MICROSCOPÍA

La microscopía según (Alfonso, 2012) es una disciplina científica que consiste en el uso del microscopio, comenzó por Robert Hooke (1665) cuando observo pedazos de corcho con un microscopio primitivo y a lo que vio le puso por nombre “células”, a partir de ese momento la el ámbito científico fue perfeccionando este instrumento, en sus partes sistemas más importante (mecánico, óptico e iluminación).

El sistema mecánico del microscopio consta de las siguientes partes.

Soporte: es donde se encuentra la parte óptica el cual es el pie y el brazo.

Platina: lugar donde se coloca la muestra a observar.

Cabezal: contiene los lentes oculares. Puede ser monocular, binocular. Revólver: Permite girar cambiar los objetivos.

Tornillos de enfoque: estés hacen que la platina se deslice de arriba así abajo y viceversa para eso consta del macrométrico este lo mueve más rápido y el micrométrico el cual mueve la platina más lentamente

Sistema óptico este permite que se pueda ampliar la muestra a distintos grados de aumento,

Ocular: lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.

figura microscopio.1. Principales componentes de un microscopio fotonico compuesto

Objetivo: lente situada abajo del revolver. Amplía la imagen.

Sistema de iluminación este sistema es la fuente principal de un microscopio, ya que sin la luz lo observado es muy poco visible, también permite concentrar los haces de luz en un punto deseado de la muestra.

Condensador: lente que concentra de mayor o menor concentración de los rayos luminosos.

Diafragma: regula el paso de luz que llegara hasta la laminilla a analizar.

Fuente de iluminación: es donde sale los rayos luminosos, y puede subir o bajar la intensidad de la iluminación deseada.

Actualmente existen una gran variedad de microscopios (óptico, electrónico, de luz LED, de fluorescencia por mencionar algunos).

Según (Cañas, 2015). La microscopia busca una mejor resolución para poder obtener una mejor imagen en un microscopio. Para ello depende de las lentes, objetivos, condensador y la amplitud del cono de iluminación. Es calculada con la formula

Resolución= 0.61 λη senθ

Dónde:

λ Es la longitud de onda utilizada.

η Es el índice de refracción del medio que separa la muestra de las lentes, objetivo y condensador.

θ= mitad de la anchura anular del cono de los rayos concentrados lentes objetivo desde un punto de la muestra.

TINCIÓNES

En “tinciones biología celular” según (Cañas, 2015) Una tinción nos sirve para identificar y diferenciar las células que contienen la muestra a analizar.

Las tinciones diferenciales La tinción diferencial consiste en la aplicación de dos colorantes o más el cual hace que los diferentes tipos de células se tiñan

dependiendo a su aspecto, es donde cada célula absorbe un color. La membrana se tiñe de un color y el núcleo de otro color. Las dos tinciones diferenciales más utilizadas en bacteriología son la tinción de gran y la tinción de ácido-alcohol resistencia.

Tinción simple La tinción simple se emplea en la utilización de un solo colorante y tiene como objetivo permitir la observación de la morfología bacteriana; este tipo de tinción no pinta las células. Los más usados son verde de malaquita, azul de metileno.

ObjetivoIdentificar y conocer la estructura del microscopio, teniendo en cuenta el uso y la función que ejercen cada uno de las partes del microscopio.

Metodología

Utilizamos la metodología del manual de práctica de bilogía celular, práctica 3. Según (Vega & Ortega, 2015)

Coloque cada una de las muestras sobre la platina a una distancia focal apropiada para el alumno; obtenga un mejor enfoque observando por los oculares y manipulando los tornillos micrométrico y micrométrico. Para empezar a enfocar siempre utilice el objetivo de menor resolución hasta llegar al objetivo que le proporciona la mejor resolución y enfoque en una muestra específica. Se sugiere iniciar el enfoque con el objetivo de 4x. Una vez enfocada la muestra, el alumno buscara obtener una mejor nitidez de la muestra mediante la manipulación del diafragma y centrara la iluminación del campo de observación con ayuda del condensador.Anote sus observaciones en la tabla de registro y discuta.

Material

Microscopio

Muestras

Preparación con tinción simple Preparación con tinción diferencial Porta objetos con cabello

Figura 2. Cabello, objetivo 10x, foto: Ovando, 2016 con cámara celular ALCATEL

Resultados

Al observar el cabello con los distintos objetivos 4x, 10x y 40x coda vez se distinguía más la diferencia entre la punta y la raíz del cabello así como se muestra en la figura 2.

Ya que la punta se miraba más delgada con un corte recto en la punta de dicho extremo y la raíz era en forma circular y la punta de la raíz era en forma esférica y se lograba a

distinguir algunas rayas color blanco figura 3.

