitos

Observar al mximo aumento del microscopio 100X y aceite de inmersin las

muestras clnicas fijadas, que se le proporcionar en prctica.Graficar lo observado.

VI. OBSERVACIONES


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VII. CUESTIONARIO

1. Qu es un organismo eucariota?. Escriba 5 caractersticas importantes

2. Qu funcin cumple la vacuola contrctil?.

3. Escriba 15 protozoarios de importancia mdica en el Per y cite la patologa que

ocasionan.

4. Qu se entiende por metazoos y como se clasifican?.



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PRCTICA N 9

CELULA EUCARIOTA: PERMEABILIDAD CELULAR

I. INTRODUCCIN

Tanto en las clulas animales como en los vegetales tambin se dan los procesos de

intercambio de soluto y solvente con su medio ambiente a travs de sus membranas,

asegurando as los procesos de smosis.

En una smosis, el solvente o lquido, pasa a travs de una membrana semipermeable

desde la zona de menor concentracin de soluto hacia la de mayor concentracin de

soluto. Este fenmeno, se da de manera constante y es dependiente de la membrana

celular cuyas propiedades fisicoqumicas, garantizan este proceso dinmico en todos los

seres vivos.

Osmosis

II. OBJETIVOS

1. Evidenciar el proceso de smosis con soluciones isotnicas, hipertnicas e

hipotnicas.

2. Adiestrar al alumno en la observacin de clulas vegetales.

3. Adiestrar al alumno en el manejo del microscopio ptico.

III. MARCO TERICO

Cualquiera que sea la organizacin especfica de un ser vivo, en sus clulas no puede

faltar la membrana celular, est formada principalmente por fosfolpidos y protenas. Las

protenas permiten el paso del medio intracelular al medio extracelular y viceversa, de

molculas pequeas ya sea en forma activa o pasiva, otras actan como receptoras de


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seales como por ejemplo de hormonas; otras actan como sitio de fijacin para enzimas

solubles y para el citoesqueleto.

Es a travs de la membrana celular que se controla el transporte de materiales entre el

lquido intracelular y extracelular, dado que ella es selectiva y semipermeable, pues

impide que algunas sustancias grandes como los lpidos y protenas la atraviesen

fcilmente; pero permiten el paso de azcares simples, oxgeno, dixido de carbono,

agua, glicerol, urea y otras molcula. Este paso depende del tamao y carga de las

molculas y de la composicin de la membrana celular. Este transporte puede ocurrir por

procesos pasivos y activos.

Los transportes pasivos no requieren el aporte de energa celular (ATP), y las molculas se

desplazan a favor de una gradiente de concentracin: la sustancia se desplaza del sitio de

mayor al de menor concentracin. Entre los ejemplos estn la difusin, smosis, dilisis y

difusin facilitada.

La smosis desplaza el agua a travs de la membrana celular desde un sitio de alta hacia

otro de baja concentracin. Los procesos osmticos se denominan plasmlisis y turgencia

en los vegetales y en las clulas animales se llaman lisis y crenacin. De acuerdo con la

presin osmtica, las soluciones extracelulares se dividen en isotnicas, hipotnicas e

hipertnicas.

En las soluciones isotnicas, la concentracin de solutos en el lquido intracelular es iguala la concentracin presente en el lquido extracelular. En las soluciones hipotnicas, el

lquido que rodea a la clula tiene menor concentracin de sustancias, ms agua y menos

presin osmtica que el interior de la clula; por lo tanto el agua se difunde desde el

exterior hacia el interior celular. Las soluciones hipertnicas tienen mayor concentracin

de solutos, menor cantidad de agua y mayor presin osmtica que el lquido intracelular,

esto provoca que el agua pase del interior al exterior de la clula.


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Material

-

Lminas portaobjetosyLaminillas cubreobjetos

- 1 Hoja de gillette

- Soluciones de NaCl al 0,2%, 0,9% y 5%.

- Lugol

- Gotero o pipeta Pasteur

Material biolgico:

Catafilo de la Cebolla.

V. PROCEDIMIENTO

- Prepare 3 lminas portaobjetos, rotlelos como A, B y C, coloque en cada una,

el catafilo de la cebolla.

- A la lmina A, agrguele varias gotas de NaCl al 0,9%.

- A la lminaB, agrguele varias gotas de NaCl al 5%.

- A la lmina C, agrguele varias gotas de NaCl al 0,2%.

- Cubrir cada preparacin con una laminilla.

- Observe con el objetivo de 10X y 40X.

VI. RESULTADOS

Solucin Isotnica: __________


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Solucin Hipertnica:____________

Solucin Hipotnica:______________

VII. CUESTIONARIO

1. Explique la diferencia entre difusin y smosis.

2. Por qu la clula vegetal no se destruye?

3. Por qu es importante para los seres vivos el proceso osmtico?



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PRACTICA N 10

OBSERVACIN DE PLASTIDIOS

I. INTRODUCCIN

Por lo general las clulas animales son translcidas al microscopio ptico debido a su

bajo contraste con su entorno, sin embargo dada su capacidad tintorial con

determinados colorantes se pueden apreciar algunas de sus estructuras como algunas

organelas, las cuales segn sus propiedades qumicas, reaccionaran con algunos

colorantes bajo determinadas condiciones. Sin embargo las clulas vegetales si

contrastan con su entorno, debido a la presencia de plastidios que contienen

diferentes pigmentos. El plastidio ms conocido es el CLOROPLASTOcon su pigmento

CLOROFILA, pero existen otros plastidios conocidos como cromoplastos los cuales

presentan otro tipo de pigmentos.

