小鼠肾细胞的原代培养

组员 : 钱宇峰 张晓宇

WHY

• 另外我们骨髓瘤细胞的培养也都只是传代培养，并没有从最初步骤开始做起

• 因为之前细胞工程的那个班做细胞原代培养的结果基本都不理想

• 因此，我们组想尝试下

实验目的

• 离心机、培养皿、解剖剪刀、弯头镊子• 普通镊子、细胞培养瓶、吸管、橡皮塞• 血球计数板、不锈钢筛网、使馆、酒精灯• 试管架以及表面皿、 75%酒精及酒精棉球• 0.25%胰蛋白消化液、 PBS 、 1640培养液

• 实验小鼠。

所需仪器与材料

• 先将小鼠断颈处死，浸入 75%酒精中，迅速进入无菌室• 1.取出肾脏，经 PBS漂洗三次后，放在表面皿中。• 2.在表面皿中，用滴管加入少量培养液（ RPMI 1640 含 20％小牛血清）用锋利的剪刀将组织块剪成约 1mm3的小块。

• 3.用弯头镊子将组织块移入细胞瓶中，把它们排列成行，每块组织相距约 0.5cm，每瓶细胞贴 20 ～ 30小块，随即翻转细胞瓶，使贴组织块的一面朝上，然后加培养液 3ml。

• 4.将细胞瓶置于 37℃， 5 ％ CO2培养箱中静置 2-3小时左右，然后将瓶轻轻翻转，使组织块浸入培养液中，继续培养。

• 5.24小时后在显微镜下检查，若见细胞自组织边缘长出，则继续培养 2 日，再换部分或全部培养液，待多数组织块的生长晕相接时，可进行传代培养。

步骤过程

• 24小时内不被污染：培养液为橙红色，并且比较清澄

• 2-3天以后出现细胞生长晕：即组织块周围生长出新的肾细胞

预期结果

实际结果

• 我们组在三天之内并没有观察到生长晕，虽然组织块周围有一圈比较明亮的，但很有可能只是组织块细胞分泌的粘液，因为它并没有扩展。可能是因为组织块表面细胞活性并不是很高 .

• 但我们组的细胞培养液一直都比较理想，并没有被污染 .

• 如果时间允许，我们相信培养下去，出现生长晕的可能还是很大的。

谢谢