Tincin Simple y Tincin Gram

Brayan Pinchao

Laboratorio de Microbiologa I, Facultad de Ciencia e Ingeniera en Alimentos, Universidad Tcnica de Ambato

Resumen

Los mtodos de tincin ayudaron a identificar la morfologa de las bacterias, pues al enfocarse con el lente

de 1000X se observa a bacterias con forma redonda y otras con forma ovalada alargada, siendo los

primeros cocos, y los segundos bacilos, cabe mencionar que esto fue posible por la accin de los

colorantes empleados ya que estos interactan con las estructuras de las bacterias hacindolas visibles.

Introduccin

Las bacterias observadas al microscopio son casi incoloras, la principal dificultad es la falta de contraste

entre la clula y el medio que la rodea por ello el mtodo de aumentar el contraste es la utilizacin de

colorantes. (Hernndez. 2008)

Tincin Simple

Es una tincin en la cual la bacteria es teida con un solo reactivo, de preferencia tintes bsicos que

contengan un cromgeno (compuesto que da color al tinte) con carga positiva, ya que la pared celular de

las bateras posee componentes con carga negativa que atraen el cromgeno. La tincin simple se utiliza

para observar la morfologa y arreglo en el crecimiento de las bacterias.

(UMB. 2014)

Tincin diferencial de Gram.

Es definida como una tincin diferencial, ya que utiliza dos colorantes y clasifica a las bacterias en dos

grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas. Fue desarrollada por el cientfico

dans Hans Christian Gram en 1884. Los principios de la tincin de Gram estn basados en las

caractersticas de la pared celular de las bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a cada

microorganismo. (Lopez, Hernandez, Colin, Pea, Gonzales, Cendejas. 2014)

El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el peptidoglicano. La pared de la clula

gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectadas de peptidoglicano, generalmente,

80%-90% de la pared de la clula gram-positiva es peptidoglicano.

La pared de la clula gram-negativa, por otro lado, contiene una capa mucho ms delgada, nicamente de

peptidoglicano y est rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolpidos, lipopolisacridos,

y lipoprotenas. Slo 10% - 20% de la pared de la clula gram-negativa es peptidoglicano. Las gram-

positivas aparecen de color azul o violeta y las gram-negativas de color rosa o rojo.

(UTN. 2009)

El objetivo de la prctica es identificar la morfologa de bacterias, que ser posible gracias al conocimiento

de mecanismos de tincin simple y tincin diferencial de Gram, para ello tambin se debe conocer las

funciones de los colorantes empleados en la tincin.

Procedimiento

Se prepar un frotis colocando una pequea gota de agua estril sobre un portaobjetos luego con el asa

previamente flameada se tom una pequea cantidad de clulas bacterianas y se esparci con la gota de

agua hasta formar una suspensin, por ltimo se pas el cubreobjetos tres veces sobre la llama del

mechero para ayudar a secar la suspensin

Para la tincin simple se cubri la suspensin preparada con azul de metileno, se dej actuar por un

minuto y luego se lav con agua el exceso de colorante, por ltimo se dej secar al aire y se observ con

el objetivo de inmersin.

Para la tincin Gram se cubri la suspensin preparada con violeta de cristal por un minuto, se lav con

agua el exceso de colorante y se dej secar, luego se cubri con lugol por un minuto, se lav nuevamente

y se dej secar, para decolorar la muestra se coloc etanol al 95% por 30 segundos, se lav y se dej secar,

por ltimo se ti con safranina por un minuto, se lav el exceso con agua y se dej secar para luego

observar con el objetivo de inmersin.

Resultados

Tabla N1: Tincin simple.

Tincin simple Lente de inmersin 1000X

Organismo:

Forma:

Agrupacin:

Color:

Organismo:

Forma:

Agrupacin:

Color:

Tabla N2: Tincin diferencial de Gram

Tincin diferencial de Gram Lente de inmersin 1000X

Organismo:

Forma:

Arreglo:

Color:

Grupo:

Organismo:

Forma:

Arreglo:

Color:

Grupo:

Discusin

En la tincin simple se usa tintes bsicos ya que contienen un cromgeno (compuesto que da color al

tinte) con carga positiva, y como la pared celular de las bateras posee componentes con carga negativa,

entonces estos se atraen y es posible la tincin.

Los principios de tincin de Gram estn basados en las caractersticas de la pared celular de las bacterias,

la pared celular de las bacterias Gram negativas est constituida por una capa fina de peptidoglicano y

una membrana celular externa, mientras que las bacterias Gram positivas poseen una pared celular

gruesa constituida por peptidoglicano, pero no cuentan con membrana celular externa; as pues, la

composicin qumica y el contenido de peptidoglicano en la pared celular de las bacterias Gram negativas

y Gram positivas explica y determina las caractersticas tintoriales. El peptidoglicano es una

macromolcula que rodea completamente las clulas bacterianas proporcionndoles resistencia frente a

la presin osmtica y confirindoles la forma caracterstica de los diferentes grupos bacterianos