Datos de coordenadas de la platina y ángulos de oculares al observar las muestras de cabello

Objetivo 4x Mario: Angulo= 69, coordenada x=20 y=30Lizbeth: Angulo= 50, coordenadas x= 19 y= 39Laura: Angulo= 65, coordenadas x=14 Y= 44Ángel: Angulo= 66, coordenadas x=12 y=39

Objetivo 10x Mario: Angulo= 69, coordenada x=20 y=30Lizbeth: Angulo= 50, coordenadas x= 19 y= 39Laura: Angulo= 65, coordenadas x=14 Y= 44Ángel: Angulo= 66, coordenadas x=12 y=39

Objetivo 40x Mario: Angulo= 69, coordenada x=21 y=31Lizbeth: Angulo= 50, coordenadas x=20 y= 40Laura: Angulo= 65, coordenadas x=15 Y= 45Ángel: Angulo= 66, coordenadas x=13 y=40

Tiempo de enfoque de la muestra de cabello en objetivos 4x, 10x y 40x

Mario: 55 segundos Lizbeth: 58 segundosLaura: 43 segundos Ángel: 62 segundos

Figura 3. Cabello, objetivo 40x, foto: Ovando, 2016 con cámara celular ALCATEL

Las muestras de apio fueron observados con los objetivos 4x, 10x y 40x. Depende del corte es lo que se puede observar, en el corte transversal figura 4 se ven como celdas partes de la muestra se miraban juntas y en otra más grandes y separadas o corte longitudinal figura 5 en la que se puede ver unos círculos los cuales son aire u la parte de los extremos de la muestra son distintas a la parte de en medio cambia la concentración de tinción lo cual causa que el color sea distinto.

La muestra sanguínea para la cual estaba tellina con gran para esta muestra fue observada en loa cuatro objetivos.

En el objetivo 10x solo me alcanzaban a ver puntitos sin ser identificados figura 6. Con el objetivo 10x lo observado era apreciable pues unas eran más coloridas que otras figura 6.

Posterior mente la muestra se enfocó en objetivo 100x utilizando aceite de inmersión para aumentar el enfoque y la claridad de la

imagen producida por el microscopio

Discusión de resultadosEmpleando el método de tinción para

observar las distintas muestras de apio y sanguínea nos ayuda a ir conociendo los métodos de

microscopia. Las muestras con tinción simple como bien lo vemos tiñen la muestra con un solo colorante para poder observar mejor las

muestras. Un pequeño ejemplo podría ser la muestra de apio con y sin tinción, en esta muestra nada más observamos que el apio con el colorante se tiño el almidón de color negro y de ahí todo era de un color amarillo y el apio sin colorante todo era color blanco. El cual podríamos decir que las dos diferentes muestras son una tinción de manera homogénea ya que la mayor parte de la muestra contenían el mismo color.

Figura 4. Apio corte transversal. Objetivo 40x, foto: Ovando, 2016 con cámara celular ALCATEL

Figura 5. Apio cortre longitudinal. Objetivo 40x, foto: Ovando, 2016 con cámara celular ALCATEL

Figura 6. Muestra sanguínea. Objetivo 10x, foto: Ovando, 2016 con cámara celular ALCATEL

Figura 6. Muestra sanguínea. Objetivo 40x, foto: Ovando, 2016 con cámara celular ALCATEL

Figura 6. Muestra sanguínea. Objetivo 100x, foto: Ovando, 2016 con cámara celular ALCATEL

La tinción diferencial sabemos que contienen más de dos colorantes el cual las partes de las células se tienen de diferentes colores, el citoplasma toma un color rosita y el núcleo toma un color morado y otras partes de las células toman otro tipos de colores el cual podemos decir que puede ser una muestra heterogenia ya que todas las partes de la muestra tomaron diferentes colores.

El cabello nada más observamos que al cambiar de objetivos iba incrementando el tamaño de la muestra al utilizar los distintos objetivos ya mencionados.Todas las muestras al cambiar de objetivo se tenía que enfocar ajustando la platina para eso se usaban loa tornillos macrométrico y micrométrico.También el moviendo de derecha a izquierda o asía al frente, esto también sirve para mover la muestra y poder explorar en todo el campo.

Conclusión:Al elaborar esta práctica hemos llegado a concluir que ya hemos aprendido lo básico y fundamental de las partes y el sistema del microscopio, así como saber montar y enfocar diferentes muestras problemas así como acomodar el microscopio en una forma cómoda para su uso.

