Técnicas de tinción

TINCION

• Entre los diversos tipos de coloración de bacterias, están la coloración simple, diferencial y la tinción negativa.

TINCIÓN SIMPLE:

• Se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares se tiñen con la misma tonalidad (Tinta china, Azul Metileno de Loeffler, Azul de lactofenol).

• 1. Se toma un portaobjetos• 2. Se le añade al portaobjetos

unas gotas de cloruro sodico• 3. Esterilización del asa de

siembra para tomar la muestra• 4. Toma de muestra con el asa

desiembra esterilizada

Tinción Simple

• 5. Dilución de la muestra en el cloruro sodico que contiene el portaobjetos• 6. Secado y fijación de la muestra en el mechero bunsen• 7. Tinción de la muestra fijada y secada convioleta de

genciana durante 80 seg.• 8. Lavado de la muestra con agua destilada después de los 80

seg. De tinción

• 9 . Añadir una gota de aceite de inmersión a la muestra una vez secada• 10. Poner lamuestra en el microscopio, enfocar y observar

con el objetivo de 100.• 11. Observar la muestra• 12. Resultados de la observación del proceso de tinción

simple

TINCIÓN DIFERENCIAL:

• Se utilizan varios colorantes combinados. Las estructuras celulares se diferencian en función de los diferentes colorantes que fijan de acuerdo con su propia constitución química. (Tinción de Gram, Coloración de ácido resistencia)

TINCIONES DIFERENCIALES

• Las tinciones diferenciales son aquellas tinciones que se usan para diferenciar de manera mas explicita los microorganismos. Estas tinciones utilizan los colorantes diferenciales, que se componen de más de una sustancia tintórea.

• En algunas técnicas de coloración, las tinciones diferenciales más importantes que se emplean en bacteriología son las de Gram y la tinción ácido-resistente. Ambas tinciones se utilizan para obtener información acerca de la composición de las capas de la pared celular de las células bacterianas

TINCIÓN DIFERENCIAL.

• 1. Es untipo de tinción empleada en la microbiología para visualizar bacterias, sobre todo en muestras clínicas.• 2. Con la ayuda de un mechero, flamear un asa

bacteriológica y esperar que enfrié un poco.3. Colocar en el centro del porta objetos una gota de agua destilada.• 4. Tomar el asa y recoger un poco de muestra de una de las

colonias bacterianas que se encuentran más aisladas.

• 5.Después colocar la muestra en el portaobjetos y mezclarla con el agua y hacer una extensión de aproximadamente 2 cm.• 6. Acercar el portaobjetos al calor del mechero hasta secar

suavemente.• 7.Inundar el frotis con violeta de genciana: durante 2

minutos.

•8. Una vez transcurrido el tiempo lavar con agua corriente hasta quitar el exceso de colorante.•9. Cubrir con lugol el frotis durante 2minutos.•10. Lavar con agua corriente.

• 11. Después de haber actuado el mordiente el frotis se decolora con alcohol de 95’c hasta que el liquido salga claro.(30-60segundos).• 12. Una vezdecolorado el frotis teñir con safranina durante 3

minutos.• 13. Ya que actuó la safranina como ultimo paso se procede

ha enjuagar el frotis con agua corriente, se espera a que se seque al aire libre....