Para entender los motivos por los cuales se diferencian las bacterias es conveniente explicarlo de

acuerdo como se llev el procedimiento, es as que al colocar el colorante violeta de genciana este penetra

a travs de la pared bacteriana tanto de las Gram-positivas como de las Gram-negativas, luego cuando se

aade el lugol ste impide la salida del violeta de genciana debido a la formacin de un complejo violeta

de genciana-yodo que satura los espacios del peptidoglicano de la pared bacteriana, luego al aadir el

alcohol se deshidrata la pared bacteriana y se cierran los poros de la misma, tambin destruye la

membrana externa de las bacterias Gram-negativas debido a que el complejo antes formado (violeta-

yodo) es soluble con el alcohol y la muestra se decolora, las bacterias Gram-positivas al contener una

gran cantidad de peptidoglicano, retienen con mayor fuerza este complejo, mientras que las Gram-

negativas no lo pueden retener debido a que tienen menor cantidad de peptidoglicano, por ltimo al

colocar un colorante secundario como la safranina se logra teir las bacterias que no pudieron retener el

complejo violeta-yodo.

Por eso es que las bacterias Gram-positivas se tien de azul-violeta proveniente del violeta de genciana y

las Gram-negativas de rojo proveniente de la safranina, y por eso es importante conocer los cambios

qumicos que se realizan al momento de teir una muestra bacteriolgica.

Cuestionario

Por qu se utilizan colorantes bsicos en la tincin simple? Nombre 3 ejemplos.

Porque los tintes bsicos contienen un cromgeno (compuesto que da color al tinte) con carga

positiva, ya que la pared celular de las bateras posee componentes con carga negativa que atraen

el cromgeno.

Ejemplos: Carbn fuchsin: 15 a 30 segundos

Cristal Violeta: 20 a 60 segundos

Metl Azul: 1 a 2 minutos (UMB. 2014)

Sealar las diferencias entre la tincin simple y la tincin diferencial de Gram.

La tincin simple sucede cuando toda la muestra se tie del mismo color y se utiliza un slo

colorante en cambio la tincin diferencial de Gram sucede cuando se visualiza ms de un color

porque se utiliza ms de un colorante.

La tincin simple permite observar la forma, tamao y agrupamiento de las bacterias mientras

que la tincin diferencial de Gram permite distinguir diferentes tipos de microorganismos en

funcin de sus caractersticas estructurales. (Unavarra. 2009)

Cul es la funcin del lugol y del alcohol en la tincin Gram?

El lugol sirve como mordiente e impide la salida del cristal violeta por la formacin de un complejo

cristal violeta-yodo que satura los espacios del peptidoglicano de la pared bacteriana.

El alcohol deshidrata la pared bacteriana y cierra los poros de la misma, tambin destruye la

membrana externa de las bacterias Gram negativas debido a que sta es soluble a la accin de

solventes orgnicos, como la mezcla de alcohol-acetona.

(Lopez, Hernandez, Colin, Pea, Gonzales, Cendejas. 2014)

Escriba las diferencias entre las bacterias Gram positivas y Gram negativas y 2 ejemplos

de cada grupo.

Estructuralmente ambos grupos se diferencian porque las Gram-positivas carecen de membrana

externa, tienen una gruesa capa de peptidoglicano, mientras que las Gram-negativas tienen

membrana externa portadora de lipopolisacrido y una capa de peptidoglicano ms fina.

Gram positivas Gram negativas

Bacillus anthrasis Neisseria meningitidis

Clostridium tetani Neisseria gonorrhoeae

(Unavarra. 2009)

Conclusiones

Se identific la forma de las bateras observadas pues en las placas se miraron crculos pequeos,

forma que corresponde a los cocos y tambin una forma ovalada muy alargada que corresponde

a los bacilos.

Se conoci los mecanismos de tincin para la determinacin morfolgica de cada bacteria, es as

que la tincin simple ayuda a determinar la forma, el tamao y agrupamiento de las bacterias, por

otro lado la tincin diferencial de Gram permite diferenciar microorganismos en base a sus

caractersticas estructura.

Los colorantes empleados en la prctica permitieron hacer visibles a las bacterias que por

naturaleza son casi incoloras, al teirlas de colorante se determin la forma que tenan dichas

bacterias.

Bibliografa

Universidad Tecnolgica Nacional. 2009. Tincin y observacin microorganismos. Disponible en:

http://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/practico4.pdf

Obtenido el 10 de mayo del 2015.

Hernndez B. 2008. Tinciones utilizadas en microbiologa. Disponible en:

http://analisisaproductoscarnicos.blogspot.com/2012/06/tinciones-utilizadas-en-

microbiologia.html Obtenido el 10 de mayo del 2015.

Lopez L, Hernandez M, Colin C, Pea S, Gonzales G, Cendejas R. 2014. Las tinciones bsicas en el

laboratorio de microbiologa. Investigacin en discapacidad 1 (3): 10-18.

Universidad Metropolitana Bayamn. 2014. Tincin simple. Disponible en:

http://pdfsr.com/pdf/8-tincion-simple Obtenido el 10 de mayo del 2015.

Unavarra. 2009. Microbiologa Clnica. Disponible en:

http://www.unavarra.es/genmic/microclinica/tema01.pdf Obtenido el 10 de mayo del 2015.