ReferenciasAlfonso, S. (marzo de 2012). Biología celular, Recuperado el marzo de 2016, de Biología,

Educación Ambiental, Química y Talleres: http://biologia-sergio.blogspot.mx/2011/05/son-3-videos-teoria-celular-celula-es.html

Cañas, A. (01 de 2015). ongas, material de clases Recuperado el marzo de 2015, de Dra. Ana Cañas: https://anacanas.files.wordpress.com/2015/01/ondas.pptx

Cañas, A. (01 de 2015). Tinciones, material de clases Recuperado el marzo de 2016, de Dra. Ana Cañas: https://anacanas.files.wordpress.com/2015/01/tinciones.pptx

Vega, L., & Ortega, C. (08 de 2015). Practica 3 Recuperado el marzo de 2016, de Dra. Ana Cañas: https://anacanas.files.wordpress.com/2015/08/prc3a1ctica-32.pdf

CUESTIONARIODefina longitud de onda, espectro visible, resolución y apertura numérica.

Longitud de onda: es la distancia que hay entre una y otra cresta que esta se encuentra en la misma altura.

Espectro visible: se le llama a la región del espectro electromagnético que el ojo humano es capaz de ver.

Resolución: es la calidad de la imagen Para ello depende de objetivo, condensador y la amplitud del cono de iluminación.

Apertura numérica: es una función de su capacidad de colocar la luz.

1. ¿Cuál es la importancia del uso del condensador? Sirve para regular la concentración de la luz y para que la muestra sea más

clara y mejor visible.

2. ¿Qué diferencia hay entre el ojo humano, microscopio óptico y microscopio electrónico?

La diferencia es la unidad de medida en que en ojo humano y los microscopio.

El ojo humano tiene un límite de resolución de aproximadamente 0.5 mm Microscopio óptico tiene una resolución máxima de 0.5 μm Microscopio electrónico tiene un resolución máxima de 10 nm

3. ¿Para qué se emplea el microscopio de campo oscuro, el microscopio de contraste de fases y el microscopio de fluorescencia? ¿Qué es microscopia led?

Microscopio de campo oscuro: se emplea para ver células vivas como bacterias, protozoarios. La cual no es necesario ponerle algún reactivo.

Microscopio de contraste de fases: se usa para observar estructuras transparentes sin teñir ya que es fácil la observación de células vivas, y ver y saber su morfología y funciones.

Microscopio de fluorescencia: se emplea para obtener imágenes profundas y para reconstruir imágenes tridimensionales con unas imágenes más reales y más profesionales.

4. Explique qué son tinciones simples y qué son tinciones diferenciales y dé 2 ejemplos de cada una de ellas

Tinciones simples: son aquellas tinciones que nada más contienen un solo colorante.

Ejemplo: azul de metileno y lugol. Tinciones diferenciales: son tinciones que contiene más de un colorante o

reactivo y se usa para distinguir células y tiene s forma de tinción. Como aplicar primero el colorante, luego lavar y por ultimo lavar.

Ejemplo: safranina, Gram.5. ¿Por qué existen objetivos con diferentes aumentos?

Una de las razones podría ser para observar a varias magnitudes la muestra a analizar, otra de las cosas puede ser porque hay diferentes tipos de muestras a observar y dependiendo de lo que se desea ver es el aumento que se debe utilizar.

6. ¿Le sirvieron en la presente práctica? Si Ya que con los distintos objetos mencionados anteriormente son los que se

usaron para ver las muestras, además tenemos más interacción con el microscopio, el cual nos ayudara a quitarnos el miedo, utilizarlo y manipularlo con más confianza.

7. ¿Qué dificultades se presentarían si se iniciara un enfoque de muestra con la lente de mayor aumento?

Es más difícil enfocar, puede llevar más tiempo y se puede perder el enfoque y comenzar de nuevo. Por eso recomendable comenzar con el objetivo 4x hasta llegar a 100x si es el caso de que se utilice.

8. ¿Por qué debe emplearse aceite de inmersión con el objetivo de 100X? Por qué es la resolución que puede acercarse o ver más granes la muestra

a observar. Al aumentar la imagen se distorsiona, y cuando le ponemos el aceite de inmersión nos ayuda a ver la muestra con más claridad y definidas.

Anexos

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Corregido y cotejado por el equipo QFB en proceso

Figura 7. Cabello, objetivo 10x, foto: Ovando, 2016 con cámara celular ALCATEL

Figura 9. Cabello, objetivo 10x, foto: Ovando, 2016 con cámara celular ALCATEL

Figura 10. Cabello, objetivo 40x, foto: Ovando, 2016 con cámara celular ALCATEL

Figura 11. Apio, objetivo 40x, foto: Ovando, 2016 con cámara celular ALCATEL

Figura 12. Apio, objetivo 40x, foto: Ovando, 2016 con cámara celular ALCATEL