II.OBJETIVO

1. Observar y distinguir las diversas organelas celulares en clulas vegetales.

III.MARCO TEORICO

Los plastidios son orgnulos exclusivos de vegetales, provistos de una doble

membrana, y tienen como funcin el almacn y la sntesis de sustancias.

Pueden ser:

Indiferenciados:

Proplastos: son el origen de los dems plastidios.

Etioplasto: proplastos diferenciados en ausencia de luz.

Diferenciados:

Cloroplastos: fotosintticamente activos.

Cromoplastos: fotosintticamente inactivos o poco activos.

Leucoplastos:- Amiloplastos: acumulan almidon.

- Oleplastos: acumulan lpidos.

- Proteinoplastos: acumulan protenas.

IV.MATERIALES Y MUESTRAS

Materiales

- Lminas portaobjetos

- Laminillas cubreobjetos- Bisturi


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Muestra biolgica

- Planta de acuario Elodea sp

- Zanahora Daucus carota

-

Tomate Licopersicum esculentum

- Aj Capsicum frutensis

- Papa Solanum tuberosum

V. PROCEDIMIENTO

Clulas vegetales

- La observacin de los plastidios es tomando una hoja de la planta acutica o un

pequea muestra fina de los diferentes vegetales.

- Colocar 1 gota de agua

- Cubrir con laminilla

- Observar al microscopio.

- Dibujar lo observado, 10X y 40X

Nota: La observacin del tomate es con la pulpa tomando una pequea porcin y

presionando sobre una laminilla.

VI.

RESULTADOS

1. Observacin de cloroplastos


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2. Observacin de cromoplatos


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3. Observacin de leucoplastos

VIII.

CUESTIONARIO1. Qu pigmentos presentan el tomate, zanahoria y el aj?. Qu funcin

cumplen en el organismo?

2. Qu importancia tienen los amiloplastos?. Fundamente. Cite en qu

alimentos se encuentran?.

3. Cul es la relacin entre las mitocondrias y los cloroplastos en las clulas

vegetales?.



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FUENTES DE INFORMACIN

Bibliogrficas

1. Alberts, B.; Bray, D.; Lewis, J.; Raff, M.; Roberts, K.; Watson, J. (2002) Biologa

Molecular de la Clula. (4 Edicin) Espaa: Omega.

2. Curtis E y Barnes S. (2000). Biologa. (6 Edicin). Argentina: Mdica

Panamericana.

3. De Robertis y Hib J. (2001). Biologa Celular y Molecular. (15 Edicin).

Argentina: El Ateneo.

4. Fernndez J; Fernndez; Santos Hernndez, J; Gonzlez .J.( 2002). Gentica. (1

Edicin). Espaa: Ariel Ciencia.

5. Lodish B; et al. (2000) Biologa Celular y Molecular. (4 Edicin). Argentina:

Mdica Panamericana.

6. Nason A. (2002). Biologa. (8 Edicin). Mexico: Limusa S.A.

7. Ville C. (1997). Biologa (8 Edicin).Mexico: Mc Graw-Hill Interamericana.

Electrnicas

1. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi

2. http/www.um.es/molecula.

3. http://www.biocab.org/Biologia.html.

4. http://www2.uah.es/biomodel/c_enlaces/libros-virtu.htm .

5. http://medlineplus.gov/spanish/


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ANEXOS


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1-Chilomonas paramecium 14-Lacrymaria olor 27-Vorticella convalaria

2-Anisonema asinus 15-Loxodes vorax 28-Vorticella microstoma

3-Anisonema sp 16-Mesodinium acarus 29-Stilonychia pustulata

4-Peranema trichophorum 17-Chilodonella cucullulus 30-Urosoma caudata5-Monas gutula 18-Chilodonella sp 31-Oxytricha fallax

6-Arcella vulgaris 19-Chilodonella fluviatilis 32-Euplotes charon

7-Alcella discoides 20- Chilodonella caudata 33-Euplotes carinatus

8-Centropyxis aculeata 21-Colpoda steini 34-Euplotes patella

9-Pseudodifflugia gracilis 22-Tillina magna 35-Urostyla grandis

10-Euglypha cristata 23-Tetrahymena pyriformis 36-Spirostomum teres

11-Trinema enchelys 24-Uronema marinum 37- Spirostomumambiguum

12-Actinosphaeriun eichhorni 25-Cinetochilum margaritaceum 38-Halteria grandinella

13-Actinophrys sol 26-Paramecium Aurelia


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sillabus 2015-1 Bio General